黄花列当DPPH自由基清除终极版2

内蒙古医学院 毕业 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 (设计) 题  目  黄花列当不同提取部位对DPPH自由基的除作用 学生姓名        崔佳颖    学    号        200709032019    院    系        药学院    专    业        中药学    指导教师        王晓琴          二Ｏ一一 年 六 月 十 日 黄花列当不同提取部位对DPPH自由基的清除作用 指导老师:王晓琴  学生:崔佳颖 内蒙古医学院中药专业，呼和浩特010059 [摘要]目的:研究黄花列当不同提取部位的抗氧化、清除自由基的活性。方法:将黄花列当干燥粉碎后，以70%乙醇为溶剂，加热回流提取得黄花列当70%乙醇总提取物(hh4)。70%乙醇总取提物依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到乙酸乙酯提取部位(hh1)、正丁醇提取部位(hh2)、水提取部位(hh3)。用DPPH·自由基清除法测试黄花列当四个不同提取部位的抗氧化活性。结果: 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明黄花列当各萃取部位都具有一定的清除DPPH·自由基的活性，活性顺序大小为乙酸乙酯部位﹥正丁醇部位﹥70%乙醇总取提物﹥水部位。结论:黄花列当各提取部位都用一定的抗氧化、清除自由基的活性，且水部位基本没有抗氧化活性。 关键词：黄花列当；DPPH；清除自由基 黄花列当(Orobanche pycnostachya Hance)为列当科(Orobanche)列当属(Orobanche L.)植物；为多年生、二年生或一年生寄生草本[1]；具有补肾助阳、强筋健骨之功效，用于治疗腰膝冷痛、阳瘘、遗精；蒙医还用于治疗碳疽，因此民间常做肉苁蓉的代用品[2]。列当科有15属，约150多种，主要分布于北温带，少数种分布到非洲、大洋洲、亚洲和美洲；我国产9属，40种和3变种，主要分布于西部，少数分布到东北部、北部、中部、西南部和南部；我区的列当科植物目前有3个属(包括8种，1变种，1变型)，它们分别是列当属(Orobanche L.)、草苁蓉属(Boshniakia C.A.Mey)、肉苁蓉属(Cistanche Hoffmg.et Link)，广泛分布于我区兴安盟、锡林郭勒盟、乌兰察布盟、呼伦贝尔盟、呼和浩特市、包头市和鄂尔多斯市等地[2]。 自由基包括活性氧类, 存在于体内外, 是生物体正常代谢中形成的, 影响着各种生理活性[3]。它们与老化、各种炎症疾病、致癌作用以及难治病的关系越来越引起关注[4]。生物体内过量的氧自由基会造成生物膜损伤、蛋白质变性、酶失活及DNA复制出现错误等, 这些都将导致一系列疾病, 如血管粥样硬化、高血压、糖尿病、癌症、帕金森病及老年痴呆症等。抗氧化剂能起到非常重要的作用, 抗氧化防御系统是靠消除活性氧或使活性氧非活性化来完成[5]。临床调查数据显示,食用富含黄酮、酚酸类化合物的水果蔬菜能降低一些与体内自由基代谢失衡 有关疾病的发生[6]，所以能消除活性氧的抗氧化剂受到了人们更多的关注。 1,1-二苯基苦基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl,DPPH·)是一种稳定的有机自由基，它的稳定性主要来自共振稳定作用及3 个苯环的空间障碍，而使夹在其中氮原子上的不成对电子不能发挥其应有的电子成对作用[7]。[DPPH·]在517nm 波长处有强吸收峰，溶液呈紫色，其浓度与吸光度呈线性关系[8]。［DPPH·］通常被用来检测抗氧化剂的抗氧化活性，当在溶液中有自由基清除剂存在时，清除剂提供的质子会和［DPPH·］结合形成［DPPH·-H］或发生替代，使［DPPH·］自由基数量减少，从而使溶液颜色由紫色变为黄色，表现为在517nm处的吸光度不断减小[9]。借次可以用来表征某种物质对自由基的清除能力，以达到评价此物质抗氧化活性的大小，一般用IC50值(即清除率为50%时样品的浓度)，IC50值越小，表示该物质清除[DPPH·]性越强[10]。以前对自由基信号的检测需要使用顺磁共振仪而使其难以普及[7]，现在运用清除[DPPH·]自由基的方法，使得自由基的检测变得更加方便和准确,已广泛应用于评价复杂提取物的抗氧化活性。本实验研究了黄花列当4种不同提取部位对[DPPH·]自由基的清除作用，为研究黄花列当的抗氧化机理提供了一定的理论基础。 1. 实验器材与试剂 1.1 仪器 KQ3200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；EYELA N-1001型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司东京理化器械独资工厂）；提取浓缩机组：LTTQ-30型浓缩机，LYX-0.5型刮板蒸发器，LYG159-1型冷凝器（石家庄市莱茵科技有限公司）；TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；DGG-9070B型电热恒温鼓风干燥箱；YP5001N电子天平；SL12a02 CONROLLER冻干机（基因有限公司）。 1.2 试剂 二苯代苦味酰基自由基［DPPH·］（Sigma2 Aldrich 公司）；抗坏血酸（天津市科盟化工工贸有限公司）；其余溶剂均为 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 纯。 1.3 材料 药材于2010年3月采购自河北安国药材冷备市场，由内蒙古医学院药学院药用植物教研室王素巍老师鉴定为黄花列当(Orobanche pycnostachya)。样品标本保存于内蒙古医学院药学院生药教研室。 2. 实验方法 1.1 提取与分离 干燥的黄花列当4kg粉碎，70%乙醇在提取浓缩机组内回流提取2次，合并药液，用旋转蒸发仪回收至无乙醇味，加入适量水混悬，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂，挥干，得乙酸乙酯部位浸膏146.9g、正丁醇部位浸膏185.5g和水部位420.8g待用。留取70%乙醇总提取物150ml，蒸干，得到13.7g浸膏，待用。 2.2 溶液的配制 2.2.1［DPPH·］溶液的配制 精确称取［DPPH·］粉末2mg，用无水乙醇(分析纯)溶解后转移至200ml容量瓶内，然后用无水乙醇定容，摇匀得质量浓度为0.01mg/ml的DPPH溶液,在4℃下避光保存，待测。 2.2.2 对照品维生素C的配制 精确称取Vc粉末2.5mg，用乙醇溶解后转移至50ml容量瓶内，后用乙醇定容，摇匀得质量浓度为0.05mg/ml的Vc对照品溶液；将对照品溶液依次配制成质量浓度为0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的溶液(定容在10ml的容量瓶)；在4℃下避光保存，待测。 2.2.3 样品的配制 共有4组样品，分别为乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位、70%乙醇总提取物，编号为hh1、hh2、hh3、hh4。 精密称取2.5mg(实际称量值为2.7mg)hh1和hh2，用无水乙醇溶解后转移至50ml容量瓶内，后用无水乙醇定容，摇匀得质量浓度为0.05mg/ml的样品溶液；将样品溶液依次配制成质量浓度为0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的溶液(定容在10ml的容量瓶)；在4℃下保存，待测。 精密称取2.5mg(实际称量值为2.7mg)hh3和hh4，用乙醇溶解后转移至50ml容量瓶内，后用乙醇定容，摇匀得质量浓度为0.05mg/ml的样品溶液；将样品溶液依次配制成质量浓度为0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的溶液(定容在10ml的容量瓶)，编号为1号、2号、3号、4号、5号；置在4℃下保存，待测。 2.3 清除DPPH·自由基能力的测定 2.3.1 对照品维生素C的测定 吸取无水乙醇0.1ml与4.9ml的［DPPH·］溶液(0.01mg/ml)在试管中混合，摇匀后迅速倒入石英吸收池中。以无水乙醇做空白。立刻用紫外可见分光光度计在517nm处测定吸光度，此时的数据为Aj。 依次吸取质量浓度为0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的维生素C对照品溶液0.1ml分别与4.9ml［DPPH·］溶液(0.01mg/ml)在试管中混合，摇匀后迅速倒入石英吸收池中。以0.1ml维生素C对照品溶液和4.9ml无水乙醇的混合物做空白。立刻用紫外可见分光光度计在517nm处测定吸光度，第0、1、2、3、4、5min分别测一次吸光度(若每分钟吸光度值改变不超过0.003个单位则停止测量)，之后每隔5min测一次吸光度，直到30min时结束，此时的数据为Ai。 2.3.2 样品的测定 吸取无水乙醇0.1ml与4.9ml的［DPPH·］溶液(0.01mg/ml)在试管中混合，摇匀后倒入石英吸收池中。以无水乙醇做空白。立刻用紫外可见分光光度计在517nm处测定吸光度，此时的数据为Aj。 依次吸取质量浓度为0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的hh1、hh2、hh3、hh4样品溶液0.1ml分别与4.9ml［DPPH·］溶液(0.01mg/ml)在试管中混合，摇匀后迅速倒入石英吸收池中。以0.1ml样品溶液和4.9ml无水乙醇的混合物做空白。立刻用紫外可见分光光度计在517nm处测定吸光度，第0、1、2、3、4、5min分别测一次吸光度(若每分钟吸光度值改变不超过0.003个单位则停止测量)，之后每隔5min测一次吸光度，直到30min时结束，此时的数据为Ai。 2.3.3 计算清除率 按公式(1)[8]计算对照品和各样品对[DPPH·]自由基的清除率(I) 。 I = [ 1 - (A i/Aj) ] ×100%    ……  (1) 3. 实验结果 将对照品维生素C、hh1、hh2、hh3、hh4的 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线(横坐标为浓度，纵坐标为清除率)同时放在一个图表内进行对比，见图1。 图1 将维生素C、hh1、hh2、hh3、hh4的标准曲线的回归方程、R2、IC50值进行比较，见表格1. 组分 回归方程 RR2 IC50值(mg/ml) 对照品维生素C y＝714.68x﹣1.3172 0.9999 0.07181 hh1(乙酸乙酯部位) y＝483.9x﹢1.765 0.9971 0.09967 hh2(正丁醇部位) y＝393.51x﹣0.5097 0.9990 0.1284 hh3(水部位) y＝100.01x﹢4.6189 0.9587 0.4538 hh4(70%乙醇总提物) y＝289.44x﹣0.129 0.9961 0.1732         表格1 从图1和表格1可知，黄花列当4个不同萃取组分对[DPPH·]的清除能力随各组分浓度的增大而增强。从回归方程得各组分的IC50值（mg/ml）从小到大依次为：对照品维生素C(0.07181)﹥乙酸乙酯部位(0.09967)﹥正丁醇部位(0.1284)﹥70%乙醇总提物(0.1732)﹥水部位(0.4538)。 4.讨论与结论 以黄花列当为研究对象，分别应用了乙酸乙酯、正丁醇萃取溶剂进行分离，并以维生素C（抗坏血酸）作为对照物质，结合[DPPH·]法评价黄花列当提取物的抗氧化活性。实验结果表明黄花列当各萃取组分都具有不同程度的抗氧化活性，其中乙酸乙酯部位的清除[DPPH·]自由基活性最强，正丁醇部位也有较好的清除[DPPH·]自由基活性，水部位的清除[DPPH·]自由基能力较弱(基本可视为没有活性)。 所以经实验研究发现黄花列当具有较强的抗氧化活性，并且在应用[DPPH·]自由基清除法方面前景十分乐观。 参考文献: [1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(69卷)[M],北京:科学出版社, 1990:113-114. 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Study on DPPH Free Radical Scavenging Activities of Extracts from Orobanche pycnostachya WANG Xiao-qin， CUI Jia-ying (Department of Pharmacy，Inner Mongolia Medical College, Hohhot 010059 China) ABSTRACT Objective: DPPH free radical scavenging activities of extracts from Orobanche pycnostachya were investigated. Method: The dried and powdered plants of Orobanche pycnostachya were extracted with 70% ethanol under reflux. The 70% ethanol extracts(hh4) was extracted successively with EtOAc and H2O-satd n-BuOH. The antioxidant activities of the three fractions of EtOAc (hh1),n-BuOH (hh2),and water(hh3)were tested using in vitro assays of the scavenging effects on DPPH. Results: The results showed that the extraction Orobanche pycnostachya has certain components of DPPH ? free radical clearance activity. Activity order of the size of EtOAc position>n-BuOH position>70% ethanol extracts> water position. Conclusion: The extracts from Orobanche pycnostachya showed some of the antioxidant and free radical scavenging activity .The water position have no antioxidant and free radical scavenging activity. Key words:Orobanche pycnostachya ; DPPH; free radical scavenging