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国家基金研究内容

卡哇伊卡啦
2019-06-14 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《国家基金研究内容doc》,可适用于医药卫生领域

(一)立项依据、植物化学物联合(诱导)作用研究尚欠缺有效方法其整体性“预防”(而非“治疗”)作用还未见有力的时效性研究证据大量人群流行病学和实验研究表明膳食中非营养生物活性成分(植物化学物)对心脑血管、糖尿病肾病及癌症等慢性非传染性疾病(NCD)具有很好的预防作用。植物化学物已成为现代营养学和食品检验研究热点。膳食中植物化学物种类较多而每种化学物因为组成和结构等不同具有不同的生物活性。由于技术原因目前对植物化学物的研究多囿于单一成分或总提取物分析并缺乏时效性关系描述的有力证据。单一成分的生物学效应不能完整地反映作为食品或膳食的总体作用而对植物化学物总提物的分析则无法阐明每个成分的生物学作用途径。例如对茶汤中EGCG(表没食子儿茶素没食子酸酯)调控恶性肿瘤血管生成作用不能代表绿茶中茶多酚群物质群的整体作用而对茶多酚总提物的生物学效应观察也不能说明其中每个儿茶素的作用方式。另一方面由于结构组成、代谢途径和作用靶点等不同植物化学物可能以非原型或代谢产物形式发挥作用。虽然最近有人对植物化学物进行了定量结构活性关系的探讨但对多成分植物化学物整合作用研究鲜见报道。植物化学物联合(诱导)作用及机制研究成为该领域研究的难点。研究证明NCD的形成有个较长时间的“酝酿”期(窗口期)。在适宜的时间干扰和阻断NCD的“酝酿”及发生过程是植物化学物预防NCD的关键。正由于缺少植物化学物时效性作用证据人们对植物化学物健康促进作用的认识尚不清晰同时严重制约了我国NCD膳食干预的进程。、基于化学模式识别和仪器联用的指纹图谱(FG)技术的出现为多成分植物化学物联合作用及整体时效性研究提供了可能近年来作为天然产物多成分整合作用和化学混合物联合毒作用研究需要基于模式识别和仪器联用的FG技术应运而生。但由于技术和学科交叉等原因目前的大部分研究还只是对化学物进行单纯FG化学构建FG与生物学效应相关性模糊无法从FG中解析“指纹区”或结构峰域所代表的生物活性或毒性。因此将FG技术与生物活性模型相关联发展多成分植物化学物FG调控NCD整合效应的新方法和新原理可能从整体上揭示其多组分复杂体系的生物效应做到见“谱”识“效”。基于此本项目将以咖啡酸低聚物及代谢物(以下简称“CA物质群”)为例将标示CA物质群及代谢物的特征指纹图谱与具体生物效应研究结合起来拓展植物化学物联合(诱导)作用及整体时效性研究新途径。、多酚植物化学物多成分联合调控氧化应激损伤作用及时效性研究尚未见报道作为植物化学物的一大类群多酚化合物在结构上具有多个OH而具有明确的清除自由基和抗氧化作用。大量实验,已对茶多酚、果蔬多酚、葡萄酒多酚、谷物多酚等进行了提取、分离、抗氧化效果评价及构效关系研究。但膳食多酚多成分联合调控氧化应激损伤作用及时效性研究尚未见报道。以CA物质群为例:这类多酚化学物广泛存在于以唇形科、菊科、蔷薇科、十字花科等植物性食品中。咖啡酸(CA)化学名为(二羟苯基)丙烯酸是许多植物化学物的骨架形成了由单聚体到多聚体的多种低聚物(oligomers)。例如以单体形式存在的咖啡酸、绿原酸(咖啡鞣酸)、阿魏酸、香豆酸以二聚体形式存在的迷迭香酸以三聚体形式存在的紫草酸以四聚体形式出现的丹酚酸B等。研究表明这些CA物质群对心脑血管疾病(CAD)、糖尿病综合症损伤、细胞损伤恶变引发的肿瘤等NCD有良好防治作用。目前已从十字花科植物卷心菜、唇形科鼠尾草植物中发现多种CA类物质其种类不同、数量消长、化学和生理环境改变而发生的结构及代谢变化等直接影响其生物活性。本课题组用不同自由基生成体系研究了其种类与抗氧化、保护DNA损伤的关系某一种CA效应不能全面说明CA物质群的作用。目前基于HPLC及联用技术的CA物质群指纹图谱相继建立,但结合分子、细胞和整体动物水平上的生物活性模型进行CA物质群指纹图谱与时效性研究尚未见报道。植物化学物种类和分子结构不同通过膳食进入动物体后经过消化及多种酶作用等转化成不同的物质。这种转化可能是原型植物化学物发挥活性作用的过程也可能是原型非活性化学物生成活性小分子的过程。研究植物化学物代谢指纹图谱有助于从整体上解析每种化学物内源性变化和生物效应作用机制发现植物化学物的活性存在形式。研究发现,CA物质群经口进入动物体后在受试动物体内检测到了CA物质群原型和阿魏酸相关代谢产物。经口给予大鼠迷迭香酸其血浆中发现甲基化及共轭成分在尿中发现其单聚体降解产物咖啡酸、阿魏酸及其共轭成分。说明迷迭香酸活性可能通过其小分子代谢产物发挥作用同时由于代谢动力学方面的原因代谢物生物活性作用存在时间效果依赖性。同天然药物代谢相似因代谢形式不同可能导致膳食植物化学物在生物体内的生物学效应存在时效性。可见植物化学物对不同组织靶点的作用差异及不同代谢产物的生物活性可能存在多种相似结构物质群的联合诱导或植物化学物中可能存在某种生理活性前体物或具有引起某种病理效应改变的标志物。结合某一病理模型探讨植物化学物在生物体内的转化及引起的内源物质活性变化有利于阐明其可能的谱效关系并对其指纹图谱进行活性标识。、本项目的学术思想及研究意义氧化应激是生物体罹患NCD的共同作用机制而ROS介导血管损伤的途径已得到证明。在小分子甚至原子水平上、分时段解除造成疾病的高氧化应激状态既能消除NCD表象又能同时根除产生疾病的基础原因。现代分析化学指纹图谱技术结合氧化应激标记物的变化有希望用于跟踪和标识植物化学物的时效性联合(诱导)作用。因此课题组提出如下假设:食品膳食多成分植物化学物针对某个靶点的时效性联合(诱导)作用可被其特定指纹图谱所表达和标识植物化学物及代谢物指纹图谱的变化可用于解析其生物活性作用过程并用于预测植物化学物调控NCD的整体性和时效性。本项目探索指纹图谱预测和同时表征多成分植物化学物生物活性谱效关系和时效性研究新模式在国内尚未见相关文献报道。本研究构建的植物化学物联合诱导作用研究方法及在调控氧化应激方面的应用范例将为重新解释、认知和评估膳食植物化学物生物效应提供新思路和新技术定会有助于推动植物化学物物质基础和膳食干预研究进程。主要参考文献:LooGRedoxsensitivemechanismsofphytochemicalmediatedinhibitionofcancercellproliferationJournalofNutritionalBiochemistry,,:MartínMá,SerranoABG,RamosS,etalCocoaflavonoidsupregulateantioxidantenzymeactivityviatheERKpathwaytoprotectagainstoxidativestressinducedapoptosisinHepGcellsJournalofNutritionalBiochemistry,,:NicholsonSK,TuckerGA,BrameldJMEffectsofdietarypolyphenolsongeneexpressioninhumanvascularendothelialcellsProceedingsoftheNutritionSociety,,:OkarterN,LiuCS,SorrellsME,etalPhytochemicalcontentandantioxidantactivityofsixdiversevarietiesofwholewheatFoodChemistry,,:RastijaVQSARstudyofantioxidantactivityofwinepolyphenolsEuropeanJournalofMedicinalChemistry,,:HoaiNN,DejaegherB,TistaertC,etalDevelopmentofHPLCngerprintsforMallotusspeciesextractsandevaluationofthepeaksresponsiblefortheirantioxidantactivityJournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis,,:FanXH,ChengYY,YeLZ,etalMultiplechromatographicfingerprintinganditsapplicationtothequalitycontrolofherbalmedicinesAnalyticaChimicaActa,:HanC,ShenY,ChenJH,etalHPLCfingerprintingandLCTOFMSanalysisoftheextractofPseudostellariaheterophylla(Miq)Paxroot,JournalofChromatographyB, ,():BandonieneD,MurkovicMOnLineHPLCDPPHScreeningMethodforEvaluationofRadicalScavengingPhenolsExtractedfromApples(MalusdomesticaL)JAgricFoodChem,,BruckdorferKRAntioxidantsandCVDProceedingsoftheNutritionSociety(),,EsmaeiliMA,SonboliAAntioxidant,freeradicalscavengingactivitiesofSalviabrachyanthaanditsprotectiveeffectagainstoxidativecardiaccellinjuryFoodandChemicalToxicology,,:SadavaD,WhitlockE,KaneSEThegreenteapolyphenol,epigallocatechingallateinhibitstelomeraseandinducesapoptosisindrugresistantlungcancercellsBiochemicalandBiophysicalResearchCommunications,,:LuYR,FooLYPolyphenolicsofSalviaareviewPhytochemistry,,:–BorsW,MichelC,StettmaierK,etalAntioxidantMechanismsofPolyphenolicCaffeicAcidOligomers,ConstituentsofSalviaofficinalisBiolRes,,:ZhangJL,HeY,CuiM,LiL,etalMetabolicstudiesonthetotalphenolicacidsfromtherootsofSalviamiltiorrhizainratsBiomedicalChromatography,,():DaiJF,LiL,WuFQ,etalAntioxidantandtheprotectionagainstDNAdamageofPolyphenolicCaffeicAcidOligomersFoodChemistry,(Submitted)ZhangJL,CuiM,HeY,etalChemicalfingerprintandmetabolicfingerprintanalysisofDansheninjectionbyHPLCUVandHPLCMSmethodsJournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis,,:HuP,LiangQL,LuoGAMulticomponentHPLCFingerprintingofRadixSalviaeMiltiorrhizaeandItsLCMSMSIdenticationChemPharmBull,():LuoXB,ChenB,YaoSZ,etalSimultaneousanalysisofcaffeicacidderivativesandalkamidesinrootsandextractsofEchinaceapurpureabyhighperformanceliquidchromatography–photodiodearraydetection–electrospraymassspectrometryJournalofChromatographyA,,:BabaS,OsakabeN,NatsumeM,etalOrallyadministeredrosmarinicacidispresentastheconjugatedandormethylatedformsinplasma,andisdegradedandmetabolizedtoconjugatedformsofcaffeicacid,ferulicacidandmcoumaricacidLifeSci,,:LampeJW,ChangJLInterindividualdifferencesinphytochemicalmetabolismanddispositionSeminarsinCancerBiology,,:(二)项目的研究内容、研究目标,以及拟解决的关键问题研究目标:创建具有在体可预测活性的多酚植物化学物多成分联合抗氧化活性指纹图谱及标识方法获得多酚物质群在分子、细胞和整体动物模型上调控氧化应激谱效作用相关关系及预防机体慢性损伤的时效性证据。研究内容:围绕课题假设和目标主要研究以下内容:、在体可预测的抗氧化活性指纹图谱构建及DNA分子氧化应激损伤保护谱效相关性研究模拟体内自由基清除环境利用色质串联仪器偶合自由基模模型创建一种全新的具有在体可预测抗氧化活性的UHPLCESIMRMDADMS指纹图谱。用不同指纹构成的多酚植物化学物进行自由基诱导的DNA分子损伤保护比较研究以神经网络和化学模式识别法解析指纹图谱抗氧化应激损伤保护相关性。内容包括仪器联用方式、样品和自由基偶联条件、氧化损伤模型建立及DNA损伤检测等。、具有确定指纹图谱的多酚植物化学物在细胞水平上调控氧化应激损伤与时效性研究在不同的时间、以不同水平和不同组成的多酚物质群(具有确定的指纹图谱和抗氧化指数)孵育经处理分组的大鼠心肌细胞株Hc探讨多酚植物化学物在细胞水平上调控氧化应激损伤作用及时效性。研究观察和检测各组细胞及植物多酚分时参与孵育的细胞氧化应激相关指标。内容包括:对照组、孵育组和氧化损伤组心肌细胞活性氧(ROS)含量、细胞抗氧化酶活力(SOD、CAT、GSH、GPx、GST)、细胞凋亡等。、多酚植物化学物及代谢物调控整体动物氧化应激损伤谱效关系与时效性观察在指纹图谱构建和解析的基础上进一步探索多酚植物化学物体内代谢物和代谢指纹图谱并与原指纹图谱进行比较分析多酚植物化学物可能的抗氧化应激前提物。以链脲佐菌素(STZ)糖尿病模型鼠作为氧化应激状态和窗口期干预NCD时效性模型研究植物多酚物质群对模型鼠氧化损伤的联合保护作用并根据作用的时间窗口及相应氧化应激参数的变化分析其时效性。利用神经网络识别抗氧化应激损伤活性指纹组分(指纹区)。拟解决的关键问题:本项目拟解决的关键问题是:创建UHPLCESIMRMDADMS指纹图谱的仪器联用接口方式及植物化学物与ROS反应产物的鉴定方法。经预试验采用流动注射、蠕动泵辅助、多通阀衔接、MRMMS检测反应物进行解决。(三)拟采取的研究方案及可行性分析、研究方案在体可预测的抗氧化活性指纹图谱构建及DNA分子氧化应激损伤保护谱效相关性研究创建多酚植物化学物在体可预测的抗氧化活性指纹图谱本项目以CA物质群作为研究对象涉及的主要CA类物质包括从咖啡酸单聚体到咖啡酸四聚体的代表性品种(见“立项依据”)。CA物质群及代谢物单体等购自相关试剂公司。不同浓度与比例的CA物质群来源于市售的用于保健食品生产的鼠尾草(Salvia)提取物或根据实验需要用CA单聚体混配或用半制备HPLC收集特定指纹峰。区别于单纯的化学指纹图谱的构建本研究将二苯基三硝基苯肼(DPPH)自由基反应模型偶联到指纹图谱构建流程中同时用生理微环境模拟溶液取代传统的甲醇反应体系携带DPPH自由基导入与CA物质群发生作用创建在体可预测的抗氧化活性指纹图谱。串联仪器偶合DPPH自由基反应模型的流程见图。图由两台LC联用或一台LC和另二个恒流泵完成样品及反应物导入并后接UV、DAD和MS检测器MRM检测模式对物质群产物进行确认结合相关活性标志物进行标识。反应条件研究图 在线UHPLCESIMRMDADMS抗氧化活性指纹图谱构建流程()CA多酚物质群UHPLCDADUV分离条件的优化:包括流动相及流速、色谱柱及柱温、梯度洗脱程序、进样量等。()特定ROS的选择与导入:基于二苯基三硝基苯肼(DPPH)自由基良好的稳定性本研究选用DPPH作为特定的ROS用蠕动泵流动注射导入优化流速(约mlmin)。()生理微环境模拟溶液选择和导入条件:鉴于前期对ROS清除反应体系的模拟研究宜以甲醇柠檬酸盐缓冲液配制成pH生理微环境溶液优化导入流速(约mlmin)。()流动注射条件和图谱获取样品溶液经UHPLC色谱柱分离后经DADMS检测获得UHPLCDADMS指纹图谱之后分离的成分序贯进入一个四通混合器的一个入口生理微环境模拟溶液和DPPH自由基分别经泵(其中一个为HPLC泵)输送以一定的速度注入另外两个入口三者混合后进入一个PEEK盘管反应一定时间(与PEEK尺寸和流速有关)然后进入UVVis检测器记录样品抗氧化成分对DPPH自由基的清除造成的其在nm处吸收的降低值(表现为负峰面积的大小)以其标识样品的抗氧化活性。采用多离子反应检测MRMMS模式进行多酚成分鉴定和定量。以最终的DPPH浓度与半数抑制IC的比值来表示抗氧化指数(AAI)。CA物质群及代谢物总抗氧化指数AAI总为各种CA类似物单体AAI之和。以AAI和AAI总反映CA物质群指纹图谱的抗氧化特征。要优化的参数包括:反应环尺寸和DPPH溶液流速对分离度、信噪比和检测限的影响、生理微环境模拟溶液浓度的确认等。 DNA分子氧化损伤模型建立与检测采用羟自由基引发DNA损伤(PhenCuAscADNA)体系和超微弱发光法(OrionII高灵敏度板式化学发光检测仪)测定。用molL醋酸盐缓冲液(pH)配制PhenCuAscADNA溶液使Phen、Cu、AscA和DNA的最终浓度分别为×molL、×molL、×molL和μgmL。分组处理:分为对照组和个实验组。实验组分别加入不同浓度的CA物质群(具有固定组成、指纹图谱和AAI值)对照组不加CA物质只用缓冲液补齐。取反应后的溶液mL放入发光仪样品池中最后加入L的HO溶液混匀启动发光反应连续测定发光强度获得化学发光反应动力学曲线。计算发光强度抑制率()。分析CA物质群对DNA损伤的保护特点(是否属延迟损伤等)。数据处理及谱效关系解析计算指纹图谱各特征峰相对峰面积用指纹图谱相似度评价系统A版(A)计算CA物质群间的相似度判别各峰归属以指纹图谱特征参数(如相对峰面积值等)作为化学组变量同时用DNA分子损伤参数作为效应组变量用WINDOWSSAS软件进行典型相关分析计算和评价不同CA物质群组合、比例等对损伤调控的效果解析指纹图谱氧化应激变化关系。具有确定指纹图谱的多酚植物化学物在细胞水平上调控氧化应激损伤与时效性研究 HO诱导氧化应激损伤细胞模型的建立取出生后~d的清洁级SD大鼠乳鼠心肌经适当处理后在oC进行心肌细胞的原代培养(d)。将乳鼠心肌细胞(×个mL)接种于孔培养板中每孔μL放入CO培养箱中oC培养h倒置显微镜下观察细胞融合并同步搏动。弃去培养液加入含不同浓度HO(~molL)的IMDM培养液放入CO培养箱中oC继续培养h。每孔加入MTT溶液(mgmL)μL继续培养h终止培养弃上清液每孔加入μLDMSO振荡min使结晶物质充分溶解。选择nm波长在酶标仪上测定各孔吸光值。计算不同浓度HO处理后的心肌细胞存活率选取可以导致~心肌细胞死亡的HO浓度建立氧化应激损伤模型。实验分组、分时干预与检测对照组心肌细胞正常培养HO氧化损伤组仅给予损伤浓度(约为μmolL)的HO处理细胞h孵育组在不同时间、给予不同水平的CA物质群(具有确定的指纹图谱构成和AAI值)作用设定的时间后再给予损伤浓度(约为μmolL)的HO处理细胞h。对各组细胞进行以下项目的检测。()细胞内活性氧(ROS)生成的测定给予不同化合物孵育预期时间后用Hanks液冲洗遍加入染色剂DCFHDAμmolL室温孵育min再用Hanks液冲洗遍。培养的心肌细胞内ROS的产生量由DCFHDA被ROS氧化成DCF的程度决定。使用激光共聚焦扫描显微镜检测和计算DCF荧光生成情况。()酶活力和细胞凋亡分析利用酶活力检测试剂盒(西美杰科技有限公司和南京建成生物公司)检测SOD等酶活力。用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的重组人AnnexinV来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸进行细胞凋亡的检测。用AnnexinVFITC细胞凋亡检测试剂盒(碧云天生物技术研究所)在使用流式细胞仪或荧光显微镜上进行测试。具体方法参照试验盒使用说明。数据处理将氧化应激损伤指标ROS、酶活力、细胞凋亡等参数作为效应组变量进行相关分析其它同“”。根据分时处理的结果解析CA物质对损伤保护的时效性。植物化学物及代谢物调控整体动物氧化应激损伤谱效关系与时效性观察实验动物及氧化应激损伤模型氧化应激动物模型有多种包括非特异性衰老模式(如D半乳糖模型、辐照模型臭氧损伤模型等)和特异性模式(如肝损伤模型、心脏损伤模型和胰岛损伤模型等)。本研究宜采用链脲佐菌素(STZ)致实验动物氧化损伤的糖尿病模型作为氧化应激损伤模型。该模型既有氧化应激损伤又有血糖表观指标损伤和血糖变化窗口期也适于“时效性”观察研究。通过预试验是可行的。选用清洁级Wistar大鼠作为实验鼠体重约g左右。实验组采用腹腔注射STZ(Sigma公司)损伤造模注射量按mgkg(溶于molL的柠檬酸柠檬酸钠缓冲液中pH浓度)并在min内注射完毕。h后尾静脉取血检测血糖≥mmolL为模型建立标准。正常对照组仅给予等体积的柠檬酸柠檬酸钠缓冲液。实验分组:抽取实验大鼠只随机分组分别为对照组、模型组和不同剂量植物化学物干预实验组。同一剂量干预实验组分为四个小组分别在STZ注射损伤前后各两个时间段(共四个时间点从注射前h到注射后h间隔h)经口给予实验大鼠设定的植物化学物(CA类物质约mgkgbw)。给予具有一定量比或确定指纹图谱的植物化学物用于研究代谢相关性及谱效关系而给予细胞水平上具有确定谱效关系的植物化学物用于验证性试验。观察指标包括:定时观察实验动物血糖变化(反映植物化学物作用时效性的表观指标)和不同时间点干预后实验鼠的糖尿病发生率间断收集(根据实验具体情况确定间断时间)实验动物体液(血清和尿液)终点收集各组织(肝、肾、心、肺、胰腺)。检测其中多酚的分布、含量和指纹特征、过氧化脂质和抗氧化酶活性、尿液和血清中氧化应激损伤标志物等。多酚植物化学物代谢分析与检测采用固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)和液液萃取相结合的方式对“”中收集的动物组织和体液中多酚代谢物进行提取和富集。将收集的尿液经rpm离心取ml上清液过ODS固相萃取柱(Alltechmgml)用等体积的水冲洗。含有多酚代谢产物的水洗部分过D固相萃取柱(mgml)或固相微萃取柱用倍体积水洗涤弃第一部分收集第二和第三体积洗脱部分混合后调pH用等体积的乙酸乙酯萃取次。低压下oC挥干溶剂。冻藏用于测定。取其它组织g用水均浆离心后取上清然后同上处理后备测。用“”中指纹图谱构建方法采用ESI负离子质谱和MRM检测方式进行检测。过氧化脂质和氧化酶活性检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)等测定依试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明进行。氧化应激DNA损伤生物标志物检测羟化脱氧鸟苷(OHdG)是敏感的DNA损伤标志物气相色谱(GCMS)或酶联免疫试验盒检测。数据处理及谱效关系解析将“”中获得的代谢指纹图谱与氧化应激损伤指标OHdG、酶活力等参数进行多元回归分析进行谱效关系解析(同“”)。利用模式识别法分析原指纹图与代谢指纹图谱的差异发现其可能的生物效应标志物或前提物。根据分时干预产生的表观指标和氧化应激变化观察CA物质群作用的时效性。、技术路线本研究结合色质联用指纹图谱技术与自由基偶联和不同水平的氧化应激损伤模型相结合而展开。项目总体技术路线见图。细胞模型图总体技术路线、可行性分析理论上可行。CA物质群属咖啡酸类聚物具有明确地清除自由基活性和良好的调控氧化应激损伤潜能。用CA物质群及代谢物指纹图谱跟踪不同水平的抗氧化应激参数变化用以证明多成分多酚植物化学物的联合作用及时效性在理论上是可行的。预试可行。在线调控ROS引发损伤保护物质检测技术在参考国外相关离体试验基础上与本课题体内研究结合采用UHPLCESIMRMDADMS方法进行在线体内活性研究比对已通过预试验研究是可行的。检测方法可行。选用OHdG等作为体内氧化应激损伤标志物已有共识可实现无创性监测。用现代仪器和酶联免疫技术分析尿样和血清中OHdG等方法是成熟的。经预试利用UHPLCESIMRMDADMS对体液、组织中CA物质群种类、分布及含量进行检测方法检测限可低于ngml定量限可达ngmL的水平在范围内呈稳定的线性关系并能进行每种未知CA物质群种类确定。具有前期基础。课题组成员具有现代分析化学、医学和分子生物学等研究背景和动物实验上岗资格。具备本项目研究的实验条件并已进行了预试验(见“工作基础”)。江苏省实验动物中心和南京医科大学实验动物中心为实验动物提供了保证。(四)本项目的特色与创新之处、方法创新:基于仪器联用偶联生物模型创建具有在体可预测活性的膳食多成分多酚植物化学物抗氧化活性UHPLCESIMRMDADMS指纹图谱及标识方法在国内尚未见相关报道。、思路创新:突出“联合作用”研究。将构建的多酚植物化学物及代谢物指纹图谱跟踪分子模型、细胞模型和整体动物中氧化应激指标的变化进行基于模式识别和多元回归分析的谱效关系解析研究。、原理创新:本项目提出并开展了从时效性观点解释膳食植物化学物对NCD的干预作用。对重新认知植物化学物的“预防”而非“治疗”作用具有重要意义。(五)年度研究计划及预期研究结果、年度研究计划本项目研究周期为年(年月年月)。年月年月:在体可预测的抗氧化活性指纹图谱构建及DNA分子氧化应激损伤谱效相关性研究。建立DNA分子氧化应激损伤模型探索CA多酚植物化学物组成及保护作用。年月年月:具有确定指纹图谱的多酚植物化学物在细胞水平上调控氧化应激损伤及时效性研究。赴香港科技大学生物系和浸会大学理学院进行学术交流。年月年月:多酚植物化学物及代谢物调控整体动物体氧化应激损伤谱效关系及时效性观察。观察植物化学物对NCD干预的时效性。用模式识别和多元回归分析等方法进行谱效相关性解析。年月年月:资料统计分析和论文撰写、发表科研成果鉴定。、预期研究结果()方法成果:基于串联仪器、偶联生物模型创建具有在体可预测活性的多酚植物化学物抗氧化活性UHPLCESIMRMDADMS指纹图谱及标识方法。拟申请技术发明专利项。()理论成果:获得多酚植物化学物物质群在分子、细胞和整体动物模型上调控氧化应激谱效作用相关关系及预防机体慢性损伤的时效性证据。预期提交研究论文篇其中国外SCI收录论文篇。()人才培养:以本项目为依托培养名研究生、指导名本科生完成毕业论文。

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