[最新]试验七 克制剂和ph对酶活性的影响
实验七 pH对酶活性的影响
一、目的要求
1. 了解pH 对酶活性的影响
2. 掌握试验pH对酶活性影响的原理及方法
二、原理
酶的活力受环境的pH 的影响极为显著。通常只在一定的pH范围内才表现它的活性。一种酶活性表现最高时的pH 值为该酶的最适pH，低于或高于最适pH 时，酶的活性渐次降低。不同酶的最适pH不同(本实验以枯草杆菌α—淀粉酶来说明pH对酶活性的影响。
三、试剂与器材
试剂:
l. 0.5 ,可溶性淀扮溶液，新鲜配制。
2. α—淀粉酶稀释液。
3. 0.2 M 磷酸氢二钠溶液:称取NaHPO?2HO 35.51克，溶于水，定容至242
1 00 ml。
4. 0.1M柠檬酸溶液:称取CHO?HO 21.01克，溶于水中，定容至l000 ml。 6872
5(碘—碘化钾溶液
器材:
1. 试管及试管架
2(恒温水浴锅
3(吸管10ml 2 支, 5ml 8 支，2 ml 2 支
4. 白瓷调色板 l 块
四、操作
1(取 8 支试管，编号，用移液管按下表比例添加0.2 M磷酸氢二钠溶液和0.1 柠檬酸溶液，制备 pH 为 4 .4,7.2 的缓冲液。
试管号码 0.2 M磷酸氢二钠0.1 柠檬酸溶液 pH
(ml) (ml)
1 4.41 5.59 4.4
2 4.93 5.07 4.8
3 5.36 4.64 5.2
4 5.80 4.20 5.6
5 6.32 3.68 6.0
6 6.93 3.07 6.4
7 7.73 2.27 6.8
8 8.70 1.30 7.2
2(取 9 支试管，编号，将上述 8 种缓种液分别吸取 3 ml，分别加入相应号的试管中(第 1,8 号)。第9号试管加 pH 5.6 的缓冲液 3 ml。然后再向各试管添加 0.5 ,可溶性淀粉溶液 2 ml。将 9 支试管放入 37 ? 恒温水浴中预热 5,10 分钟。
3(向第 9 号试管添加α—淀粉酶稀释液 2ml，摇匀，仍在 37 ? 温水浴中保温。 1 分钟后，每隔 15 秒钟自第 9 号试管中取出一滴混合液，置白瓷板空穴中，以碘—碘化钾溶液试之，检验淀粉水解的程度，待结果呈橙黄色时，取出试管记下酶作用的时间(自加入酶液时开始)。注意:掌握第 9 号试管的水解程度是本实验成效的关键。
4. 以上l 分钟的间隔，依次向第 l, 8 号试管加入。α—淀粉酶稀释液2ml ，摇匀，并仍在 37 ? 恒温水浴中保温。然后，按紧 9 号管酶作用的时间，依次将各管取出，并立即加入碘—碘化钾溶液 2 滴，观察各管呈现的颜色，并
说明之。
五、思考
题
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:
1. pH 对酶活性影响的机理
2. 掌握试验 pH 对酶活性影响的原理及方法 3. 如果要定量测定 pH 对酶活性影响
方案
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如何设计,
实验七 酶的激活剂和抑制
一、目的要求
1. 了解激活剂和抑制剂对酶活性的影响
2. 掌握试验激活剂、抑制剂对酶活性影响的原理与方法
二、原理
酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。激活剂和抑制剂影响酶作用的需要量很少，常有特异性。
本实验以唾液淀粉酶为例，说明氯离子对该酶的激活作用以及铜离子对该酶的抑制作用。
三、试剂与器材
试剂:
l. 0.5 %可溶性淀粉溶液，新鲜配制。
2. 1%NaCl 溶液。
3. 0.5% CuSO?5HO溶液。 42
4. 唾液淀粉酶液:实验者先有清水漱口后，取唾液lml，稀释100 倍左右。
5. 碘一碘化钾溶液。
器材:
1. 试管及试管架
2. 恒温水浴锅
3. 吸管5ml 1支，lml 4 支
四、操作
1. 取3 支试管，编号后各加入3ml 0.5 ,可溶性淀粉溶液及1 ml稀释唾液(
1号试管加lml 1,氯化钠溶液。第2 号试管加lml 0.5 ,硫酸铜溶液，第3 号试管加lml 蒸馏水。
2. 将上述3 支试管，放入37 ? 恒温水浴中保温10,15 分钟后取出(保温时间因唾液淀粉酶活力而异，重做一次，以求明显之结果)。冷却后分别加入4,5滴碘一碘化钾溶液。观察比较三支试管颜色的深浅，并解释之。
五、思考题:
1. 回忆激活剂与抑制剂的分类。
2. 掌握激活剂，抑制剂对酶活性影响的方法。
. 如果定量测定激活剂抑制制对酶活性的影响方案如何制定,3
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