抗体制备: 重组蛋白抗原
抗体制备:重组蛋白抗原
目前抗体制备常采用多肽抗原及重组蛋白质抗原,这两种方法各有优缺点,需结合实验需求进行选择。
重组蛋白质抗原上往往带有多个不同的抗原决定簇,其中有些是顺序决定簇,有些为结构决定簇。利用变性的抗原免疫动物获得多克隆抗体是针对各个抗原决定簇的抗体的混合物,在一般应用中能够用于检测天然结构或变性的目标蛋白。利用变性蛋白做为免疫原的一个附带的好处是变性蛋白往往有更强的免疫原性,能够刺激动物产生强的免疫应答。
用做抗原目的的蛋白质一般选择使用大肠杆菌表达体系,因为该体系时间与金钱成本最低。为了提高目标蛋白质表达的可能性与纯化的方便性,人们有时只表达目标蛋白的一个小的片段如特定的结构域。大肠杆菌系统是欣百诺最早建立的成熟表达体系,有一系列
设计
领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计
完美的表达载体与非常成熟的表达培养条件,能够在较短时间内获得基因表达产物,且所需的成本相对较低。
如果制备抗体的目的单纯用于wb检测,采用合成的小肽作为抗原是经济快速的,但是存在由于肽段选择不合适造成的免疫原性弱或者无反应原性的风险,由于抗体制备需要较长的周期,因此利用多肽抗原制备抗体时,常常选取两三段不同的肽段以保证实验的成功率。
一般用多肽制备的抗体只能识别顺序决定簇,用于检测非变性状态的抗原时效果很差,特别是制备中和抗体时,需要最大可能的保持抗原的天然结构。重组抗原在免疫原性、表位多样性上远优于多肽
·抗体制备(重组蛋白抗原)——步骤1. 重组蛋白抗原表达及纯化制备
免疫用的多肽抗原纯度要求大于80%,更高的纯度虽然理论上可以获得特异性更好的抗体,实际操作过程中动物总是要产生大量非特异性抗体,从而掩盖了抗原纯度所带来的收益。
抗原序列的决定:
客户提供目标蛋白序列或cDNA序列,我们将进行抗原性分析预测,并结合您的实际需要,选取最佳的区域作为抗原序列。
此步骤服务说明请查考重组蛋白表达与纯化技术服务(E. coli表达系统)。
·抗体制备(重组蛋白抗原)——步骤2. 免疫动物/采血
目前我们仅提供兔子的多抗制备,采用的动物为SPF级新西兰大白兔。每两周免疫一次,共免疫5次。ELISA检测,确保免疫后血清效价大于1:4000。
客户需要提供的材料:
若客户提供交联好的蛋白,请与客服人员沟通其具体要求。
提供客户:60-100ml免疫后血清,1ml免疫前血清对照,效价检测结果
时间:10周左右
抗体制备: 合成多肽抗原
抗体制备:合成多肽抗原
目前抗体制备常采用多肽抗原及重组蛋白质抗原,这两种方法各有优缺点,需结合实验需求进行选择。
重组蛋白质抗原上往往带有多个不同的抗原决定簇,其中有些是顺序决定簇,有些为结构决定簇。利用变性的抗原免疫动物获得多克隆抗体是针对各个抗原决定簇的抗体的混合物,在一般应用中能够用于检测天然结构或变性的目标蛋白。利用变性蛋白做为免疫原的一个附带的好处是变性蛋白往往有更强的免疫原性,能够刺激动物产生强的免疫应答。
用做抗原目的的蛋白质一般选择使用大肠杆菌表达体系,因为该体系时间与金钱成本最低。为了提高目标蛋白质表达的可能性与纯化的方便性,人们有时只表达目标蛋白的一个小的片段如特定的结构域。大肠杆菌系统是欣百诺最早建立的成熟表达体系,有一系列设计完美的表达载体与非常成熟的表达培养条件,能够在较短时间内获得基因表达产物,且所需的成本相对较低。
如果制备抗体的目的单纯用于wb检测,采用合成的小肽作为抗原是经济快速的,但是存在由于肽段选择不合适造成的免疫原性弱或者无反应原性的风险,由于抗体制备需要较长的周期,因此利用多肽抗原制备抗体时,常常选取两三段不同的肽段以保证实验的成功率。
·抗体制备(合成多肽抗原)——步骤1. 多肽合成
免疫用的多肽抗原纯度要求大于80%,更高的纯度虽然理论上可以获得特异性更好的抗体,实际操作过程中动物总是要产生大量非特异性抗体,从而掩盖了抗原纯度所带来的收益。
客户需要提供的材料:
委托我们合成时请提供您的目标多肽序列或蛋白质序列,由我们与你讨论决定具体采用的序列。
提供客户:合成好的多肽,多肽高效液相图谱
时间:2周
·抗体制备(合成多肽抗原)——步骤2. KLH交联
用小片段多肽制备抗体时必须交联到适当的载体抗原上以增强其免疫原性。我们提供KLH与白蛋白两种抗原载体。
客户需要提供的材料:
若多肽由客户提供,要求多肽量大于5毫克,N端或C端加入一个半胱氨酸,长度在10-15氨基酸。
提供客户:交联好的蛋白或直接用于下一步免疫
时间:3个工作日
·抗体制备(合成多肽抗原)——步骤3. 免疫动物/采血
目前我们仅提供兔子的多抗制备,采用的动物为SPF级新西兰大白兔。每两周免疫一次,共免疫5次。ELISA 检测,确保免疫后血清效价大于1:4000。
客户需要提供的材料:
若客户提供交联好的蛋白,请与客服人员沟通其具体要求。
提供客户:60-100ml免疫后血清,1ml免疫前血清对照,效价检测结果
时间:10周左右
抗体纯化: Protein A/G
抗体纯化——抗血清Protein A/G亲和纯化
抗血清中含有针对免疫用抗原的特异性抗体外,还有大量杂蛋白、多糖和其他血液成分。Protein A/G可以特异性的与抗体Fc段结合,因此通过交联了Protein A或Protein G的树脂可以将抗血清中非抗体成分去除。
·客户需要提供的材料:
抗血清,请标明血清来源。
·提供给客户的实验结果:
纯化好的抗体
SDS-PAGE分析结果
·抗体纯化实验周期:
3个工作日
·价格:询价
抗原特异性亲和纯化
抗原特异性亲和纯化
Protein A/G纯化的抗血清可以满足大多数实验要求,如WB,ELISA等。由于其中保留了全部的非特异性抗体杂质,对于一些要求比较高的实验仍然存在较大的干扰,如免疫组化、抗体标记实验等。
通过将抗原交联到树脂上,可以将与抗原有特异性反应的抗体纯化出来,从而满足以上实验要求。
·客户需要提供的材料:
满足亲和纯化要求的多肽抗原或重组蛋白质抗原(~5mg)或由欣百诺为您制备。
抗血清,请标明血清来源。
·提供给客户的实验结果:
纯化好的抗体
SDS-PAGE分析结果
·抗原特异性亲和纯化实验周期:
3个工作日
·价格:询价
浙公网安备 33021202002483