下载
加入VIP
  • 专属下载特权
  • 现金文档折扣购买
  • VIP免费专区
  • 千万文档免费下载

上传资料

关闭

关闭

关闭

封号提示

内容

首页 荧光光度法[资料]

荧光光度法[资料].doc

荧光光度法[资料]

何来地老天荒_
2017-12-09 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《荧光光度法[资料]doc》,可适用于综合领域

荧光光度法资料荧光分析法测定维生素B药片含量一实验目的掌握荧光分析法测定维生素B含量的原理及方法。熟悉荧光分光光度计的结构和使用方法。二基本原理维生素B(即核黄素)的溶液在~nm蓝光照射下会发黄绿色荧光荧光峰值波长为nm。在pH~的溶液中荧光最强在pH>时荧光消失。醋酸溶液中荧光强度将会增强。其它条件一定时维生素B的稀溶液(~μgml)的荧光强度与荧光物质的浓度成正比。本实验采用标准曲线法。利用维生素B可被还原剂(连二亚硫酸钠)还原为非荧光性物质通过测定加还原剂前后样品液的荧光强度来消除可能的样品基体干扰基于上述原理来测定药片的维生素B含量。三仪器与试剂(一)仪器荧光分光光度计样品池(石英)ml刻度吸管ml具塞比色管(二)试剂维生素B贮备液(μgml)避光操作精确称取mg维生素B(生物试剂避光干燥保存)置于ml烧杯中加冰醋酸ml及蒸馏水ml在水浴上加热溶解后放冷转入ml容量瓶中用蒸馏水稀释至刻度摇匀移入棕色瓶中放暗处保存。维生素B标准应用液(μgml)实验当天用移液管准确吸取标准贮备液ml于ml棕色容量瓶中用醋酸溶液稀释至刻度摇匀。醋酸溶液取ml冰醋酸用去离子水稀释至ml。连二亚硫酸钠(AR保险粉)四操作步骤样品药液制备)取核黄素药片片研细称出适量(约相当于维生素Bmg)置于ml烧瓶中加冰醋酸ml加蒸馏水ml置水浴上加热约小时并时时振摇使其溶解澄清后放冷转入ml容量瓶中用蒸馏水稀释至刻度摇匀移入棕色瓶中避光保存。该样品药液含维生素Bμgml。)用移液管准确吸取维生素B药液ml于ml容量瓶中用醋酸液稀释至刻度摇匀取此溶液ml于比色管中按与标准系列同样步骤测定此溶液的荧光强度。标准系列的配制取ml比色管支按下表配制标准系列管:管号维生素B标准应用液(μgml)醋酸溶液仪器调试)接通仪器及电源开关再打开电脑及工作站。)取标准系列浓度最高管(号管)固定荧光波长nm在~nm的波长范围内扫描不同激发波长下的荧光强度得到以激发光波长为横坐标荧光强度为纵坐标的激发光谱确定激发光波长λex。)固定激发光波长λex在~nm的波长范围内扫描不同荧光波长下的荧光强度得到以荧光的波长为横坐标荧光强度为纵坐标的荧光光谱确定荧光波长λem。测定)在λex和λem固定的条件下将摇匀后的标准系列管按浓度由低到高依次倒入样品池中分别测出荧光强度并记录填入下表中。以荧光强度为纵坐标浓度为横坐标绘制标准曲线。管号维生素B浓度(μgml)FnFFn)相同条件下测定样品液荧光强度记为F。再在测定过的样品液中加入保险粉约样~mg轻轻摇动后迅速倒入样品池中测定荧光强度记为F(秒钟之内测完)。空白以FF值在标准曲线上查出相应的维生素B浓度。样空白)测试完毕后关闭电脑及工作站再关闭仪器及电源开关。五注意事项连二亚硫酸钠能将荧光型维生素B还原为非荧光型维生素B但不可多加否则将其它还原性物质还原使测定结果偏高。同时加入保险粉后应立即测定荧光强度否则维生素B又被氧化为荧光性且多加或长时间后溶液会出现沉淀。为防止维生素B见光分解实验应注意避光。荧光测定中的样品池为四面皆光面的方形石英玻璃池为防止污染应手持不在光路的边棱。六思考题为什么要选用标准系列浓度最高管调试仪器,

用户评价(0)

关闭

新课改视野下建构高中语文教学实验成果报告(32KB)

抱歉,积分不足下载失败,请稍后再试!

提示

试读已结束,如需要继续阅读或者下载,敬请购买!

文档小程序码

使用微信“扫一扫”扫码寻找文档

1

打开微信

2

扫描小程序码

3

发布寻找信息

4

等待寻找结果

我知道了
评分:

/4

荧光光度法[资料]

VIP

在线
客服

免费
邮箱

爱问共享资料服务号

扫描关注领取更多福利