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离体家兔肠肌运动
1.实验目的:学习哺乳动物离体肠标本制备方法，观察消化道平滑肌的一般生理特性及某些因素对舒缩活动的影响。
2.实验原理:消化道平滑肌和骨骼肌、心肌一样,也具有兴奋性、传导性和收缩性,有些也具有自律性。相比之下消化道平滑肌的兴奋性低,收缩慢,伸展性大,具有紧张性收缩,对化学物质、温度变化等刺激较敏感的特性。本实验选取家兔十二指肠。十二指肠离体后,将其置于38?台氏液中,观察其收缩活动及环境变化的影响,观察分析上述生理特性。
3.实验材料:1、实验动物:家兔。2、实验器械: 电热恒温水浴锅、麦氏浴槽、张力换能器、生物记录系统、注射器、培养皿、烧杯、螺丝夹3、实验药品:25度台氏液、0.001%乙酰胆碱、0.001%肾上腺素、1N NaOH溶液、lN HCl溶液。 4..实验方法:4.1、标本制备(肠肌标本) ?击昏家兔:用木槌猛击兔头枕部,使其昏迷。?剖开腹腔快速取出肠管:立即剖开腹腔,找出胃幽门与十二指肠交界处,快速取长20~30cm的肠管(十二指肠),先将与该肠管相连的肠系膜沿肠缘剪去,置于供氧台氏液中轻轻漂洗,把肠内容物基本洗净。
4.2、标本固定 制作离体肠标本:将肠管分成数段,每段长1-2cm,
?左右的台上端用线连接张力换能器,下端用线固定于固定钩，保存于供氧的38氏液中，调节肌张力至2~3g。
4.3、仪器连接及参数(仪器定标) 张力换能器与生物信号采集处理系统第一通道，生物信号采集处理系统(RM6240系统)参数设置:直流，滤波频率10Hz，灵敏度3g，采样频率200Hz，扫描速度1s/div
4.4、实验观察 ?待标本稳定后,记录十二指肠平滑肌收缩的对照曲线。 ?乙酰胆碱的作用:用滴管吸入0.01%乙酰胆碱(Ach)向灌流浴槽内滴1~2滴。观察到明显效应后,立即从排水管放出浴槽内含乙酰胆碱的台氏液,加入新鲜温台氏液,以洗涤或稀释残留的乙酰胆碱,使之达到无效浓度,待十二指肠运动恢复后进行下一项。 ?肾上腺素的作用:按上述方法将0.01%肾上腺素加入浴槽内1~2滴,观察十二指肠运动的反应。当效果明显后,立即更换台氏液。 ?用25度的台氏液灌流肠肌，观察并记录其收缩幅度，待恢复正常。 ?NaOH的作用:按上述方法将NaOH溶液2~3滴入灌流浴槽内,观察其反应,效果明显后迅速冲洗,更换台氏液。 ?HCl的作用:按上述方法将1~2滴1mol/L HCl溶液入浴槽内,观察其反应,效果明显后迅速冲洗,更换台氏液。
5.实验结果:
6.实验讨论:6.1、正常情况下,我们观察到离体十二指肠平滑肌在台氏液中可以
自动地、缓慢地收缩。
6.2、在浴槽中加入0.001%乙酰胆碱(Ach)2滴后,可见离体肠管活动增强,描记曲线出现收缩频率变快,幅度增加。
机制
综治信访维稳工作机制反恐怖工作机制企业员工晋升机制公司员工晋升机制员工晋升机制图
如下:?Ach与肌膜M受体结合,使平滑肌Ca2+专用通道开放,Ca2+内流上升,一方面使肌浆[Ca2+]上升,收缩幅度上升;另一方面,使平滑肌兴奋性上升,直接或间接使其收缩频率上升。?Ach与肌膜M受体结合,引起生电性钠泵活动,使静息点位下降,最终引起平滑肌兴奋性上升,使其收缩频率上升。
6.3、在浴槽中加入0.001%肾上腺素2滴(约0.2ml)后,可见离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩频率变慢,幅度减小以及基线下移。机制如下:?肾上腺素与肠肌细胞膜上的α和β两种受体共同结合,使K+、Ca2+外流增多,细胞膜发生超极化,肠肌兴奋性降低,收缩频率下降。?同时,肾上腺素还单独作用于β受体,使Ca2+泵活动上升,还可以使Ca2+外流增加,使肌浆[Ca2+]下降,使收缩频率下降。?此外,肾上腺素还能使生电钠泵活动上升,引起细胞膜发生超极化,肠肌兴奋性降低,收缩频率下降。
6.4、消化道平滑肌对温度刺激敏感，将38度的台氏液迅速换成25度的台氏液，前期肠肌的代谢水平尚未适应新环境，随后肠肌的代谢逐渐升高至超过正常水平，最后趋于正常。
,离体肠管活动增强,描记曲6.5、在浴槽中加入1NNaOH溶液2滴后
线出现收缩幅度增加。机制如下:NaOH可以中和H+,使[H+]下降,使得Ca2+内流上升使平滑肌兴奋性上升,同时使肌浆网[H+]上升并使Ca2+与肌钙蛋白结合上升,最后使得其收缩频率和幅度上升。
6.6、在浴槽中加入1N盐酸溶液2滴后,离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩幅度降低,频率变慢。机制如下:?细胞外[H+]升高时,Ca2+通道的活性受到抑制,使得Ca2+内流减少,使肠肌兴奋性降低,收缩频率下降。?同时使肌浆网[H+]上升,使肌浆网[H+]下降,Ca2+与肌钙蛋白结合下降,使收缩幅度下降。
7.参考文献:
1. 杨宝峰.药理学.北京 .人民卫生出版社2008. P59、P90
2. 朱大年.生理学.北京.人民卫生出版社2009.P169
3. 陆源.林国华.杨午鸣.机能学实验教程(第二版)科学出版社2010.P263
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