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elisa测定克伦特罗残留量影响因子试验.doc

elisa测定克伦特罗残留量影响因子试验

董雪敏 2018-01-13 评分 0 浏览量 0 0 0 0 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《elisa测定克伦特罗残留量影响因子试验doc》,可适用于农林牧渔领域,主题内容包含elisa测定克伦特罗残留量影响因子试验ELISA测定克伦特罗残留量影响因子试验核心提示:谢炯炯(江苏省海门市农产品质量检测中心南通)摘要:ELIS符等。

elisa测定克伦特罗残留量影响因子试验ELISA测定克伦特罗残留量影响因子试验核心提示:谢炯炯(江苏省海门市农产品质量检测中心南通)摘要:ELISA(酶联免疫吸附法)测定畜产品中违禁药物克伦特罗残留量影响因子实验结果表明德国拜发与北京望尔生产的两种ELISA试剂盒具谢炯炯(江苏省海门市农产品质量检测中心南通)摘要:ELISA(酶联免疫吸附法)测定畜产品中违禁药物克伦特罗残留量影响因子实验结果表明德国拜发与北京望尔生产的两种ELISA试剂盒具有操作简单、时间短、成本低、敏感度高等特点。在室温条件下试验制备过程中必须做到控温度、控转速、控流速及洗板过程中须做好的个注意事项这样可大大提高在实际操作过程中检测的准确性。关键词:ELISA(酶联免疫吸附法)畜产品克伦特罗残留量影响因子前言:克伦特罗俗称“瘦肉精”是国家明令禁止使用在动物产品上的药物之一目前ELISA(酶联免疫吸附法)是快速筛选检测动物肌肉、肝脏、尿液等样品中克伦特罗残留的方法之一与高效液相色谱,气相色谱,气质联用仪器分析相比它具有操作过程简单样品前处理快捷可同时分析多个样品,分析时间短、成本低、敏感度高且对环境的污染少等优点但在实际应用过程中涉及样品的处理、试剂准备、加样、温育、显色、结果判定等较多方面其中任何一个步骤的操作不当都会影响最终的测定结果。为此笔者于年月期间进行了ELISA测定畜产品中克伦特罗残留量影响因子及不同试剂盒回收率差异度试验研究取得了较为理想的结果现将结果报道如下:实验部分实验原理ELISA(酶联免疫吸附测定法)测定克伦特罗残留量是利用抗原抗体的特异性反应以酶催化底物等方法作为显示系统用微孔板等作为反应、分离载体的一种生物学检测方法。仪器、、、ul、多道移液器ul、德国拜美国BIRAD型酶标仪、单道移液器发柱、离心机、振荡器试剂甲醇(分析纯)、氢氧化钠(分析纯)、正己烷(分析纯)、盐酸、pH磷酸二氢钾缓冲液、pH磷酸二氢钾缓冲液试剂盒试剂盒A:孔酶联板、克伦特罗系列标准溶液(浓度为、、、、、ugL)抗体工作液、酶标记物工作液、发色剂、反应停止液、缓冲液(德国拜发克伦特罗检测试剂盒)试剂盒B:孔酶联板、克伦特罗系列标准溶液(浓度为、、、、、ugL)抗体浓缩液、酶标记物工作液、底物液A液、底物液B液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液。(北京望尔生物技术有限公司克伦特罗检测试剂盒)试样的制备尿液取离心或过滤至清亮的猪尿直接测定猪肝用均质器均质样品,取g粉碎样品,加入lHl混合,振荡小时,达到均质,取g均质品加入离心瓶,在条件下离心分钟每分钟转以上转移上清液到另一个离心瓶,加入ulN氢氧化钠混合分钟加入l磷酸二氢钾缓冲溶pH混合在保存小时。在条件下离心分钟每分钟转以上,分离上清液温度升至室温上柱用l甲醇洗涤柱子流速为滴每秒、用lpH磷酸二氢钾缓液洗涤柱子、样品进柱子、再用lpH磷酸二氢钾缓液洗涤柱子、用空气或氮气吹分钟干燥柱子用l甲醇洗涤柱子在弱空气下蒸发溶剂用l蒸馏水溶解干燥的残留物待测定。ELISA实验分析程序将试剂盒温度平衡至室温取出实验所需微孔布板向酶标板孔中依次加入标准品环境中反应分钟洗板、加入酶标记物和样品各ul分别依次加入克伦特罗抗体环境中反应分钟洗板加入底物环境中反应分钟加入反应终止液放入酶标仪n处进行读数最后进行计算和处理样本吸光值与其所含克伦特罗成负相关。所获得的标准值和样品吸光度值的平均值除以第一个标准(标准)的吸光度值再乘以。百分吸光度值(),BBXB标准溶液或样本溶液的平均吸光度值BgL标准溶液的平均吸光度值。计算的标准值绘成为一个对应克伦特罗浓度(gL)的半对数坐标系统曲线图相对应每一个样品的浓度(gkg)可以从校正曲线上读出浓度浓度为、、、、、ugL相对应的吸光度为、、、、、计算出对应浓度对数绘制相应的半对数坐标系统曲线图读出浓度或者用酶标仪专用软件进行直接计算和处理更加有利于大量样品的准确、快速分析。在以上试验制备过程中要做到“三控”控温度、控转速、控流速。控温度时应做到:控制室温、温育时恒温箱内温度始终保环境、样品离心时温度保持在控转速时应做到:样品离心时速度为持在分钟转是影响准确率的重要因子控流速应做到:控制试剂和样品上柱时流速为滴秒、滴分钟这是前处理步骤中十分关键的注意点。在进行洗板操作时一般应注意以下几个方面:、甩干孔内反应液、洗涤液在板孔上方处注入相互不得溅溢、洗涤液数量保证控制在ul以上放置秒左右、吸干孔内液体在吸水纸上拍干次数为次以上、洗板后应立即进行下一步操作并保证枪头与移液器的紧密接触在分析程序中洗板虽不是反应步骤但也是决定实验成败的关键因子之一。目的是吸去反应液中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。通过上述方法可以很好提高酶联免疫分析的准确性将吸光度变异系数控制在有效范围内并将添加回收率控制在有效范围内确保分析数据的准确性。结果与分析表、不同试剂盒吸光度变异系数试验结果表(单位ugL)处理项目试剂盒A吸光度浓度均值变异系数()试剂盒B吸光度浓度均值变异系数()备注:代表平均值从表一可以看出,试剂盒浓度为ugL时,德国拜发试剂盒与北京望尔试剂盒变异系数分别为与之间这说明在相同的条件下两种试剂盒对克伦特罗均具有较高的灵敏度。表、两种不同试剂盒添加回收率试验结果表(单位:ugkgugL)样品名称猪肝猪尿添加浓度回收率()试剂盒A试剂盒B备注:代表平均值从表可以看出两种不同厂家生产的试剂盒在测定克伦特罗残留量时添加浓度ugkg、ugL时添加回收率均能达到之间属有效范围均可用于生产实际中。二种试剂盒对猪尿敏感性均较好于猪肝德国拜发生产的试剂盒添加回收率稳定性略高于北京望尔公司生产的试剂盒。小结从本次试验结果可以看出酶联免疫吸附法具有操作简单、灵敏度高、成本低、可批量检测等优点适合县级畜产品质量检测机构进行快速测定使用。影响试剂盒测定准确率的因子多种多样但最主要的影响因子为试验制备过程中的温度、转速、流速同时在洗板过程中必须做到个注意事项以提高检测准确率。本次试验未与高效液相色谱及气质联用色谱法同步跟踪其关联性还有待于进一步研究。参考文献食品卫生检验方法理化部分(二)北京:中国标准出版社,仲德昌,吕志平,胡小云,等进出口食品中农药残留实用检测方法北京:中国标准出版社,,楼书聪,杨玉玲化学试剂配制手册第版南京:江苏科学技术出版社,,

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