生物表面活性剂在微乳毛细管电动色谱中的应用（可编辑）

生物表面活性剂在微乳毛细管电动色谱中的应用（可编辑） 生物表面活性剂在微乳毛细管电动色谱中的应用 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取 得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文 中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含本人为获得江南 大学或其它教育机构的学位或证 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 而使用过的材料。与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 口./矿 签 名: 日 期: 关于论文使用授权的说明 本学位论文作者完全了解江南大学有关保留、使用学位论文的规定: 江南大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允 许论文被查阅和借阅,可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文, 并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致. 保密的学位论文在解密后也遵守此规定. 签 名: 导师签名:,?,一载 ,二.微乳毛细管电动色谱是在胶束毛细管电动色谱基础上发展起来的 一种新型电泳技术。能同时分离带电的与电中性的、亲水的与亲脂性的物质。 鼠李糖脂是应用较为广泛的生物表面活性剂,表面活性高,仅需少量鼠李糖脂、无需助 表面活性剂即能得到稳定的微乳体系。本论文首次将鼠李糖脂应用于,旨在解 决经典微乳体系中因所需表面活性剂浓度过大而造成的焦耳热过大、柱效下降、分析时 间过长、基线噪声大等问题。论文共分为三个部分: .采用液.液萃取 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 ,对生物表面活性剂鼠李糖脂粗产物进行了提纯,通过 测定,证明存在三种鼠李糖脂同系物,并采用.确定了三种鼠李糖脂同系物的 结构,根据归一化结果计算得鼠李糖脂的平均分子量为.。考察了影响鼠李 糖脂微乳体系稳定性的因素,包括鼠李糖脂浓度、、助表面活性剂浓度和有机溶剂的 加入量,这些条件的考察对于下一步鼠李糖脂微乳体系应用在于中具有重要的 意义。 .首次采用生物表面活性剂鼠李糖脂建立了无需助表面活性剂的微乳体系,并应用 于微乳毛细管电动色谱快速分析化妆品中皮质类激素泼尼松、泼尼松龙、氢化可的松。 考察了、鼠李糖脂浓度、离子强度、油相种类和浓度、分离温度、分离电压以及进 样电压和时间的影响,得出微乳体系最佳组成为.%/鼠李糖脂..%/『正庚烷 ,电 .。分离温度?,分离电压 ..%/硼砂缓冲液 /, 动进样 / 条件下,泼尼松、氢化可的松、泼尼松龙在. 内可基线分离。 重复进样次,迁移时间和峰面积的分别.%和.%。三种分析物线性范围 均为. //。仅需简单萃取即可用于 /,检出限分别为.、.和. 化妆品样品测定,样品的平均回收率在.%和%之间。该方法相对经典微乳体系, 有效地缩短了分离时间。 .将鼠李糖脂.复配微乳体系用于中,并同时分析了水溶性和脂溶性 维生素。通过对各微乳体系分离效果的考察发现:单一鼠李糖脂微乳体系不能分离脂溶 性维生素;微乳体系分离水溶性和脂溶性维生素时间过长,且分离度不佳;鼠李糖 脂和复配体系具有更好的分离度,其中正丁醇为分离的关键因素,乙腈对分离具 有一定程度的改善。随后对各微乳体系进行微结构的考察发现,微乳体系具有较大 的荷质比,鼠李糖脂具有最小的荷质比,而后随着正丁醇量的增加,体系荷质比也随之 增大。最后通过复配体系对维生素分离效果的考察,发现最佳微乳体系组成 为.%鼠 李糖旨/..%/..%正庚烷/.%正丁醇%乙腈/。 / 最优化条件为:分离温度?,分离电压 ,电动进样 ,在该条件下, 四个水溶性维生素和三个脂溶性维生素可在 内同时分离。水溶性维生素、、 和及脂溶性维生素、和线性范围跨越个数量级,线性相关系数均., 维生素卜、、、、和的检出限分别为.、.、.、、、和摘要 各分析物的迁移时间和峰面积的分别.%和.%。对 进行了测定,测定值与标示值基本相符,回收率在.%和% 、准确,适用于水溶性和脂溶性维生素的同时分析。 管电动色谱;鼠李糖脂;激素;维生素;化妆品. , . .. . . ,, .. .. . ..笋.? . 埘 , . ., ,, . , . . .. ,.啊. , , ,, ,.%/,.%/ .%/,..也 / ?,, . . .% .%. /, ... . ..% % ..%. .... . ., .. . .. .. ,. , . ?? , ,. .%/.%/一.% /一%?/一 %/. : ?,/.、析 ? 、, .衔 .谢..,,, ,, .,.,.,,, ./ . . .% ? .%. . .% %.. . : ; ;;; 目 录 目 录 摘要一 第一章绪论?. .微乳毛细管电动色谱?.. ..微乳液简介?. .. 原理. .. 的应用与发展??. .. 分离影响因素 .. 的优缺点?.. .鼠李糖脂? ..生物表面活性剂简介 ..鼠李糖脂的结构与性质..鼠李糖脂的应用??. .课题意义.. 第二章鼠李糖脂提纯、分析及微乳液的配制.引言??. .实验. ..实验试剂与仪器?.. ..实验方法.结果与讨论..鼠李糖脂同系物的分析及平均分子量的测定?.. ..鼠李糖脂微乳体系稳定性的考察。 .爿、结. 第三章鼠李糖脂制备微乳并应用于快速分析化妆品中糖皮质激素类物质? .引言 .实验. ..‘实验试剂与仪器?一 ..实验方法.结果与讨论 .. 分离影响因素??. ..分离条件及进样条件的影响??. ..线性、检出限和重现性?。 ..样品分析及回收率.. .,、结.第四章鼠李糖脂与复配微乳体系用于水溶性和脂溶性维生素的同时 分析??.. .引言. .实验. ..实验试剂与仪器?. ..实验方法?.. .实验结果与讨论. ..微乳体系的选择?。 ..电泳条件对分离的影响. ..线性范围、检出限和重现性??。 ..样品测定和回收率实验?。 .爿、结. 至【谢. 参考文献??.. 附隶? 第一章绪论 第一章绪论 .微乳毛细管电动色谱 毛细管电泳是以电场为驱动、毛细管为分离通道的一种新型分离分析技术,与 传统高效液相色谱法相比,毛细管电泳具有分离模式多、分离效率高、分析速度快、试 剂和样品用量少、成本低、应用范围广等特点,已广泛应用在无机离子、糖类、氨基酸、 蛋白质、核酸、环境样品、药物食品和手性对映体的分离分析。毛细管电泳技术的发展 是在年代以后才开始的,但是实际柱效达不到理论预测的高度,这是由于毛细管内 壁对溶质具有吸附作用,因此常出现峰拖尾、分离度差等现象,有时甚至不出峰。 年,等利用胶束为假固定相分离了酚类物质,发明了胶束毛细管电动色谱 ,代表着发展中的又一巨大进步,把 分析物扩大到中性物质。年,商用毛细管电泳仪器的出现,推广了的应用。上 世纪年代开始,毛细管电泳发展迅速。为了得到高的分离效率,各种组成的溶液被 引入了毛细管中作为分离介质,建立不同类型的分离模式。微乳毛细管电动色谱 是在九十年代在基础上发 展起来的一种电泳新技术。微乳以前被用于高效液相色谱中,年,川 首次应用微乳毛细管电泳的分离介质,分离了一组具有荧光性质的芳香族化合物,从而 形成了一种新的毛细管电泳技术一微乳毛细管电动色谱 , ,或称微乳毛细管电泳 。 ..微乳液简介 在年,由和首先报道了以等物质的量的直链醇、脂肪酸、胺 或其他表面活性剂滴加到表面活性剂/水比例高的乳状液中,可形成一种透明或半透明的 体系。年,】首次以“微乳液”描述了此体系,并称直链醇为“助表面活 性剂。在此后相当长的时间内,这种体系分别被称为亲水的油胶团或亲油的水胶团, 亦称为溶胀的胶团或增溶的胶团。直到年正式命名为“微乳液。 微乳液是由表面活性剂、助表面活性剂、油和水四种成分在适当的比例下自发形成 的透明或半透明、低粘度和各向同性的稳定体系,粒子大小均一,一般其微粒半径在几 百纳米左右。可分为以下三种结构类型。如图.所示: 水包油型/:表面活性剂包裹的油滴存在于连续的水相中。当油相的体积分 数小于.时,通常形成这种微乳液。 油包水型/:表面活性剂包裹的水滴存在于连续的油相中。当油相的体积分 数大于.时,通常形成这种微乳结构,但不绝对。 双连续型:在其结构范围内,任何一部分油形成油珠链网组成油 连续相;同样,水也可以形成水珠链网组成水连续相。油链网与水链网相互贯穿、缠绕, 形成了油、水双连续相结构,这种结构具有/和/两种结构的综合特性。在这种江南人学硕士论文 微乳液中,包含体积几乎相等的油核水以及大量的表面活性剂。双连续型微乳液通常具 有很多不同的微观结构,其具体形态取决于微乳液体系的特殊性和微乳液的具体组成【。 覆 图微乳液的三种结构示意图:油包水型水包油型双连续型 吧:// . 由于油和水间有着很高的界面张力,两者互不相溶,加入表面活性剂后,表面活性 剂的亲油端插入油滴内部,亲水端在水相中,降低了油水间的界面张力,使微乳液的形 成成为可能。而加入助表面活性剂后,助表面活性剂插入到表面活性剂的中间,进一步 降低了油相和水相之间的界面张力。表面活性剂和助表面活性剂在油滴表面有序排列, 使得微乳体系非常稳定。 自从年和发现微乳液以来,其理论和应用研究取得了很大程 度上的进展【。。世纪年代世界石油危机后,微乳体系由于在三次采油技术中显示 出巨大潜力而迎来了发展高潮。特别是世纪年代以来,微乳液的应用领域迅速拓 展。除三次采油技术外,目前已渗透到日用化工、精细化工、材料科学、生物技术、环 境科学和分析化学等领域【以,成为当今国际上热门的具有巨大潜力的研究领域。 .. 原理 在的情况下,石英毛细管内表面硅羟基因发生解离而带负电荷,于是吸附缓 冲溶液带有正电荷的离子,在缓冲液本体中就形成了外层带正电荷的双电层结构。在高 压电场下,外层溶液发生电迁移,带动内层溶液一起向负极移动,形成电渗流。而缓冲 液中的带负电荷的微乳液滴,有向正极移动的趋势,由于电渗流速度大于电泳速度,因 此微乳液滴仍向负极移动。也有通过减小缓冲液的值,进而抑制电渗流,使微乳的 迁移速度大于相反方向的电渗流速度。被分析物,由于在微乳相与水相中的分配差异, 表现出不同的表观淌度。因此可用于极性化合物和中性化合物的同时分析。由 于微乳的增溶作用,一些难溶于水的疏水性物质也可以用来分析,而时间窗口 的增大,使电泳峰容量增大许多,因此更加适用于多组分复杂体系的分析。而 且微乳毛细管电泳中的电渗流为“塞式流,见图.溶质区带在毛细管内原则上不 会扩张,而中,采用的压力驱动方式使柱中流体呈抛物线型,由图.可见, 其中心处流速是平均速度的两倍,导致溶质区带本身扩张,而引起柱效下降,使其分离 效率不如。 物质在中的分离是基于在微乳液滴和水相中的分配行为及带电部分在毛细 第一苹绪论 管中不同电泳淌度的综合结果,综合了色谱法和电泳法的分离机制。在普通 未涂层石英 毛细管中,电渗流在高条件下较大,因此多数分离介质的大于,酸 性条件下的分离需要用涂层毛细管或改变电压极性,采用反向高压,抑制电渗流,通过 物质本身带电来进行分离。图.是在中,阴、阳离子和中性溶质的分离过程。 溶质在乳滴中的分配与其疏水性有关,亲油性溶质易进入到微乳内核中,而亲水性物质 则更易分散在水相中,带电溶质的电泳淌度除了与自身的荷质比有关外,还在一定程度 上受到液滴表面电荷的离子相互作用的影响。在正电压分离情况下,带负电的微乳液滴 向阳极移动,但由于向阴极流动的电渗流速度更大,微乳液滴及溶质总体的移动还是向 阴极的。物质在两相间不断分配,依据水溶性和所带电荷的不同进而得到分离。 ??????????????????????????????????????????????????????? 囝 。心‰ 一 矿叟叟金 璺釜佥鱼垒鱼鱼 图电渗流流型和压力驱动流型比较 . 图 分离示意图 . .. 的应用与发展 在分离物选择上,可同时分离水溶性和脂溶性,带电的或者不带电的物质, 因此在很多物质的分离上具有普遍适用性;同时具有进样量少、溶剂损耗小 等 优点,因此在最近几年,有较多的研究报道其应用在药物分析、手性分离以及 食品与环 境分析等领域。 ...维生素分析 关于水溶性维生素的报道比较岁。刀,但对脂溶性的维生素的报道还比较少, 主要 是由于脂溶性维生素水溶性差、呈电中性,因此分离较困难。】等人用分 垩堕查兰堡主丝奎 离了水溶性和脂溶性维生素,分别考察了与对分离的影响。发现以为 表面活性剂分离效果更好,并与相同条件下的进行了对比,得出比 具有更大的分离度。】等人也以分离水溶性和脂溶性维生素对和 进行了对比,得出在在使用作为表面活性剂时,只适合水溶性维 生素的定量分析;同时分离水溶性维生素和脂溶性维生素只有选用,并且 具有更好的重现性。?】等人以抑制电渗流,阳极进样的方法 分离了脂溶性维生素棕榈酸盐、维生素醋酸盐和维生素,体系中加入了大量 的 乙腈,乙腈:水:。 ...手性药物的分离 毛细管电泳手性分离有两种基本策略【,一是构建手性分离环境,二是手性消除。 让对映异构体与手性试剂进行化学反应,可以使之转变成非对映异构体。但由于手性消 除反应需要昂贵的手性反应试剂,而且产物的手性可能不可恢复,所以这种方法应用较 少,而选用构建手性环境的方法。由于在中可控因素比较多,因此在分离手性 异构体时,可以采用手性表面活性剂、手性助表面活性剂、手性油相等方法进行分离。 】等以手性物质.酒石酸二丁酯为油核,微乳缓冲液组成为:.%、 .%正丁醇、.%油相以及.%三羟甲基氨基甲烷缓冲液 .成 /, 功分离了两种麻黄碱异构体。等【使用环糊精,修饰的微 乳毛细管电动色谱.对几种手性药物的分离进行了研究,结果表明, 。的分离能力与的类型与浓度紧密相关,适用于疏水性手性药物的分离。 ...分配系数的测定 是最重要的一个用途。这是由于在 测定化合物的油水分配系数 分离中,化合物通过在油与水之间不断分配而得到分离,与测定分配系数的 原 理相一致。与反相薄层色谱、反相等其它测定分配系数的体系相比,具 有快速、高通量、样品消耗量少,并能同时测定中性、弱酸性及弱碱性化合物的 的特点。等【】研究发现含有.%、.%正丁醇、.%正庚烷及硼酸一 .的微乳特别适于测定油水间的分配系数。近年来其应用在油水分配 磷酸缓冲液 系数上的测定越来越多,?】等用研究了碳酸酯及有机物分子的油水 分配系数,得到了一系列迁移指数 ,,并考察了浓度计对 的影响。】等用水包油分离了一系列中性化合物和酸性化合物,并与 油包水微乳体系进行对比,二者具有明显的不同。主要是中性化合物的出峰顺序,在水 包油体系中与分配比有关,而在油包水体系中,与其无关。 ...药物分析 药物种类繁多,分离困难。】分离了大黄中九种蒽醌类化合物,分离体系以. 丁基酒石酸为油核,并加入了%/乙腈提高了分离效率。等【】分离了种 青霉素类抗生素,并使用了富集技术,提高 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 灵敏度倍。在分离皂甙化合物的应 第一章绪论 用上,常规电泳方法难度很大,薄涛【】等利用制备微乳体系,并加入了 的 胆酸钠,成功分离了六种皂甙化合物,扩大了毛细管电泳法的应用范围。李楠】等用 法建立了不同来源大黄样品的指纹图谱,为质量控制提供依据。这些研究结果 都表明,在药物分析上有着独特的优势,有望得到更广泛的应用。 ...食品与环境分析 食品成分的多样性及复杂性对应用于环境的分析方法提出了很高的要求。 由于毛细管电泳技术具有多种不同的分离模式可供选择,优化建立的方法就可以满足环 境所含的复杂组分的分析要求。对于食品中糖类和氨基酸的检测,由于其结构复杂性, 而且具有很高的微观不均一性等,对其分离分析相当困难。 盛筱【等以.萘基..甲基..吡唑啉酮为衍生化试剂,用区带毛细管电动色谱在硼 , 酸浓度 .,柱温?,分离电压 压力进样 条件下, /, 测定了种单糖,包括阿拉伯糖、半乳糖、半乳糖醛酸、木糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露 糖、岩藻糖和葡萄糖醛酸。王明清【等以咔唑..乙基氯甲酸酯为柱前衍生试剂,采用非 水毛细管电泳分离了种小肽衍生物。 .. 分离影响因素 微乳是一个多组分体系,这使得在应用分离的影响因素较多。通过改变微 乳液的组成,可以改变的分离度、分离时间等重要参数。可调节的因素也比较 多,包括表面活性剂、助表面活性剂、油相及缓冲液等各个方面,这就决定与 其它模式相比,具有峰容量大、可分离样品的种类多等优点【引,同时用于分离带电 与电中性的以及水溶性和脂溶性物质。 ...表面活性剂的影响 表面活性剂的种类及浓度对微乳的稳定性及分离效果有着决定性的作用。表面活性 剂浓度加大,微乳液滴的稳定性增强,表面电荷增多,对脂溶性物质的增溶作用加大, 可以得到更好的分离效果;但是高浓度的表面活性剂会增加微乳液的离子强度,致使电 泳电流变大、焦耳热变大、分离效率低下及基线不稳等,进而限制了高压电源的使用。 而表面活性剂浓度过低则会使得微乳不够稳定,易浑浊。是最常用的一类阴离子表 面活性剂,十六烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵和 】是较为常用的阳离子表面活性剂,常用的非离子表面活 性剂有哟,,.丁基酒石酸等。非离子表面活性剂不带电荷,分析脂 溶性物质速度较快,但分离效果不够理想;而阳离子表面活性剂具有比电渗 流更快的表 观迁移速度,分析窗口小,不适于如亲脂性较强物质的分离。 ...助表面活性剂的影响 助表面活性剂对分离的影响也很大,它可以起到稳定微乳的作用。一般用作助表面 活性剂的是中短链长的醇,最常用的助表面活性剂为正丁醇,异丙醇、异戊醇、丙二醇 等也有用作助表面活性剂的。过少的助表面活性剂起不到稳定微乳的作用,而过多的加 江南大学硕士论文 入量又会使助表面活性剂溶胀到微乳内部,使微乳破乳。因此适量的助表面活性剂对微 乳的稳定起到至关重要的作用。 ...缓冲液的影响 缓冲液决定了毛细管内壁的电荷量,以及电渗流的快慢,对分离的速度和效率 是一个重要的决定因素。较高的使毛细管内壁硅羟基电离程度变大,电渗流变快; 而在较低的环境下,硅羟基电离程度较小,因此电渗流较慢。一般较常用的范 围为,在此范围内,硅羟基电离较多,大多数分析物也能被电离,具有较快的 的范围内,电渗流速度较慢,而对于弱酸性 分析速度和分离效率。而在弱酸性 的物质,由于不能解离而电中性,不能得到更好的分离。对于一些极端条件下的电 .磷酸缓冲液条件配 微乳,分 泳也有报道,.等在 的微乳体系中,消除了碱性物 离了,和 ;在 质的离子化并测定了其溶解度。而对带有弱电离基团的表面活性剂来说,还决定了 微乳液滴表观电荷,影响了分析物在水相和油相之间的分配。因此改变缓冲液值也 是改变分析速度和效率的一种有效手段。 ...缓冲液浓度的影响 低浓度的缓冲液具有较小的离子强度,因此具有较小的电泳电流和较大的电渗流; 而高浓度的缓冲液无疑增加了缓冲液的离子强度,导致了电渗流小、基线不稳、焦耳热 严重以及分离效率低下等问题,同时也限制了高压电源的使用。因此选择合适浓度的缓 冲液浓度也是有效分离的前提条件。 ...有机添加剂的影响 有机添加剂的加入影响电渗流、水油之间的分配系数以及带电物质电泳速率等电泳 参数【,改变了分析物在两相间的溶解性,减小了分析物的分配系数,影响分析的速率。 尤其在分离一些脂溶性的物质时,加入适量的有机添加剂,分离效率和峰形可以得到很 好的改善。但并不是有机添加剂加的越多越好,过多的有机添加剂会使微乳破乳,而过 少的加入量也不能起到提高分离效率的效果。因此,考察有机添加剂的种类以及加入量 对于分离效率的改善尤其重要。 ...温度的影响 温度对电渗流以及分离效率的影响主要是从分析物溶解度和缓冲液粘度来考虑的。 温度每变化?,离子淌度变化%,低温下淌度小,电渗流小分离度好,在较高温度 下淌度大,分析时间短,但分离度小。 ...测定条件的影响 电压、进样时间等分析条件都会影响分离的性能。一般来说在较高分析电压下,电 渗流快、分析速度快,但同时基线噪声也随之变大。进样时间对峰形和灵敏度都有影响, 在具体应用中应兼顾分离效果和迁移时间两个因素,确定最佳的分离条件。 第一章绪论 .. 的优缺点 是毛细管电泳模式中的一类,它是的一种变形,它的非极性假固定 相是由表面活性剂疏水端包住有机相所形成的,比如庚烷、辛烷等,有机相外面则由表 面活性剂和助表面活性剂构成,以稳定其结构,这与分离模式有所不同。因此 分离模式具有溶解脂溶性物质能力更强、减少有机添加剂挥发和得到更好的分 离度等优点。 在分离脂溶性物质上,可以得到比更好的分离效果。】等 对比了和分离脂溶性维生素的区别,发现相对在脂溶 性物质的分离上,具有大溶解性、更好的稳定性和更好的分离效率,而不能用 于分离复杂基质的脂溶性物质。 但也存在如下不足之处,如:由于受微乳体系稳定性的要求,在表面活性 剂的选择上受到限制,目前为止仍以阴离子表面活性剂的使用最为广泛;微乳体 系组分较多,一般至少需要表面活性剂、助表面活性剂、缓冲液和油核四种组分,配制 微乳体系步骤繁琐;微乳液中含有高浓度的表面活性剂,存在较大的质谱吸收背景,进 而与质谱技术联用困难;此外,在理论和技术上还不够完善,微乳液的稳定性 和分析的重现性还有待于提高,新的体系和方法还有待进一步研究,以完善 并发展 自身的理论基础。 .鼠李糖脂 ..生物表面活性剂简介 生物表面活性剂是指有严格的亲水和疏水基团,是由微生物产生的化 学物质,这种微生物生长在水不溶的物质中并以其为营养物【。由于生物表面活性剂具 有高效、低毒和对环境友好等特性,因此得到了广泛的应用。生物表面活性剂大多为非 离子型和阴离子型,由一个或多个亲水性和疏水性基团组成。根据其亲水基的类别,分 为以下五种类型:以糖为亲水基的糖脂系生物表面活性剂;以低缩氨酸为亲水 基的酰基缩氨酸系生物表面活性剂;以磷酸基为亲水基的磷脂系生物表面活性剂; 以羧酸基为亲水基的脂肪酸系生物表面活性剂;结合多糖、蛋白质及脂的高分 子生物表面活性剂生物聚合体。 和传统的化学表面活性剂相比,生物表面活性剂不但具有降低表面张力、分散和增 溶作用,而且还具有以下优点:可生物降解,不会造成二次污染;无毒或低毒, 对生态环境影响小;对生物的刺激性较低;可利用工业废物为原料进行生产, 并用于生物环境治理;具有更高的表面活性和更好的起泡性;稳定性好,在极 端温度、、盐浓度下具有更好的选择性和专一性;结构多样,可适用于特殊的领 域。因此,近年来生物表面活性剂越来越受到人们的关注,被广泛应用在食品工业、精 细化工、医疗卫生等行业。 ..鼠李糖脂的结构与性质 吲下?一一一 第一覃绪论 中鼠李糖脂与转化剂和助表面活性剂比例为::时耐温?,抗盐度达到 /,且具有较好的重现性。等比较了两种鼠李糖脂和的表面活 性和起泡性,发现两种表面活性剂均具有很小的临界胶束浓度。在临晃胶束浓度以下 相对具有更高的表面活性,且不受体系的影响。然而无论是临界胶束浓度还 .下,未 是临界胶束浓度处最小的表面张力受鼠李糖脂类型的影响都不大。但若在 解离的鼠李糖脂结构更为紧密。并且两种鼠李糖脂在临界胶束浓度以下的界面行为相差 不大,但在以癸烷为油核的微乳体系下,比更能降低表面张力。因为分子间存在 较强的静电相互作用力,因此只有在小流量空气流速下才可起泡,而形成的泡沫稳 定性更好。以该表面活性剂为起泡剂,所形成的泡沫的大小受体系的影响而不受鼠 .的条件下,利用光学显微镜考察了氯化钠对 李糖脂类型的影响。】等在 两种类型鼠李糖脂表面行为的影响。发现氯化钠在.、.和 /三个浓度条件下, .的条件下,羧酸基团解离,分子间存在 直接影响了鼠李糖脂中羧酸基团的行为。 较大的静电作用力,因此气液界面张力存在静电荷,这些静电荷受到钠离子的屏蔽,导 致了临界胶束浓度的下降和表面张力的变化。结果表明. /浓度的氯化钠所形成 的分子层更为紧密,而又比同样条件下形成的分子层更紧密:鼠李糖溶液微结 构的刚性随着氯化钠浓度的增加而增大,由于具有更低的亲水基团,在任何浓度氯 化钠下,微结构比微结构具有更大的刚性;受到氯化钠浓度的影响,鼠李糖脂可 形成不同的胶束,如球形胶束、双层胶束和棒状胶束。【”】等考察了制备鼠李糖 脂的条件,并用分离了六种同系物。随后考察了鼠李糖脂的表面张力和临界胶束 浓度。为鼠李糖脂应用在生物降解、食品、化妆品和医药行业中的应用提供 了参考。 毛细管电泳作为一种新颖的分离技术,在模式上有,,等,在分 析大分子物质,如蛋白质、氨基酸和肽类物质上有着独特的优势,其应用势必会越来越 受到重视。而后两种分离模式需要表面活性剂组成假固定相,目前大都使用阴离子表面 活性剂,但其配置的微乳存在离子强度大、焦耳热大以及分析时间长等缺点。用鼠 李糖脂配置的微乳可以很好地解决上述问题,而且由于表面活性高,其用量也大大减少。 随着仪器分析技术的发展,鼠李糖脂的应用势必也会越来越受到重视。 .课题意义 在中,经典的微乳组成为.%/一.%/正丁醇..%/己 烷一.%/硼砂缓冲液。该体系离子强度很高,.%/的浓度已使得电泳电流过 大从而导致焦耳热大,柱效低,样品分析时间延长;若减浓度又使得微乳体系不 稳定。因此,找到一种高表面活性的表面活性剂对提高分离效率,扩大的应用 至关重要。 鼠李糖脂是应用最为广泛的生物表面活性剂之一,它具有很高的表面活性,其临界 胶束浓度比低两个数量级,在较低浓度下可以不加助表面活性剂而形成稳定的微 乳,因此应用于具有很大的潜力。 但到目前为止,国内外关于鼠李糖脂表面活性的研究大多集中在电解质及分子结构翌塑奎兰堡主丝茎 的影响方面【巧,也有很多关于采油和环境修复方面的。以鼠李糖脂为表面活性剂制备 微乳体系也有报道【,主要通过相行为的研究来探索生物表面活性剂形成微乳的作用机 理。针对微乳的制备,谢颖玮【】等测定.下鼠李糖脂羧基完全电离所需的氢氧 化钠量级临界胶束浓度,并探索了用鼠李糖脂制备微乳状液的可行性和基本条件,得到 了鼠李糖脂.正庚烷.正丁醇.水微乳体系的相图,研究了氢氧化钠对体系相态、界面张力 和最佳盐度的影响。结果显示:该体系能够形成微乳状液;体系中氢氧化钠具有双重作 用,既可以促进羧酸根电离,又起到了电解质的作用,并且在完全电离时体系的最佳盐 度达到最大。 基于鼠李糖脂的高表面活性,本论文首次以鼠李糖脂为表面活性剂制备微乳体系并 应用于,旨在解决在中,经典微乳体系中离子强度大而造成的高焦耳热、 低分离效率和分离时间长等问题。 第二二章鼠李糖脂提纯、分析及微乳液的配制 第二章鼠李糖脂提纯、分析及微乳液的配制 .引言 鼠李糖脂通常可通过萃取、沉淀、超滤及过柱色谱等方法进行提纯。由于在微生物 发酵液中的产量很低且发酵液成分复杂,其分离、提纯和浓缩工艺不仅难度大,还成为 鼠李糖脂生产成本中的主要组成部分,费用占生产总成本的%.%。因此选用合适的 提纯方法可以大大降低成本,国内提纯方法一般包括离心沉淀、氯仿甲醇萃取、旋转 蒸发及硅胶柱层析等。本实验因所需的鼠李糖脂量很少,选用成本较低的液一液萃取进 行实验。 由于鼠李糖脂不存在紫外吸收,因此在分析时,采用蒸发光散射检测器进行 检测,并采用面积归一化进行定量,根据同系混合物的分子量和所占的含量计算求得平 均分子量。 鼠李糖脂作为一种高表面活性的表面活性剂,具有用量少、生物相容性好以及可降 解等优点。其用在微乳的配制上有报道,但其侧重于氢氧化钠对微乳体系相态、界面张 力等方面的研究,谢颖玮【】等测定了.下鼠李糖脂羧基完全电离所需的氢氧化钠 量级临界胶束浓度,并探索了用鼠李糖脂制备微乳状液的可行性和基本条件,得到了鼠 李糖脂.正庚烷.正丁醇.水微乳体系的相图和最佳盐度。 鼠李糖脂在微乳体系的配制上具有用量少、生物相容性好以及在极端温度、、盐 浓度下也具有更好的选择性和专一性等优点。在微乳配制微乳影响因素上的研究,对进 一步扩大鼠李糖脂和的应用具有非常重要的意义。 .实验 ..实验试剂与仪器 ...试剂 仪器江南大学硕士论文 ..实验方法 ...鼠李糖脂的提纯 /的硼砂缓冲液 ,用滤 取. 鼠李糖脂粗产物于烧杯中,加入 .并于具塞分液漏斗中加入等体积的氯仿,进行萃取、静置, 纸过滤,调节滤液至 烧杯中,加入搅 收集下层氯仿层,并重复萃取两次,合并氯仿层。氯仿收集于 拌子并置于通风橱中于常温下搅拌。待氯仿挥发后,即得到鼠李糖脂的提取 物。 ...鼠李糖脂同系物的分离与鉴定 取适量提纯后的鼠李糖脂,用甲醇溶解配制为. 的 /的溶液,通过. 微孔滤膜,不用时于?下保存。 用.进行鼠李糖脂同系物结构的鉴定,并采用对各同系物进行面积归 一化,并计算平均分子量。进样量此。 ×. 条件: .韭。流动相为水,为乙 柱 , 腈,. ,:为:,. ,:由:线性变化为:,并保持 . /。 ,:由:线性变为:,. 保持:的比例,流速为 检测器参数为:气体压力: ,增益:,喷雾器加热器级别:%,漂移管 温度:?。各组分质量分数的确定采用面积归一化法。 ;碰撞 质谱条件:雾化气和干燥气都为;毛细管电压:. ;椎孔电压: 电压: ;喷雾电压:. ;离子源温度:?:脱溶温度:?;柱后流出 物导入离子源速率:肛/质谱扫描质量数范围:.删亿;检测方式为正离 子检测。 .结果与讨论 ..鼠李糖脂同系物的分析及平均分子量的测定 ... .分析鼠李糖脂同系物 对提纯后的大庆油田鼠李糖脂用.进行了分析,分离条件如...所示,得 到三种同系物的选择离子图及质谱图如图、伉和.瓴所示。可以确定 鼠李糖脂含有种同系物,分别为、..和.。 第二章鼠李糖脂提纯、分析及微乳液的配制 :. . 一...一~?. 也:譬文嚣。。馏? 图一选择离子流图 .? : ? , 强硬 镐 / 赳也心山 。.。。.?.。。。.。。... ..?一~一?? 图质谱图 .一 :秘 ? . 图选择离子流图 . ’:. ‘ 西 捌 陷、 尹 ,妇 \ 哩蛐 小 。划 。. .‖ .:一 .. 。 图质谱图 . ??,。’‘描/江南人学硕士论文 略 . 图选择离子流图 .? 图质谱图 . 锄 ... 测定鼠李糖脂平均分子量 按分离条件...,用分析了提纯后的鼠李糖脂,其分离图谱如图所示。 对种同系物面积归一化,由各同系物式量和所占含量,根据公式: 》计算得出鼠李糖脂提取物平均分子量为.。其中、啦、 分别为按照出峰顺序所对应的同系物的相对含量,、、分别为对应三种同系 物的式量。通过对各色谱峰的检索,确定各色谱峰所对应的物质见表?。 珊 瑚 渤 瑚 伽 牮番 伽 ? 娜? 帆 图鼠李糖脂提纯物的分离色谱图 .第二章鼠李糖脂提纯、分析及微乳液的配制 表.鼠李糖脂提取物中三种同系物组分的相对含量 ...鼠李糖脂微乳体系稳定性的考察 ...鼠李糖脂浓度的影响 鼠李糖脂作为表面活性剂对微乳体系稳定性起到决定性作用。考察了鼠李糖脂浓度 对形成微乳体系的影响,发现当鼠李糖脂浓度大于.%/时,可以形成微乳;但当 鼠李糖脂浓度逐渐加大时,受到溶解度的限制,当浓度大于.%/时,微乳液中有 少量鼠李糖脂开始析出。因此可以形成稳定微乳的鼠李糖脂浓度范围为.. .%/。 ...缓冲液 考察了从...范围内,微乳体系的稳定性。在该范围内以微乳组成为: /硼砂缓冲液制备微乳 .%/李糖脂.%/庚烷..%/ 内就能 液,经过超声与静置,最终可得到稳定的微乳体系,在为.和.时, .下, 形成微乳体系,而其他下需放置 才能得到澄清透明的微乳液。在 微乳液最为稳定,至少可保存一个月。 ...油相浓度 考察了以正庚烷为油核,通过改变油核浓度对微乳稳定性的影响,发现当油核浓度 为..%~时,易形成稳定的微乳。 ...助表面活性剂 通常选用中等链长的醇作为助表面活性剂,最长用的是正丁醇,考察了正丁醇的量 对体系稳定性的影响,发现不选用正丁醇也能形成稳定的微乳,正丁醇的加入反而不易 形成微乳。 ...有机溶剂 通过考察发现,鼠李糖脂微乳体系对于甲醇和乙腈有很大的容忍度。加入和微乳液 相同体积的有机溶剂而不破乳。 .小结 以液一液萃取法提纯鼠李糖脂,通过考察不同的萃取溶剂,发现氯仿无明显乳化现 象。随后对提取物进行定性和定量分析,以分离了鼠李糖脂的三种同系物,并用 确定了三种同系物的结构。 垩塑盔兰婴主丝苎 通过对鼠李糖脂微乳体系稳定性的考察发现,鼠李糖脂在弱碱条件下可以形成稳定 /硼砂 .。该 的微乳,其配比为:.%/李糖脂..%/正庚烷 微乳中表面活性剂所需的用量很少,并且不需助表面活性剂,其稳定性受鼠李糖脂浓度、 、助表面活性剂和有机溶剂的影响,在最佳配制比例下,微乳液至少可保持个月澄 清透明。该体系可以承受很高比例的有机溶剂而不破乳。在中,有机溶剂的加 入可以增加脂溶性分析物的洗脱,提高其分离度并改善峰形:并且鼠李糖脂所制得的微 乳离子强度小,有望获得更快的电渗流速。该微乳体系稳定性考察,对于鼠李糖脂在 中的应用有着重要意义。 第三章鼠李糖脂制各微乳并应用于快速分析化妆品中糖皮质激素类物质 第三章鼠李糖脂制备微乳并应用于快速分析化妆品中 糖皮质激素类物质 . .引言 激素是指生物体中内源产生的作用于器官组织的分化和调节代谢功能的 微量有机物质。糖皮质激素是应用最为广泛的激素之一,它又叫肾上腺 皮质激素,是由肾上腺皮质产生,被广泛用于治疗入和动物的炎症及免疫调节疾病;由 于皮质激素可以使皮肤在短时间内光滑、细腻、白皙,也被一些违法厂家添加到化妆品 中,因此存在皮肤损害,骨质疏松、肌肉萎缩、生长迟缓以及免疫系统疾病等副作用?。 皮质激素在化妆品行业中属于违禁品【】。糖皮质激素属于电中性的物质,具有较强的疏 水性,有些结构极其相似,如氢化可的松、泼尼松、泼尼松 龙结构见图.等等。在临床上糖皮质激素也可用来一些炎症和过敏 症状的治疗,例如类风湿性关节炎、风湿病、胶原性疾病、红斑狼疮、重症哮喘、急性 炎症和肾病综合症等。 糖皮质激素的基本结构见图.,维持生理功能必需基团基本结构为甾核、的酮 基、.的双键、的羰基。 图糖皮质激素基本结构式 嘻 在糖皮质激素的分离方法上主要有色谱法、电化学法和电泳法。色谱法具有分离效 率高、检测灵敏度高、样品用量少、选择性好、多组分同时分析以及易于自动化等优点, 与质谱联用已经发展成熟。因此出现了气相色谱.质谱啦】和液相色谱质谱 .法。它们结合了色谱的定量和质谱的定性能力,是目前比较常用的定性定量 方法。】等用.分析测定了种动物体中含有的激素和种人工合成的激 素,分析前对样品进行了预处理,并用两种衍生化试剂在微波加热条件下,对样品进行 了衍生化。但.通常需要衍生化使分析物汽化,增加了分析操作的复杂程度。 具有良好的重现性、分离效率和灵敏度,已经成为首选分析方法【“《。】等利 用在 线萃取液质联用法对种激素进行了测定,检测限已经低于一个飞摩尔,大大提高了分 析的灵敏度。但前处理复杂,需要大量时间进行预处理,去除样品基质,否则复杂样品 江南大学硕士论文 易污染色谱柱,影响分析结果的准确性。 电化学法具有高灵敏度、响应快、选择性好等优点,等以富勒烯修饰过 的玻碳电极,利用方波伏安法测定了药物和血浆中肾上腺激素激素地塞米松的含量,灵 敏度达到.坤~。】等用电位滴定法同时测定泼尼松、泼尼松龙和地塞米松, 发现峰电位重叠严重,因此采用了两种化学计量学方法,进而可应用于三种物质的同时 测定。但电化学方法受周围环境影响较大,不具有足够好的重现性。而且修饰电极需要 大量的时间,不适用于快速测定分析。 毛细管电泳具有快速、高效、超低样品量、低溶剂用量等优点,近年来发展迅速。 胶束毛细管电动色谱已用于分离皮质激素这类电中性的小分子,单独使用十二 烷基硫酸钠的胶束体系选择性较低】,【等采用与胆酸钠 复配的胶束体系,同时加入有机添加剂,分离了六种激素类物质,但体系复杂, 难以分 离的激素如氢化可的松和泼尼松龙没有涉及;】等采用了.%/.%/ / 乙腈..%/正丁醇的 .的体系,但该体系并没有将氢化 可的松和泼尼松龙完全分开,同时存在有机溶剂的挥发导致重现性下降。. 【】等在原 来胶束配比上加了.%/『中等极性的酒石酸二乙酯作油相制备微乳体系,采用 微乳 内分离两种激素,但分离度仍不够理想,且分 毛细管电动色谱,可在 】等用.%/去氧胆酸钠和.%/十二烷基聚氧 析时间长。 ,分 乙烯醚,除了加入助表面活性剂正丁醇还添加了一环糊精,完成分析需要 离度虽有所改善,但该体系的组成依旧复杂。 .实验 ..实验试剂与仪器 ...试剂 第三章鼠李糖脂制备微乳并应用于快速分析化妆品中糖皮质激素类物质 一 保定天惠分离科学研究所 高效毛细管电泳仪 上海新苗医疗器械制造有限公司 超声清洗器 梅特勒.托利多有限公司 电子天平 美国密理博 .岬尼龙过滤器电位测定仪 英国马尔文公司 //一 德国公司 激光光散射系统 ..实验方法 ...样品储备液配制 分别称取所需的泼尼松、氢化可的松和泼尼松龙结构式如图.所示 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品溶 于甲 醇,超声 ,配制成三种物质浓度均为. /的标准储备液。 ...微乳液制备 .,.% 鼠李糖脂.%,/一正庚烷.%,/硼砂缓冲液 /, 容量瓶中,超声 ,静置 成澄清、稳定的微乳液。该微乳 /混合于 液在室温下至少稳定一个月。以此作为电泳运行缓冲液。进行运行缓冲液组 成优化时, 制备方法同上。 ...样品处理 准确称取. 甲醇超声提取 。以 /离 化妆品样品撑, 心 ,静置 ,移去上层清液,下层沉淀重复提取一次。合并上层清液旋转蒸 发,浓缩。甲醇定容至 ,待测。其余样品“,撑的处理步骤同前。 ... 电位的测定 测定微乳体系的电位来表征微乳液滴的表面电荷密度。实验在 激光粒度测定仪上进行,在条件下,从进样口注入微乳液,测定微乳体系的‘ 电位。每个试样测定五次,取平均值。 ...微乳粒径的测定 动态激光光散射实验在//.激光光散射系统上进行,在恒定温度 ?,波长.,固定入射角条件下,对微乳液样品进行扫描,测量微乳液滴粒 径分布曲线,然后通过.软件拟合作图,最终得到微乳液滴粒径结果。 ...电泳条件 熔融石英毛细管 ;电压: ,温度:?;进 ,有效长度 。 样方式: 电动迸样 ;紫外检测波长: 。 为了保证重现性,将澄清的微乳体系,用. .微孔滤膜过滤,并超声脱气 / ,在两次运行之 毛细管在每天使用前用. 、水、缓冲溶液分别冲洗 江南大学硕士论文 、. /冲洗。 间,毛细管分别用水 、运行缓冲液 图泼尼松、氢化可的松和泼尼松龙的结构式 . .结果与讨论 鼠李糖脂的羧基和羟基官能团,在碱性条件下存在静电作用力和氢键作用力,两种 力使微乳液滴在不同条件下呈现不一样的电位和粒径大小;本文还考察了微乳 体系在不同表面活性剂浓度、离子强度、油相用量以及分离条件下对分离的影响。 .. 分离影响因素 ...缓冲溶液对分离的影响 影响着电渗流和分析物的电迁移速率、微乳液滴的大小、电荷密度及鼠李糖脂的 表面活性等,是主要影响因素。考虑到鼠李糖脂在低条件下的难以溶解以及在高 下的易水解,本实验考查了从.到.,对三种分析物的分离影响。由图.可见, .处迁移时间 随着值的升高迁移时间增长,最长分析时间在 .处,随后在 又缩短。由于影响着鼠李糖脂中羧基的电离和氢键作用力,继而影响微乳液滴的 电位和粒径,如图所示。从.增加到.,微乳液滴粒径和电位 .处鼠李 随之增加,但荷质比变大,迁移时间变长。 .处,两者均出现折点, 糖脂具有最高的表面活性、最低的临界胶束浓度,形成最紧密的结构【.,此时虽 电位变小,微乳液滴粒径较小,较高的荷质比导致了微乳液滴假固定相最长的迁移 .,粒径增加比电势增加得更为显著,荷质比的下降使带负电 时间;从.:至 .处的更短。 荷的假固定相电迁移速率减小,因此,在 .处的迁移时间比在 .处,氢化可的松和泼尼松龙之间的分离度最大,且.,满足 如图.所示,在 .的缓冲液为最佳选择。 了定量分析的要求。所以第三章鼠李糖脂制备微乳并应用于快速分析化妆品中糖皮质激素类物质. 羔 晷 叱 ,?;一罂西一: 图? 对迁移时间及分离度的影响 . . 运行缓冲液 :.%鼠李糖/旨,/一.%正庚烷?,/ ;温度:.?;曲线 /硼酸一硼砂缓冲液 ;电压: :.泼尼松,.氢化可的松,.泼尼松龙,.泼尼松龙和氢化可的松分离度 。进 样: / 。 ;检测波长: 髑 懈 攒 协 拐 均 伽 书 / ? 撕 ,?叮苍间 ? 筠 ? 娜 . 珏. . .瞄 . . . . .图 对微乳电位和粒径的影响 . 微乳液:.%鼠李糖脂猢,/.%正庚烷,/ /硼酸硼砂缓冲液 . ...鼠李糖脂浓度对分离的影响 鼠李糖脂的浓度影响了微乳的稳定性、分析物的容量因子以及分析时间。当 鼠李糖 脂的量.%/时,不能形成微乳。本实验考察了鼠李糖脂浓度从.?.%/ 变化对分离的影响。如图.所示,迁移时间以及氢化可的松和泼尼松龙之间的 分离度 都随着鼠李糖脂浓度的增加而增加,当鼠李糖脂浓度为.%时,最难分离的氢 化可的 松和泼尼松龙两物质的分离度.,所以.%/的鼠李糖脂浓度为最佳。 江南大学硕七论文. 他 . .写 竹 .誊 叱 . ,;一巴西一:. . . . . . .?. . ,%.删 图.鼠李糖脂浓度对迁移时间及分离度的影响. .。其余条件等皆同图 运行缓冲液 :.?。 。 ...缓冲溶液浓度对分离的影响 硼砂缓冲液的浓度对电渗流速度和分析物分析时间具有很大的影响。低离子 强度的 缓冲液不具有足够的缓冲容量,导致在电泳过程中变化和较差的重现性,而 高浓度 的缓冲液除了使电渗流变慢,还会导致焦耳热的显著增加和分离效率降低。 本实验考察 / . /不同离子强度的硼砂缓冲液对分离的影响,由图.可见,? 硼砂缓冲液均可以达到基线分离。综合考虑分离度和分离时间,选 /硼砂缓 冲溶液为最佳。 ? 坦 号 ? 芷 ,筝藿口一冶妇 : 图.硼砂缓冲液浓度对分离的影响 ..。其余条件等皆同图 : 运行缓冲液 .. ...油相的影响 考察了...%/正庚烷的量对分离度的影响,结果如图所示,可以看出 随着油量从.%至增.%时,对分离时间的影响不大,变化在%之内;当正庚烷 兰三兰垦全塑堕型鱼丝塾茎壁旦王坚兰里鉴竺堡望坌堑些鳖璺塑些壁翌耋 耋塑堕 含量为.%/时,分离度最大,可能是在此配比时,具有合适的荷质比,利于分析 物质在两相之间的分配。考察了以己烷替代正庚烷,发现两者在分离时间和分离度上无 区别。故选用.%/毒性相对较小的正庚烷作为油相。 ?叱一山,;一巴口一: .. . . . . 咖,《%,/ 图正庚烷对分离的影响 . .。其余条件等皆同图 运行缓冲液 : 嬲 .。 ..分离条件及进样条件的影响 ...温度的影响 温度影响分析物的分配系数、缓冲液的粘度和电泳速率。分离温度较低时,体系粘 度大,扩散系数小,传质阻力大,柱效下降,分离度也较差;当温度较高时,分配系数 变小,分离度也减小。考察了温度从.?对分离的影响,如图.所示,可见在考察 的温度范围内,随着温度的升高,分析时间减小;在?时具有最大的分离度。因此 选择在具有最大的分离度的?条件下进行分离。 倡 竹 坦 ? ?葛;窭量: .蚋硇唁?? 图.温度对分离的影响 . : .。其余条件等皆同图 运行缓冲液 嬲.。江雨大学坝士论文 ...分离电压的影响 分离电压影响电渗流大小和组分在毛细管中的保留时间。分离电压过大,产 生焦耳 热,导致分离效率下降;电压过小使得分析时间大大延长。本实验考察了分离 电压从 能实现三物质的基线分离,考虑分离度 对分离的影响。结果分离电压在. 和分析时间,选择 为最佳分离电压。 ...进样电压和时间的影响 考虑到泼尼松龙和氢化可的松结构相似,分离难度大,当进样电压过大或时 间过长, / 的电动进样能达到分离度.的定量要求, 峰展宽导致分离度下降,经过优化, 同