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Folin酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度.doc

Folin酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度

却不敢扬口提爱
2017-10-16 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《Folin酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度doc》,可适用于高等教育领域

Folin酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度Folin酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度目的掌握Lowry法测定蛋白质浓度的原理。原理蛋白质在碱性溶液中其肽键与Cu螯合形成蛋白质一铜复合物此复合物使酚试剂的磷钼酸还原产生蓝色化合物在一定条件下利用蓝色深浅与蛋白质浓度的线性关系作标准曲线并测定样品中蛋白质的浓度。操作取试管支、编号、按下表操作:立即混匀在,水浴保温分钟。用nm比色测定光密度值。操作注意事项:(按顺序添加试剂(试剂乙在酸性条件下稳定碱性条件下(试剂甲)易被破坏因此加试剂乙后要立即混匀加一管混匀一管使试剂乙(磷目酸)在破坏前即被还原。计算(一)绘制标准曲线。以浓度为横坐标光密度值为纵坐标绘制标准曲线。(二)以测定管光密度值查找标准曲线求出待测血清中蛋白质浓度(g,L)。(三)再从标准管中选择管与测定管光密度相接近者求出待测血清中蛋白质浓度(g,L)。器材(一)型分光光度计()恒温水浴箱(三)中试管支(四)刻度吸管:ml二支ml一支ml一支。试剂(一)试剂甲(),碳酸钠(NaCO)溶液()N氢氧化钠溶液(),硫酸铜溶液(CuSOHO)(),酒石酸钾钠溶液(或酒石酸钾或钠)在使用前()与()、()与()等体积混合再将两混合液按:比例混合即为试剂甲。该试剂只能用一天过期失效。(一)试剂乙:()市售酚试剂在使用前用NaOH滴定以酚肽为指标剂根据试剂酸度将其稀释使最后酸度为N。()或取NaWoOHOlg和NaMOOg。溶于蒸馏水ml中再加,HPOml和HCl(浓)ml将上物混合后置ml圆底烧瓶中温和地回流十小时再加硫酸锂(LiSOHO)g水ml及溴水数滴。继续沸腾分钟后以除去剩余的溴冷却后稀释至ml然后过滤溶液应呈黄色或金黄色(如带绿色者不能用)置于棕色瓶中保存使用时用标准NaOH滴定以酚酞为指示剂而后稀释约一倍使最后酸度为N。(三)标准蛋白质溶液用结晶牛血清白蛋白根据其纯度用蒸馏水配制成mg,ml的蛋白质溶液。(纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定)。(四)待测样品:准确取血清ml置于ml容量瓶中再加,NaCl溶液至刻度充分混匀也可以用尿液为样品。

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