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蛋白质结晶之Tips P——蛋白酶抑制剂.doc

蛋白质结晶之Tips P——蛋白酶抑制剂.doc

上传者: 曾经的纯真渐渐褪去 2017-11-17 评分 0 0 0 0 0 0 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《蛋白质结晶之Tips P——蛋白酶抑制剂doc》,可适用于自然科学领域,主题内容包含蛋白质结晶之TipsP蛋白酶抑制剂P代表蛋白酶抑制剂(ProteaseInhibitors)蛋白酶可以水解蛋白质得到小的有活性的蛋白片段。这些小片段符等。

蛋白质结晶之TipsP蛋白酶抑制剂P代表蛋白酶抑制剂(ProteaseInhibitors)蛋白酶可以水解蛋白质得到小的有活性的蛋白片段。这些小片段的蛋白溶解性更好一定意义上来说更容易结晶。但是蛋白酶并不总是有益的许多时候它是麻烦制造者。无论是纯化天然的蛋白还是表达重组蛋白分离和纯化的过程中蛋白酶常常会污染样品。当准备结晶的样品时如果被蛋白酶污染了可以考虑添加蛋白酶抑制剂来防止它将样品降解掉。如果你的实验楼里有微生物,植物,或者其他涉及到真菌或细菌的实验室就要考虑在你的样品中添加蛋白酶抑制剂了。为什么呢因为一旦你的样品试剂或者结晶用的板子等被真菌或细菌污染了这些微生物会分泌蛋白酶将目的蛋白降解作为它们的食物。一些人喜欢在所以试剂中加入叠氮化钠或者麝香草酚作为抑菌剂但是这两种物质是有毒的并且某些情况下会与样品有结合还有可能与重金属原子有拮抗作用因此这并非防止蛋白酶污染的上策。保证实验环境的洁净使用灭菌的器材和试剂加上良好的操作技术防止样品被污染并非难事。回到蛋白酶抑制剂的主题上来常用的抑制剂有:蛋白酶类型:金属蛋白酶抑制剂:EDTAEGTAbestatin,amastatin,thiolderivatives异羟肟酸phosphoramidon蛋白酶类型:天冬氨酸蛋白酶抑制剂:Pepstatinsandstatinderivedinhibitors蛋白酶类型:半胱氨酸蛋白酶抑制剂:Thiolbindingreagents,peptidyldiazomethanes,epoxysuccinylpeptides,cystatins,peptidylchloromethanes蛋白酶类型:大多数蛋白酶抑制剂:DEPC蛋白酶类型:丝氨酸蛋白酶抑制剂:Trypsininhibitors,leupeptin,boronicacids,cyclicpeptides,DIFP,PMSF,Pefabloc,aminobenzamidine,,dichloroisocoumarin,chymostatin附原文:Proteolyticmodificationofproteinscanbeatoolformakingsmallactivefragmentsofproteins,whichmighthaveenhancedsolubilitycharacteristicscomparedtothenativeprotein,whichinturnmightmaketheproteinmoreamenabletocrystallizationHowever,proteasescanalsobetroublemakerswhentheyareuninvitedgueststoaproteinsampleWhenproteasecontaminationcanbeaproblem,onecanconsideraddingaproteaseinhibitortopreventcleavageofthesamplebythesenastyproteasesProteasecontaminationcanoccurwhenthesenastybeastsarecarriedoverfromisolationandpurificationofthesamplefromanaturalsourceorexpressedproteinsAlso,ifyourlabissituatedinanarea(onthesamefloor,building,etc)wheremicrobialresearch,plantresearch,orotherworkinvolvingthepossiblegenerationoffungalandbacterialorganismsispossible,thenonemightconsideraddingproteaseinhibitorstothesampleforprotectionWhyThepresenceoffungalormicrobialcontaminationinyoursample,reagents,orcrystallizationrelatedplates,capillaries,etccanleadtogrowthofsuchorganismswithsubsequentreleaseofproteasesfromtheseorganismssotheycanuseyourinnocentlittlesampleforfoodSomecrystalgrowersliketoincludesodiumazideorthymolinalltheirreagentsandsampleasadeterrenttomicrobialgrowth,whichpreventsthepossibilityofmicrobialagentsgrowingandsecretingproteasesintothesamplesolutionButsodiumazideandthymolcansometimesbindthesample,aretoxic,andinsomecasesdonotlivewellwithheavyatomssosomefeelitisnotwisetosimplyincludetheseagentsasamultivitamininthecrystallizationcocktailRather,cleanworkspace,sterilefilteredsamplesandreagents,sterilepipettips,andgoodtechniquegoalongwaytopreventingmicrobialcontaminationWell,backtothePforProteaseInhibitorsHereareafewproteaseinhibitorsandtheirtargetsProtease:MetalloproteasesInhibitor:ChelatorslikeEDTAandEGTA,bestatin,amastatin,thiolderivatives,hydroxamicacid,phosphoramidonProtease:AsparticAcidProteasesInhibitor:PepstatinsandstatinderivedinhibitorsProtease:CysteineProteasesInhibitor:Thiolbindingreagents,peptidyldiazomethanes,epoxysuccinylpeptides,cystatins,peptidylchloromethanesProtease:MostInhibitor:DEPCProtease:SerineProteasesInhibitor:Trypsininhibitors,leupeptin,boronicacids,cyclicpeptides,DIFP,PMSF,Pefabloc,aminobenzamidine,,dichloroisocoumarin,chymostatin

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