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氨基酸离子交换色谱实验方法改进.doc

氨基酸离子交换色谱实验方法改进

带着梦想去飞的小白
2017-10-06 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《氨基酸离子交换色谱实验方法改进doc》,可适用于综合领域

氨基酸离子交换色谱实验方法改进郧阳医学院(JYMC)年月,():实验技术氨基酸离子交换色谱实验方法改进张红梅,盂新云官守涛(郧阳医学院生化与免疫学综合实验室,医疗保健中心,湖北十堰)色谱技术广泛的应用于蛋白质,核酸,多糖,脂类,氨基酸等生物分子的分离和纯化…,是目前科研上常用的实验技术由于受实验条件的限制,至今难以在本科生中普及开展为了提高实验课质量,根据学生实验的特点,我实验室对如何将科研上常用的实验技术转化为学生实验进行了探讨】该研究对色谱实验方法进行了必要的改进,通过学生实验,取得了良好的效果l材料与方法实验仪器上海产内径为cm的上阀和下阀有导管联通的色谱柱,铁支架,胡蝶夹分光光度计,恒温水浴箱等为共用设备实验方法装柱:由于cm的色谱柱内径较粗,用滴管吸树脂装柱太慢,可用小烧杯将阳离子交换树脂和去离子水搅拌后直接装柱,色谱柱中装树脂的高度为l,cm,降低上阀的高度,多余液体即可从联通的导管中流出,直至液面与树脂平行,然后加pH的柠檬酸缓冲液至色谱柱中平衡,用pH试纸测流出的洗脱液至pH为止加样:待色谱柱的液面与树脂平面高度相同时,加入氨基酸(天冬氨酸和赖氨酸)混合液Ill,然后降低上阀的高度放出Illl液体,使氨基酸混合液进入树脂,以免加pH的柠檬酸缓冲液洗脱时稀释而不利于分离洗脱和收集:洗脱和收集的速度最重要,收集的速度过快,氨基酸不能得到单一的吸收峰,收集速度过慢,时间过长,学生在规定的时间内不能完成实验,不利于在学生中普及开展经反复探索洗脱液收集的速度为mlmin,用刻度试管每管收集Ild,首先用pH的柠檬酸缓冲液洗脱收集管,然后改用pill的NaOH溶液收集管定量:另备一组试管,每管吸取ml收集液,置相应的试管中,每管加pH的柠檬酸缓冲液ml,加茚三酮试剂ml,摇匀,置水浴中min取出冷却后,加o的乙醇ml,摇匀后用分光光度计以nm波长比色,读取各管吸光度值,以各管吸光度值为纵坐标,以管号为横坐标作图结果天冬氨酸全部收集在第管,赖氨酸收集在第l管,经比色分析后作图可得两个单一吸收峰讨论本研究根据氨基酸离子交换色谱实验的基本原理,对实验设备,实验方法进行了科学的改革,探索与实践,取得了良好的实验效果其优点表现在:所用树脂为型阳离子交换树脂,价格便宜,且可再生后反复使用,降低了实验成本,有利于在学生中广泛开展装柱速度快,传统的色谱柱内径较细,如装柱速度过快很容易在色谱柱内产生脱节现象改进后的色谱柱,可将树脂置小烧杯内以混悬液形式装柱,几分钟即可装好,不产生脱节现象,有利于学生操作分离氨基酸时洗脱速度快,传统的实验分离氨基酸时洗脱速度为mlh,改进后洗脱速度为mlh,有利于学生在规定的时间内完成实验开展色谱实验不仅仅是提高了实验的档次,使学生掌握了科学的实验方法,更重要的是通过实验使学生体会到,实验条件,实验方法并不是不可改变的,根据所掌握的实验技术和理论知识,对实验条件和实验方法可进行大胆的探索与实践通过实验既有利于启迪学生的创新思维,又有利于培养学生创新,创造,创业的能力同时对开展提高型和研究创新型实验也探索了一条新的途径关键词氨基酸离子色谱实验方法改进中围法分类号R文献标识码B文章编号()参考文献】蒋秉坤,范钦信主编临床生物化学及生物化学检验M北京:人民卫生出版社,,孙设宗,王秀云,张红梅血清蛋白醋酸纤维膜电泳易出现的问题及对策J郧阳医学院,,():孙设宗,王生慧,张红梅冷冻肝酶活性的衰减测定及其应用J郧阳医学院,,():收稿日期】一l一l

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