0.1M PB、0.2M PB、0.01M PBS、4%多聚甲醛、20%蔗糖溶液的配制

0.1M PB、0.2M PB、0.01M PBS、4%多聚甲醛、20%蔗糖溶液的配制0.1M PB、0.2M PB、0.01M PBS、4%多聚甲醛、20%蔗糖溶液的配制 PB，phosphate buffer，磷酸盐缓冲液； PBS，phosphate buffered saline，磷酸盐缓冲盐水。 0.1M PB常用于配制固定液、蔗糖等； 0.01M PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等。 0.1M PB、0.2M PB的配制 A液：0.2M NaH2PO4·n1H2O B液：0.2M Na2HPO4·n2H2O 不同pH值磷酸盐缓冲液（PB）的配制：参照下表，A液X ml，加入B液Y ...

0.1M PB、0.2M PB、0.01M PBS、4%多聚甲醛、20%蔗糖溶液的配制 PB，phosphate buffer，磷酸盐缓冲液； PBS，phosphate buffered saline，磷酸盐缓冲盐水。 0.1M PB常用于配制固定液、蔗糖等； 0.01M PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等。 0.1M PB、0.2M PB的配制 A液：0.2M NaH2PO4·n1H2O B液：0.2M Na2HPO4·n2H2O 不同pH值磷酸盐缓冲液（PB）的配制：参照下表，A液X ml，加入B液Y ml，为100ml 0.2M PB；加水稀释至200ml则为0.1M PB。 PH X ml Y ml pH X ml Y ml 5.7 93.5 6.5 6.9 45.0 55.0 5.8 92.0 8.0 7.0 39.0 61.0 5.9 90.0 10.0 7.1 33.0 67.0 6.0 87.7 12.3 7.2 28.0 72.0 6.1 85.0 15.0 7.3 23.0 77.0 6.2 81.5 18.5 7.4 19.0 81.0 6.3 77.5 22.5 7.5 16.0 84.0 6.4 73.5 26.5 7.6 13.0 87.0 6.5 68.5 31.5 7.7 10.0 90.0 6.6 62.5 37.5 7.8 8.5 91.5 6.7 56.5 43.5 7.9 7.0 93.0 6.8 51.0 49.0 8.0 5.3 94.7 V（单位：L）0.1M PB V/2 0.2M PB + V/2 UP（超纯水） VA=V/2·X/(X+Y)=V/2·X/100=VX/200 VB=V/2·Y/(X+Y)=V/2·Y/100=VY/200 nA=CA·VA=0.2·VX/200=VX/1000 nB=CB·VB=0.2·VY/200=VY/1000 mA=MA·nA=MAVX/1000 mB=MB·nB=MBVY/1000 也即分别称取质量（单位：g）为mA的 NaH2PO4·n1H2O和mB的Na2HPO4·n2H2O，加水至V。同理，欲配V（单位：L）0.2M PB，应分别称取质量（单位：g）为MAVX/500的NaH2PO4·n1H2O和MBVY/500的Na2HPO4·n2H2O，加水至V。 0.01M PBS的配制 1L： 0.2mol/L PB（pH 7.4） 50ml* NaCl 8.5～9g(约0.15mol/L) 超纯水稀释至1000ml *A：NaH2PO4·2H2O mA=MAVX/500=156.01（华大）×0.05×19/500g=0.296419g B：Na2HPO4·12H2O mB=MBVY/500=358.14（华大）×0.05×81/500g=2.900934g 或Na2HPO4 mB=MBVY/500=141.96（阿拉丁）×0.05×81/500g=1.149876g 一般用与缓冲液相对应的弱酸根或弱碱性离子来调节pH，如H3PO4，也可用HCl和NaOH。 PBS与KPBS 的区别？ PBS：PB + NaCl KPBS：PB + NaCl + KCl 通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲液中所有磷酸根的浓度，而非Na+或K+的浓度，Na+和K+只是用来调节渗透压的。 4%多聚甲醛（PFA）的配制 1L: PFA 40g 0.1M PB（pH 7.4）* 先加入500~800ml，加热至60℃，磁力搅拌使粉末完全溶解，再稀释至1L *1L 0.1M PB（pH 7.4）： A：NaH2PO4·2H2O mA=MAVX/1000=156.01（华大）×1×19/1000g=2.96419g B：Na2HPO4·12H2O mB=MBVY/1000=358.14（华大）×1×81/1000g=29.00934g 或Na2HPO4 mB=MBVY/1000=141.96（阿拉丁）×1×81/1000g=11.49876g 可用滤纸过滤去除杂质。4℃保存。 20%蔗糖溶液（sucrose）的配制 1L：蔗糖 200g 0.1M PB（pH 7.4）* 稀释至1L * PB（不加NaCl）作为溶剂配制蔗糖溶液是必要的，既保证pH值（7.2-7.4），又可避免冰冻过程中盐类造成的额外损伤。蔗糖是一种防冻剂，兼有脱水的作用，它可以减少标本在冰冻切片时冰晶形成的数量和大小。常用浓度为5%~30%，一般光镜研究，仅用20%蔗糖处理足够；若制备电镜标本，在冰冻前最好经上行蔗糖（5%、10%、15%及20%蔗糖-5%甘油等）处理，以确保其良好的细微结构。

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