关闭

关闭

关闭

封号提示

内容

首页 金黄色葡萄球菌检测

金黄色葡萄球菌检测.doc

金黄色葡萄球菌检测

邹善能
2019-01-17 0人阅读 0 0 0 暂无简介 举报

简介:本文档为《金黄色葡萄球菌检测doc》,可适用于医药卫生领域

金黄色葡萄球菌检测 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外其他设备和材料如下:恒温培养箱:℃±℃。冰箱:℃~℃。恒温水浴箱:℃~℃。天平:感量g。均质器。振荡器。无菌吸管:ml(具ml刻度)、ml(具ml刻度)或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶:容量ml、ml。无菌培养皿:直径mm。注射器:ml。pH计或pH比色管或精密pH试纸。 培养基和试剂BairdParker琼脂平板:见附录中。脑心浸出液肉汤(BHI):见附录中。兔血浆:见附录中。营养琼脂小斜面:见附录中。无菌生理盐水:见附录中。 操作步骤样品的稀释固体和半固体样品称取g样品置盛有ml生理盐水的无菌均质杯内rmin~rmin均质min~min或置盛有ml稀释液的无菌均质袋中用拍击式均质器拍打min~min制成:的样品匀液。液体样品以无菌吸管吸取ml样品置盛有ml生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中充分混匀制成:的样品匀液。用ml无菌吸管或微量移液器吸取:样品匀液ml沿管壁缓慢注于盛有ml稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)振摇试管或换用支ml无菌吸管反复吹打使其混合均匀制成:的样品匀液。按操作程序制备倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次换用一次ml无菌吸管或吸头。样品的接种根据对样品污染状况的估计选择个~个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)在进行倍递增稀释时每个稀释度分别吸取ml样品匀液以ml、ml、ml接种量分别加入三块BairdParker平板然后用无菌L棒涂布整个平板注意不要触及平板边缘。使用前如BairdParker平板表面有水珠可放在℃~℃的培养箱里干燥直到平板表面的水珠消失。培养在通常情况下涂布后将平板静置min如样液不易吸收可将平板放在培养箱℃±℃培养h等样品匀液吸收后翻转平皿倒置于培养箱℃± ℃培养h~h。典型菌落计数和确认金黄色葡萄球菌在BairdParker平板上菌落直径为mm~mm颜色呈灰色到黑色边缘为淡色周围为一混浊带在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些外观可能粗糙并干燥。选择有典型的金黄色葡萄球菌菌落的平板且同一稀释度个平板所有菌落数合计在CFU~CFU之间的平板计数典型菌落数。如果:a)只有一个稀释度平板的菌落数在CFU~CFU之间且有典型菌落计数该稀释度平板上的典型菌落b)最低稀释度平板的菌落数小于CFU且有典型菌落计数该稀释度平板上的典型菌落c)某一稀释度平板的菌落数大于CFU且有典型菌落但下一稀释度平板上没有典型菌落应计数该稀释度平板上的典型菌落d)某一稀释度平板的菌落数大于CFU且有典型菌落且下一稀释度平板上有典型菌落但其平板上的菌落数不在CFU~CFU之间应计数该稀释度平板上的典型菌落以上按公式()计算。e)个连续稀释度的平板菌落数均在CFU~CFU之间按公式()计算。鉴定从BairdParker平板中任选个可疑菌落(小于个全选)分别接种到mlBHI和营养琼脂小斜面℃±℃培养h~h。取新鲜配置兔血浆ml放入小试管中再加入BHI培养物ml~ml振荡摇匀置℃±℃温箱或水浴箱内每半小时观察一次观察h如呈现凝固(即将试管倾斜或倒置时呈现凝块)或凝固体积大于原体积的一半被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂按说明书操作进行血浆凝固酶试验。结果如可疑挑取营养琼脂小斜面的菌落到mlBHI℃±℃培养h~h重复试验。 结果计算公式():式中:      T样品中金黄色葡萄球菌菌落数A某一稀释度典型菌落的总数B某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数C某一稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数d稀释因子。公式():式中:      T样品中金黄色葡萄球菌菌落数A第一稀释度(低稀释倍数)典型菌落的总数A第二稀释度(高稀释倍数)典型菌落的总数B第一稀释度(低稀释倍数)血浆凝固酶阳性的菌落数B第二稀释度(高稀释倍数)血浆凝固酶阳性的菌落数C第一稀释度(低稀释倍数)用于血浆凝固酶试验的菌落数C第二稀释度(高稀释倍数)用于血浆凝固酶试验的菌落数计算系数d稀释因子(第一稀释度)。 结果与报告根据BairdParker平板上金黄色葡萄球菌的典型菌落数按中公式计算报告每g(ml)样品中金黄色葡萄球菌数以CFUg(ml)表示如T值为则以小于乘以最低稀释倍数报告。附录培养基和试剂BairdParker琼脂平板成分胰蛋白胨              g牛肉膏              g酵母膏              g丙酮酸钠              g甘氨酸              g氯化锂(LiCl·HO)      g琼脂                g蒸馏水              mlpH                  ±增菌剂的配法卵黄盐水ml与经过除菌过滤的亚碲酸钾ml混合保存于冰箱内。制法将各成分加到蒸馏水中加入煮沸至完全溶解调节pH。分装每瓶ml℃高压灭菌min。临用时加热溶化琼脂冷至℃每ml加入预热至℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂ml摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过h。脑心浸出液肉汤(BHI)成分胰蛋白质胨              g氯化钠                g磷酸氢二钠(NaHPO·HO)  g葡萄糖                g牛心浸出液              mlpH                  ±制法加热溶解调节pH分装mm×mm试管每管ml置℃min灭菌。兔血浆取柠檬酸钠g加蒸馏水ml溶解后过滤装瓶℃高压灭菌min。兔血浆制备:取柠檬酸钠溶液一份加兔全血四份混好静置(或以rmin离心min)使血液细胞下降即可得血浆。营养琼脂小斜面成分蛋白胨                g牛肉膏                g氯化钠                g琼脂                ~g蒸馏水                mlpH                  ~制法将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内加入氢氧化钠溶液约ml调节pH~。加入琼脂加热煮沸使琼脂溶化分装mm×mm管℃高压灭菌min。无菌生理盐水成分氯化钠                g蒸馏水                ml制法称取g氯化钠溶于ml蒸馏水中℃高压灭菌min。

用户评价(0)

关闭

新课改视野下建构高中语文教学实验成果报告(32KB)

抱歉,积分不足下载失败,请稍后再试!

提示

试读已结束,如需要继续阅读或者下载,敬请购买!

评分:

/8

意见
反馈

立即扫码关注

爱问共享资料微信公众号

返回
顶部

举报
资料