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蛋白质分离提纯方法.doc

蛋白质分离提纯方法

传说里de小四
2017-12-03 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《蛋白质分离提纯方法doc》,可适用于综合领域

蛋白质分离提纯方法蛋白质分离提纯的一般原则前处理把蛋白质从原来的组织或溶解状态释放出来保持原来的天然状态并不丢失生物活性。常用的方法:匀浆器破碎、超生波破碎、纤维素酶处理以及溶菌酶等。超声波破碎法:当声波达到一定频率时使液体产生空穴效应使细胞破碎的技术。超声波引起的快速振动使液体局部产生低气压这个低气压使液体转化为气体即形成很多小气泡。由于局部压力的转换压力重新升高气泡崩溃。崩溃的气泡产生一个振动波并传送到液体中形成剪切力使细胞破碎。(粗分级分离可用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。这些方法的特点是简便、处理量大(细分级样品的进一步纯化。样品经粗分离以后一般体积较小杂蛋白大部分已被除去。进一步纯化一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳、等电聚焦等作为最后的纯化步骤。结晶是最后的一步分离纯化的方法:(分子大小溶解度电荷吸附性质对配体分子的生物亲和力等。(一)根据分子大小不同的纯化方法透析利用蛋白质分子不能通过半透膜使蛋白质和其它小分子物质如无机盐、单糖等分开。密度梯度离心。蛋白质颗粒的沉降系数不仅决定于它的大小而且也取决于它的密度。凝胶过滤利用蛋白质分子大小因为凝胶过滤所用的介质是凝胶珠其内部是多孔的网状结构。当不同的分子大小的蛋白质分子流过凝胶层析柱时比凝胶珠孔径大的分子进入珠内的网状结构而被排阻在凝胶珠之外随溶剂在凝胶珠之间的空隙向下移动并最先流出柱外比网孔小的分子能不同程度底自由出入凝胶珠的内外由于不同大小的分子所经路径不同而得到分离。大分子先被洗脱下来。小分子后被洗脱(二)利用溶解度差别的纯化方法(等电点沉淀和PH的控制蛋白质处于等电点时其净电荷为零由于相邻蛋白质分子之间没有静电斥力而聚集沉淀。因此在其他条件相同时它的溶解度达到最底点利用等电点分离蛋白质是一种常用的方法。蛋白质的盐溶和盐析中性盐可以增加蛋白质的溶解度这种现象称为盐溶。盐溶作用是由于蛋白质分子吸附某种盐类离子后带电层使蛋白质分子彼此排斥而蛋白质分子与水相互作用加强了因而溶解度增加当溶液的离子强度增加到一定数值时蛋白质的溶解度开始下降。当离子强度足够高时很多蛋白质可以从水溶液中沉淀出来这种现象称为盐析。盐析作用的主要原因是大量中性盐的加入使水的活性降低原来溶液的大部分甚至全部的自由基水转变成盐离子的水化水

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