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饲料添加剂(I)粪肠球菌质量内控标准-提供伟嘉版本

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饲料添加剂(I)粪肠球菌质量内控标准-提供伟嘉版本饲料添加剂(I)粪肠球菌质量内控标准-提供伟嘉版本 DBNF-SW-5-Y005 北京大北农科技集团股份有限公司内控标准 饲料添加剂(?)粪肠球菌质量内控标准 2013-6-16发布 2013-7-1实施 北京大北农科技集团股份有限公司 发布 前 言 本标准由北京大北农科技集团股份有限公司提出并起草。 本标准主要起草人:刘雪连 本标准于2013年7月首次发布 饲料添加剂(?)粪肠球菌质量内控标准 1 范围 本标准规定了粪肠球菌产品的要求、检验方法、检验规则、标签、包装、运输和贮存。 本标准适用于本公...

饲料添加剂(I)粪肠球菌质量内控标准-提供伟嘉版本
饲料添加剂(I)粪肠球菌质量内控标准-提供伟嘉版本 DBNF-SW-5-Y005 北京大北农科技集团股份有限公司内控标准 饲料添加剂(?)粪肠球菌质量内控标准 2013-6-16发布 2013-7-1实施 北京大北农科技集团股份有限公司 发布 前 言 本标准由北京大北农科技集团股份有限公司提出并起草。 本标准主要起草人:刘雪连 本标准于2013年7月首次发布 饲料添加剂(?)粪肠球菌质量内控标准 1 范围 本标准规定了粪肠球菌产品的要求、检验 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 、检验规则、标签、包装、运输和贮存。 本标准适用于本公司生产的粪肠球菌饲料添加剂。 2 规范性引用文件 下列文件对本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注明日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 4789.3-2003 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定 GB/T 14699.1-2005 饲料 采样 GB/T 5917.1-2008 饲料粉碎粒度测定法 GB/T 6435-2006 饲料中水分的测定 GB 10648 饲料标签 GB/T 13079-2006 饲料中总砷的测定 GB/T 13080-2004 饲料中铅的测定 原子吸收光谱法 GB/T 13091-2002 饲料中沙门氏菌的检验方法 GB/T 14699.1-2005 饲料采样方法 GB/T 18823-2002 饲料检测结果判定的允许误差 JJF 1070-2005 定量包装商品净含量计量检验规则 国家质量监督检验检疫总局第75号令(2005)定量包装商品计量监督 管理办法 关于高温津贴发放的管理办法稽核管理办法下载并购贷款管理办法下载商业信用卡管理办法下载处方管理办法word下载 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 杂菌数 指在选择培养基上,除粪肠球菌外的其他细菌和霉菌菌落数之和。 3.2 杂菌率 指杂菌数在目的菌种数和杂菌数之和中所占百分率。 4 要求 4.1 感官指标 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1粪肠球菌的感官要求 产品名称 杂质 外观 色泽 气味 项目指标 淡黄色至黄具有乳酸特有的酸甜味,无腐败,无异物 粉末状 DBN粪肠球菌原粉 褐色粉状 无异臭味 溶解度大淡黄色至黄具有乳酸特有的酸甜味,无腐败,于95%,无粉末状 DBN粪肠球菌可溶原粉 褐色粉状 无异臭味 异物 乳白色至淡具有乳酸特有的酸甜味,无腐败,无异物 颗粒状或条状 DBN粪肠球菌菌粒 黄色颗粒状 无异臭味 4.2 理化指标 理化指标应符合表2的规定。 表2粪肠球菌理化指标 孔径 水分 粪肠球菌活菌数 产品名称 8? (×10个/g)? 项目指标 DBN粪肠球菌原粉 7% 500 DBN粪肠球菌可溶原粉 7% 500 DBN粪肠球菌菌粒 0.8mm 10% 500 4.3 卫生指标 标准名称卫生指标应符合表3的要求。 表3 粪肠球菌卫生指标 项目 指标 杂菌率? 0.1% 致病菌(肠道致病菌或致病性球菌) 不得检出 总砷(以As计)(mg/kg) ?2.0 铅(以Pb计)(mg/kg) ?5.0 其它卫生指标 符合NY/T 1444 2007中4.1.3的规定 4.4 净含量 按国家质量监督检验检疫总局第75号令执行。 5 检验方法 本标准使用的水,在未注明其他要求时,应符合GB/T 6682中三级用水的要求。 本标准所使用的试剂,在未注明规格时,均为 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 纯(AR)。如有特殊要求另作明确规定。 5.1 抽样 按GB/T 14699.1-2005的规定,进行样品的采集。采样时必须特别注意样品的代表性 和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具,如灭菌牛皮纸袋或广口瓶,金属 勺和刀。在卫生学调查基础上,采取有代表性的样品。样品采集后应立即进行检验。 5.2 感观检验 取一定量(固态250g、液态250ml)的样品于无色玻璃杯中,采用目测、鼻嗅的方法 进行检验。 5.3 水分测定 按GB/T 6435-2006规定方法测定。 5.4 成品粒度测定 按GB/T 5917.1-2008规定方法测定。 5.5粪肠球菌检测 按附录A(规范性附录)执行。 5.6 卫生检测 5.6.1砷含量测定 按GB/T 13079-2006规定执行。 5.6.2 铅含量测定 按GB/T 13080-2004规定执行。 5.6.3 霉菌检测 按GB/T 13092规定执行。 5.6.4 细菌总数 按GB/T 13093规定执行。 5.6.5 致病菌检测 按GB/T 13091-2001、GB/T 4789.5-2008和GB/T 4789.10-2003规定执行。 5.6.7 杂菌率 霉菌数,(细菌总数-目的菌数)杂菌率,,100%计算公式: 霉菌数,细菌总数 5.7 净含量 按JJF 1070-2005规定执行。 5.8 监测与仲裁判定 检测结果判定的允许误差按GB/T 18823-2002规定执行。 6 检验规则 6.1 检验分类 产品的检验分为出厂检验和型式检验两类。 6.2 组批与取样 6.2.1 组批:同品种、同一生产线、同一天内生产的同一批料为一批。 6.2.2取样:按GB/T14699-2005方法取样,每批产品包装袋数为1-4时,每袋取样;每批产品包装袋数为5-16袋时,最少取4袋;每批产品包装袋数大于16袋时,最少取袋。2n每批取样量不少于0.5kg。 6.3 出厂检验 感官指标、水分、粒度、微生物含量(含活菌数和杂菌率)指标为出厂检验项目,产品出厂前必须由公司质检部门检验合格并出具合格证,方可出厂。 6.4 型式检验 6.4.1一般情况下,企业半年进行一次型式检验。但有下列情况之一时,亦须进行型式检验。 a)产品成批出厂前; b)原料、配方、生产工艺及设备有重大变化时; c)产品停产3个月以上需要重新恢复生产时; d)国家质量监督机构要求进行质量抽查时。 6.4.2 型式检验项目:第4章所规定的全部项目。 6.5判定规则 6.5.1 在保证产品质量的前提下,生产厂可根据工艺、配方、设备、原料等变化情况,自行确定出厂检验的批量。 6.5.2检验时如产品已霉烂变质、有明显结块或有致病菌检出,卫生指标不合格,则判定该批产品为不合格产品,不得复检; 6.5.3 活菌指标若低于表2规定值的80%者为不合格项,允许在原样本中加倍取样复检,以复检结果为依据。若仍有不合格项,则判定该批产品为不合格产品。 7 标签、包装、运输、贮存、保质期 7.1 标签 采用鲜明的标签贴于外包装,标签内容应符合GB 10648的规定要求。 7.2包装 包装为铝箔袋、纸箱包装或纸塑复合袋包装。包装应符合运输和贮存的要求。 7.3 贮运 贮运过程中防雨、防潮、防止日光暴晒。不得与有毒有害或其它污染物品混装、混运。 7.4 贮存 产品应贮存在凉爽、通风、干燥的库房内,或阴凉贮存。不得与有毒有害或其它污染物品混贮。 7.5保质期 在符合贮存运输的条件下,自生产日期起保质期为12-15个月。 附录A (规范性附录) 粪肠球菌检测方法 A1 范围 生产分析和质量控制部门适用。 A2 原理 细菌呈球状、球杆状,0.5-0.8μm,常成对或短链状排列,无芽孢,革兰氏染色阳性。在血平板上 菌落呈针尖大小、灰白色、圆形、表面光滑凸起、溶血。在葡萄糖肉汤中呈均匀混浊生长。 革兰氏阳性,过氧化氢酶呈阴性,能在6.5%氯化钠肉汤、pH9.6葡萄糖肉汤及45?生长,能分解 葡萄糖产酸不产气,发酵山梨醇,不发酵阿拉伯糖,硝酸盐还原阴性,精氨酸双水解阳性,最适生长温 度36?,最适pH4.7-7.6。 A3 试验方法 A3.1 仪器设备和材料 A3.1.1 生物显微镜(10×100) A3.1.2 菌落计数器 A3.1.3 恒温培养箱(36?1?) A3.1.4 恒温干燥箱 A3.1.5 恒温摇床 A3.1.6 灭菌锅 A3.1.7 无菌室或超净工作台 A3.1.8 酸度计 A3.1.9 架盘药物天平:0-500g,精度至0.5g A3.1.10 试管:Ф15mm×150mm Ф18mm×180mm A3.1.11 灭菌培养皿:直径9cm A3.1.12 三角瓶:500ml A3.1.13 无菌吸管:1ml(具有0.01ml刻度) 5ml,10ml(具有0.1ml刻度) A3.1.14 玻璃刮刀或L型玻璃棒(涂布棒) A3.1.15 灭菌牛皮纸袋或广口瓶,金属勺和剪刀 A3.1.16 酒精灯 A3.1.17 载玻片 A3.1.18 镊子 A3.1.19 接种环、接种针 A3.1.20 均质器或微型振荡箱 A3.2 培养基和试剂 A3.2.1 除特别注明外,试验中所有试剂为分析纯试剂,水为蒸馏水或相应程度的水,溶液为水溶液。 ) A3.2.2 BPY琼脂培养基(配置方法见附录B1 A3.2.3 血琼脂培养基(配置方法见附录B2) A3.2.4 pH9.6的肉汤培养基(配置方法见附录B3) A3.2.5 耐盐试验培养基(配置方法见附录B4) A3.2.6 40%胆汁肉汤培养基(配置方法见附录B5) A3.2.7 糖类发酵培养基(配置方法见附录B6) A3.2.8 硝酸盐培养基(配置方法见附录B7) A3.2.9 索恩利氏培养基(配置方法见附录B8) 配置方法见附录B9) A3.2.10 革兰氏染色液( A3.2.11 解囊液(配置方法见附录B10) A3.2.12 乳酸纸层析法(配置方法见附录B11) A3.2.13 格里斯氏试剂(配置方法见附录B12) A3.2.14 二苯胺试剂(配置方法见附录B13) A4 粪肠球菌菌落数检测 A4.1 检验程序如下 检 样 ? 用无菌水做成几个适当倍数稀释液 ? 选择2-3个适当稀释度各0.1ml,加入富集培养基平皿 ? 36?1? 培 养24小 时 ? 菌 种 鉴 别 检 验 ? 菌 落 计 数 ? 报 告 A4.2 操作步骤 A4.2.1 采样 A4.2.1.1采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具, 如灭菌牛皮纸袋或广口瓶,金属勺和刀,采取有代表性的样品,样品采集后应尽快检验,否则应将样品 放在低温干燥处。 A4.2.1.2以无菌操作称取经过充分摇匀的待检样10克移入含有90毫升解囊液(按本标准附录B10规定 执行)的灭菌三角瓶内,并于振荡器中恒温振荡培养器中36?,200rpm预处理30分钟,做成1:10的均 匀稀释液,混合均匀。 A4.2.1.3用无菌吸管吸取1:10稀释液1.0ml加到含有9.0ml无菌水的试管中,并于微型振荡器中8000-10000转/分钟处理2-3分钟,充分摇匀制成1:100的稀释液。 A4.2.1.4 用无菌吸管吸取4.2.1.3的稀释液1.0ml加到含有9.0ml无菌水的试管中,进行10倍梯度稀释,并于微型振荡器上混合3min。每个稀释度换用一支1.0ml灭菌吸管,按上述操作程序进行10倍递 -8增稀释直至10。 A4.2.2 平板计数法 A4.2.2.1估计样品的含菌量,选择三个连续稀释度,分别在作10倍稀释的同时,各取0.1ml分别加到计数培养基平皿,均匀涂布,各个稀释度作3个平皿,最好同时作2种培养基,同时作无菌水空白对照。以上操作全过程需在20min内完成。 A4.2.2.2 将平板倒置于36?恒温中培养,培养24小时后观察菌落特征。 A4.2.2.3 选取具有30-300个典型菌落的平板,进行计数。并计算同一稀释度三个平板的平均菌落数。 A4.2.2.4根据证实试验确定为粪肠球菌的菌落数,按比例计算出该皿内的粪肠球菌的菌落数,然后乘其稀释倍数再乘以10,即得每克(或ml)样品所含粪肠球菌数并作出报告。 -6例:将检样10稀释液0.1ml涂布于选择富集培养基平板上,生成的可疑菌落数为35个,取5个 6进行鉴定,证实为菌粪肠球菌菌的是4个,则1g样品中菌粪肠球菌菌数为(35×4/5)×10×10=1.2 8×10。 A4.2.2.5计数后,将可疑菌落、目标菌落分别接种于营养琼脂斜面,与37?培养24小时,进行粪肠球菌鉴定试验。 A5 粪肠球菌的鉴定 A5.1在pH9.6的肉汤培养基上的生长试验 挑取A4.2.2.5小节中选定菌落的菌苔,接种葡萄糖肉汤(pH9.6)液体培养基,并将未接种的空白作对照,于36?培养18—24小时,观察生长情况,培养基有混浊物为阳性。粪肠球菌能够在pH9.6的肉汤培养基上的生长。 A5.2耐盐试验 挑取A4.2.2.5小节中选定菌落的菌苔,接种耐盐培养基,并将未接种的空白作对照,于35?培养3-7天,与未接种的对照管对比,观察培养液的混浊情况, 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 试验结果。粪肠球菌能够在6.5%NaCl的培养基上生长。 A5.3 耐胆盐试验 挑取A4.2.2.5小节中选定菌落的菌苔,接种40%胆汁肉汤(pH9.6)液体培养基,置35?培养24-48小时,观察有无细菌生长。阳性菌呈颗粒状生长,上液澄清,管底有沉淀;阴性菌则不生长。粪肠球菌为阳性,可以生长。 A5.4 葡萄糖产酸和产气试验 挑取A4.2.2.5小节中选定菌落的菌苔,接种乳酸菌葡萄糖发酵培养基,并将未接种的空白作对照,于36?培养2 -3天,观察记录。若产酸则培养基变黄色,并可用pH计测定pH值,用纸层析法检查是 -4.6,否为乳酸。若产气则德培拉姆氏小试管中有气泡。粪肠球菌发酵葡萄糖产乳酸不产气,pH可达4.1发酵山梨醇,不发酵阿拉伯糖。 A5.5 硝酸盐还原试验 挑取A4.2.2.5小节中选定菌落的菌苔,种硝酸盐培养基,并将未接种的空白作对照,于35?培养3天,在干净的比色瓷盘小窝中倒入少许已接种培养的培养液,再滴一滴格里斯氏试剂的A液及B液。在对照中同样加入格里斯氏试剂的A液及B液各一滴。观察并记录溶液是否变色,若变红色则为阳性,若无红色出现,再加入一滴二苯胺试剂,如溶液变为蓝色则为阴性,不变蓝色,则为阳性。粪肠球菌为硝酸盐还原阴性。 A5.6 精氨酸双水解酶测定试验 挑取A4.2.2.5小节中选定菌落的菌苔,穿刺接种索恩利氏培养基,并用灭菌的凡士林油封管,并将未接种的空白作对照,于35?培养3、7、14日观察,培养基转为红色者为阳性,不变者为阴性。粪肠球菌的精氨酸双水解酶测定试验呈阳性。 A5.7 结果解释及报告 符合粪肠球菌群的特征,有较强的耐盐性、耐胆碱性、能在pH9.5的培养基上很好的生长、葡萄糖发酵产酸不产气、发酵山梨醇、不发酵阿拉伯糖、硝酸盐还原阴性、精氨酸双水解酶测定试验呈阳性,则可报告为粪肠球菌。 对偶尔遇到的一些少数可疑菌株,可以根据需要进行其他试验。 附录B (规范性附录) 专用培养基和试剂 B1 BPY琼脂培养基 葡萄糖 5g 酵母膏 5g 氯化钠 5g 大豆蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 碳酸钙 0.7g 蒸馏水 1000mL 按以上配方配制培养基,溶解后用40%的氢氧化钠溶液调pH为6.8-7.0,高温蒸汽灭菌锅121?, 20min灭菌。 B2 血琼脂培养基 蛋白胨 10g 葡萄糖 2g 氯化钠 5g 磷酸二氢钾 2.5g 柠檬酸钠 5g 脑浸汁 800ml 猪心浸汁 200ml 羊血 10% pH 7.2 注:猪心和猪脑浸汁法: (1)新鲜猪心除去心头和脂肪,搅碎100克加蒸馏水至1000ml; (2)新鲜猪脑除去血管,取200g加蒸馏水至1000ml; (3)50?保温1小时,然后煮开15min; (4)冷却后用纱布过滤备用。 B3 pH9.6的肉汤培养基 pH9.6的肉汤 100ml 葡萄糖 2g/L 注:将普通肉汤调整pH9.6,加入葡萄糖溶解后,分装试管,每管2,3ml,121?灭菌15min,备用。 B4 耐盐培养基 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 氯化钠 65g 蒸馏水 1000ml 将上述成分溶解后,调节pH7.0,分装试管,高压灭菌121?15min,20min,冷至45?,备用。 B5 40%胆汁肉汤培养基 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 牛肉浸膏 5g 新鲜胆汁(猪、牛) 400ml 蒸馏水 600ml 先将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠加热溶于蒸馏水中,调pH至7.6,加入胆汁混匀后,分装试管,每 管3ml,置115?灭菌20min,冷藏备用。取新鲜猪(牛)胆若干只,取胆汁用纱布过滤,装于瓶中115? 灭菌20min,冷却后置4?冰箱内,次日取出吸取上清液备用。 B6 糖类发酵培养基 B6.1 基础培养基 蛋白胨 1% 酵母膏 0.5% 吐温80 0.1%(v/v) 盐溶液A 0.5%(v/v) 盐溶液B 0.5%(v/v) 溴甲酚紫(1.6%水溶液) 约1.4ml 盐溶液A: KHPO 10g 24 KHPO 10g 24 蒸馏水 100ml 盐溶液B: MgSO?7HO 11.5g 42 MnSO?2HO 2.4g 42 FeSO?7HO 0.68g 42 蒸馏水 100ml B6.2 以上成分溶解后调pH到6.8-7.2,分装试管。121?高压灭菌20-30min。 B6.3 葡萄糖、阿拉伯糖、山梨醇各10g B6.4 将山梨醇和阿拉伯糖配制成10%的水溶液,经过滤灭菌后用无菌操作加到无菌基础培养基中。 硝酸盐培养基 B7 牛肉蛋白胨培养基 1000ml KNO3 1g 培养基配制好后,调节pH7.0-7.6,分装试管,每管4-5ml,121?蒸汽灭菌15-20min,冷至45?, 备用。 B8 索恩利氏培养基 蛋白胨 1g NaCl 5g KHPO0.3g 24 洋菜 6 g 酚红 0.01g L-精氨酸盐 10g 蒸馏水 1000ml 将以上成分加热溶解,调节pH7.0-7.2,分装试管,每管4-5ml,121?蒸汽灭菌15-20min, 冷至 45?,备用。 B9 革兰氏染色法 B9.1 结晶紫染色液 结晶紫 1g 95%乙醇 20ml 1%草酸铵水溶液 80ml 将结晶紫溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。 B9.2 革兰氏碘液 碘 1.0g 碘化钾 2.0g 蒸馏水 300.0ml 将碘与碘化钾先行混合,加入蒸馏水少许充分振荡,待完全溶解后,再加蒸馏水至300ml. B9.3 沙黄复染液 沙黄 0.25g 95%乙醇 10.0ml 蒸馏水 90.0ml 将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。 B9.4 染色 B9.4.1 将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗。 B9.4.2 滴加革兰氏碘液,作用1min水洗。 B9.4.3 滴加95%乙醇脱色约15-30s,或将乙醇滴满整个涂片,立即倒去,再用乙醇滴满整个涂片,脱色10min. B9.4.4 水洗,滴加复染液,复染1min,水洗、待干、镜检。 B9.4.5 结果 革兰氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色。 B10 解囊液 柠檬酸9.6g,磷酸氢二钠14.2g加蒸馏水至1000ml,调节pH 至7.5,分装,121?,15min灭菌,备用。 B11 乳酸纸层析法 B11.1 展开剂:水、乙醇、正丁醇以1:5:5的量相混合,然后加1%的甲酸。 B11.2 显色剂:0.04%的溴酚蓝酒精溶液,用0.1%的NaOH调pH到6.7。 B11.3 1mol/L乳酸标准溶液:吸取分析纯乳酸8.4ml,移入100ml容量瓶中,加蒸馏水至刻度,备用。 B11.4 0.1mol/L乳酸标准使用液:将1mol/L乳酸标准溶液稀释至0.01mol/L。 B11.5 点样 选择大小合适的国产新华滤纸,在滤纸下方距边约3cm处划条横线,每隔2.5-3cm划一点作为点样位置,并表明点样编号。用干净的毛细管沾取样品点样,每点一次样品用吹风机吹干,0.01mol/L乳酸标准使用液为对照。 B11.6 层析 将点好样的滤纸放入层析缸,先用展开剂饱和一夜,然后加展开剂开始层析。上行25cm左右取出晾干,喷显色剂,并与对照比较黄色斑点的位置,确定是否是乳酸。 B12 格里斯氏试剂 A液:将对氨基苯磺酸0.8g,溶解于2.5mol/L乙酸溶液100ml; B液:将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100ml中。 B13 二苯胺试剂 将二苯胺0.5g溶于100ml浓硫酸中,用20ml蒸馏水稀释。
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