衍生化荧光分光光度法测定硫酸小诺霉素含量

衍生化荧光分光光度法测定硫酸小诺霉素含量 衍生化荧光分光光度法测定硫酸小诺霉素 含量 '中国医药研究>第2卷第2期(总第3期)2OO4年4月 衍生化荧光分光光度法测定硫酸小诺霉素含量 中图分类号ILO27.2 李忻?于倩? 文献标识码B文章编号1729—9306(2004)02-一0054—02 部标WS-212—87中测定硫酸小诺霉素含量,采用的仍是经 典的微生物法测定其含量,这种测定方法需要较长时间,细菌 培养至少需要18小时左右,而且不同实验室难于获得一致结 果.亦有报道,宓晓黎|4等人用HPLC法测定其发酵产物的 含量.小诺霉素本身不能发射荧光,但和荧光衍生化试剂邻苯 二甲醛(OPA)行胺缩醛反应后,即能吸收特定波长的紫外线, 发射荧光.本法即利用此种机理,进行了小诺霉素(MCR)含量 测定方法的探讨,并与衍生化紫外分光光度法和RP-HPLC 法进行了比较,实验证明本法准确性高,重现性好,快速,简 便,易为一般医院,药厂接受.现报道如下. 1试剂与仪器 硫酸小诺霉素 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品:由吉林省药品检验所提供,效价为 608u/mg. 化学试剂:硼酸,氢氧化钾,乙酸乙脂,甲醇,无水亚硫酸氢 钠,EDTA-2K,以上试剂均为 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 纯(AR).邻苯二甲醛,2.巯基 乙醇,三蒸馏水. RF-510岛津荧光分光光度仪,附DP-80Z打印系统; AEL-200型湘仪.岛津电子分析天平,附EP-50打印系统; 涡漩式混合器;80-2型离心沉淀机;25型酸度计;恒温水 浴箱. 2试液的配制 2.1标准贮备液精密称取硫酸小诺霉素标准品 16.45mg,置于100ml洁净容量瓶中,加适量三蒸馏水,振摇使 其溶解,然后用三蒸馏水稀释至刻度,即为100u/ml的硫酸小 诺霉素标准贮备液. 2.2邻苯二甲醛(OPA)试液的配制称取硼酸1g,溶 于38ml水,用氢氧化钾溶液(450g/L)调至pH10.4;另称取OPA 200mg,用2ml甲醇溶解,加入0.4ml2-巯基乙醇.两种溶液混 匀,充氮气避光4~C保存. 3实验方法的建立 3.1测定波长(,)的选择试样A:精密吸取100 u/ml的标准贮备液0.15ml,置于lOml具塞刻度离心管中,加三 蒸馏水0.35ml,加OPA试液0.5ml,摇匀,置于25?水浴中暗处 反应10分钟,取出,加乙酸乙酯5ml,涡漩混合器上振荡30秒 钟,250O转/分离心5分钟. 试样B:以三蒸馏水代替标准贮备液,其余操作同上. 取试样B的上层有机相为空白对照,与试样A的上层有 机相分别在300,400nln,375,50Ohm间进行扫描,绘制荧光衍 生物的荧光激发光谱和发射光谱,=345nm,=425nm. 3.2操作步骤精密吸取样品溶液适量,置于10ml具塞 ?吉林大学中日联谊医院长春市130033 ? 54? 刻度离心管中,加三蒸馏水至0.5ml,加OPA试液0.5nil,振摇 均匀,置25?水浴中暗处反应10分钟,加5rrd乙酸乙酯,涡漩 混合30秒,25o0转/分离心5分钟.并同时用三蒸馏水代替样 品溶液平行操作,作为空白对照.吸取上层有机相在 345lun,425lun,灵敏度x1条件下测定荧光强度F. 3.3衍生物稳定性考察精密吸取标准贮备液0.1ml,按 "操作步骤"项下操作.吸取上层有机相分别在即刻,15分钟, 30分钟,6o分钟,120分钟测定荧光强度,分别为:98.4,98.5, 97.0,92.6,86.8,由此可见,衍生物至少在30分钟内是稳定的. 4实验步骤 4.1标准曲线的绘制精密吸取标准贮备液6fd,12fA, 24td,4896,120td,150ta,按"操作步骤"项下操作,吸取上层 有机相在345lun,425nm测定荧光强度,得回归方程: F(荧光强度)=50.7044C(u/mD一4.4174,r=0.9997 结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明:小诺霉素浓度在0,3u/nil范围内与荧光强度 成正比. 4.2样品测定取硫酸小诺霉素注射液0,1n1l,置25?ll 洁净容量瓶中,用三蒸馏水稀释至刻度,再取此液5O,按"操 作步骤"项下操作,每批取样5次,观测三批,结果见表1. 表1样品测定结果(,l=5) 5方法的 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 5.1回收率试验精密称取硫酸小诺霉素标准品适量, 按处方配制注射液依法测定,结果见表2. 表2回收率试验结果(,l=5) 5.2Et内,Et问变异取标准贮备液0.1ml,4份,按"操 作步骤"项下操作,得均数为10.04u,Et内变异0.372%. ChineseMedicineStudyVol2,No.2(sumNo.3)Apr.2OO4 在1,2.4天分别取标准贮备液0.1ml,按"操作步骤"项下 操作,得均数为10.10u,日间变异0.96%. 5.3几种方法的比较取不同批号的硫酸小诺霉素注射 液分别用本法,衍生化紫外分光光度法和高效液相色谱法进行 含量测定,结果见表3. 表3三种方法测定硫酸小诺霉素含量的比较 5.4干扰实验分别取盐酸洁霉素,硫酸卡那霉素,硫酸 庆大霉素,硫酸链霉素各注射液适量,按本法测定,结果表明: 洁霉素,链霉素对本法无影响,而庆大霉素,卡那霉素对本法有 影响. 6讨论 6.1实验用具塞刻度离心管必须用30%硝酸溶液浸泡 24小时,以消除荧光杂质.否则得不到准确可靠,重现性好的 结果. 6.2邻苯二甲醛(OPA)遇光,遇氧都不稳定,所以OPA试 液用毕后必须充氮气置4~C冰箱内避光贮放,一般可使用3—4 天,但最好能现用现配,这也是本法的缺点. 6.3本法测定的是化学等值结果,不能反映真实的生物 (中国医药研究》第2卷第2期(总第3期)2004年4月 等值,但用于药厂及医院对已知样品的含量测定则完全可行. 6.4本法不仅能用于小诺霉素各类制剂的含量测定,还 可以用于发酵中间体,原料药的质量控制. 6.5对硫酸小诺霉素注射液来说,处方量的附加剂亚硫 酸氢钠,EDTA对测定结果无影响. 6.6庆大霉素(GqWI),托普霉素(TOB),卡那霉素,丁胺卡 那霉素(AMIK),西梭霉素等均对MCR测定有干扰,必须在确 定待测样品是MCR时,才能准确定量. 致谢:本实验得到江苏省微生物研究所赵敏工程师的大力 协助,特此致谢. 参考文献 [1]范瑾,等.相模湾霉素的药理和临床研究.国外药学(抗生素分册), 1985,6(6):437—445 [2]赵敏,等.棘孢小单孢突变型菌株产生相模湾霉素的研究I.棘孢小 单孢茵JIM-401变株的鉴定.抗生素,1983,8(5):285—289 [3]范瑾,等.棘孢小单孢突变型菌株产生相模湾霉素的研究?.抗生素 JIM-401一B的分离和鉴别.抗生素,1984,9(2):94—98 [4]宓晓黎,等.国产相模湾霉素的高效液相色谱测定法.抗生素,1987, 12(1):28 [5]黄波,等.衍生化紫外分光光度法测定硫酸小诺霉素含量.待发表资 料 [6]黄波,等.反相高效液相色谱法测定硫酸小诺霉素含量.待发表资料 [7]安登魁,主编.药物分析第二版.北京:人民卫生出版社,1986,324 [收稿日期2004—01—263 中药治疗第五腰脊神经根病变综合症1例 李旭0 中图分类号R681.54文献标识码B文章编号1729—9306(2004)02—0055—01 患者男,54岁.自述1997年第五腰椎间盘突出手术治疗 愈后情况良好,并能从事轻体力劳动,2001年5月1日突发后 右腿疼痛,夜不能眠,经某院理疗,牵引后右腿疼痛基本消失, 后又找一医生按摩,第五天右腿又觉疼痛,第六天按摩完后右 腿疼痛难忍,走路跛行,合并右足下垂,于2001年6月3日来 我院诊治. 1检查 Lasegue氏测验(举腿试验)(十):Bonnet检查:Macey氏测 验,均符合腰间盘突出症状;伴有右足下垂;CT所见第五腰椎 间盘突出,右侧神经根受压,以上五项检查确诊为第五腰脊神 经根病变综合症. 2治疗 常规牵引,理疗一周,右侧坐骨神经痛消失,右足下垂依然 如故.自拟"神经再生灵"组方:川牛夕,川断,何首乌,穿山甲, ?黑龙江省铁力市铁力农场职工医院152/X~ OfineseMedicineStudyVol2,No.2(suIllNo.3)Apt.2O04 皂刺,威灵仙,黄柏,白芥子,木香,蜈蚣,淫羊藿,独活,百楠叶, 全蝎,熟附子,鹿角胶,当归等十七味中药.麝香少许为引.功 能:续接神经,强壮神经,疏通,营养神经.用法日一剂水煎分 服. 3方解 方中何首乌强壮神经,川断,蜈蚣等二味现代药理研究有 续接神经之功效,与其余药相配对续接强壮神经,疏通,营养神 经有良效. 4分析 笔者认为患者本为单纯性腰间盘突出,坐骨神经痛,但后 来由于采取按摩的手法太重或误治从而轻度挫伤神经,导致下 垂足,临床不多见.笔者在以前治疗脊椎骨折导致神经挫伤处 理的基础上,自拟用"神经再生灵"治疗此病,患者服用四剂后 右脚屈伸基本正常,病人满意,停止治疗.2002年1月3日随 访患者已正常,并能从事轻体力劳动. [收稿日期20O4—01—123 ? 55?