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万古霉素键合手性固定相高效液相色谱法直接分离泰妥拉唑对映体.doc

万古霉素键合手性固定相高效液相色谱法直接分离泰妥拉唑对映体

黄并获
2017-11-15 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《万古霉素键合手性固定相高效液相色谱法直接分离泰妥拉唑对映体doc》,可适用于综合领域

万古霉素键合手性固定相高效液相色谱法直接分离泰妥拉唑对映体万古霉素键合手性固定相高效液相色谱法直接分离泰妥拉唑对映体年月September色ChineseJournal谱ofChromatographyVOlNO,万古霉素键合手性固定相高效液相色谱法直接分离泰妥拉唑对映体关瑾,杨晶,毕玉金,石爽,李发美(沈阳药科大学药学院,辽宁沈阳沈阳化工学院应用化学学院,辽宁沈阳l)摘要:利用反相高效液相色谱法在大环抗生素类手性固定相万古霉素键合手性固定相(ChirobioticV)上直接分离了泰妥拉唑对映体考察了缓冲溶液的种类,浓度和pH值,有机改性剂的种类和浓度,柱长和柱温等对手性分离的影响优化后的色谱条件为:ChirobioticV色谱柱(mm×mm,txm),流动相为molL醋酸铵缓冲液(pH)一四氢呋喃(体积比为:),流速为mLmin,柱温为,检测波长为nin在此条件下泰妥拉唑对映体达到了基线分离,分离度达对映体保留时间的相对标准偏差分别为和(n=)峰面积的相对标准偏差分别为和(n:)所建立的手性分离方法具有简便快速及重复性好等优点关键词:高效液相色谱手性固定相手性分离泰妥拉唑对映体中图分类号:文献标识码:A文章编号:()栏目类别:研究论文ChiralSeparationofTenatprazleEnantiomersUsingHighPerformanceLiquidChromatographyonVacomycinBondedChiralStationaryPhaseGUANJin一,YANGJing,BIYuin,SHIShuang,LIFamei(SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang,ChinaSchoolofAppliedChemistry,ShenyangInstituteofChemicalTechno~gy,Shenyang,China)Abstract:VacomycinbondedchiralstationaryphasewasusedforthedirectchiralseparationOftenatOprazOleenantiomersusingreversedphasehighperformanceliquidchromatography(HPLC)Theinfluencesofthekindsandconcentrationofbufferandorganicmodifier,thepHvalueofbuffer,columnlengthandcolumntemperatureontheseparationwereexaminedThechiralHPLCmethodfortheseparationoftenatoprazoleenantiomersonaChirobioticVcolumn(mm×mm,m)wasestablishedwithsimplicityandgoodreproducibilityusingmolLammoniumacetatebuffer(pH)一tetrahydrofuran(:,vv)asthemobilephaseataflOWrateofmLminandUndertheaboveconditionstheenantiomerswereseparatedonbaselinewiththeresolutionofTherelativestandarddeviations(RSDs)fortheretentiontimesoftenatoprazoleenantiomerswereand(n=)TheRSDsforthepeakareasoftenatoprazoleenantiomerswereand(n=)Keywords:highperformanceliquidchromatography(HPLC)chiralstationaryphasechiralseparationtenatoprazoleenantiomersChirobioticV固定相是由大环多肽类化合物万古霉素与m硅胶以多个共价键键合而成万古霉素的结构中含有个手性中心和个空腔,可与被分离物质发生多种作用,如静电作用,疏水作用,包合作用,偶极一偶极作用,JrJr电荷迁移作用,氢键作用和立体排斥作用等其分离机理综合了蛋白质,环糊精等手性固定相所具有的特点,同时又具有较高的柱容量,已成为极具发展潜力的一类新型手性固定相…泰妥拉唑(tenatoprazole)是一种新型的胃HK一ATP酶抑制剂(即质子泵抑制剂),主要用于治疗十二指肠溃疡,胃溃疡,反流性食管炎,ZollingerEllison综合征等与胃酸分泌失调有关的疾病现已批准上市的质子泵抑制剂有奥美拉唑,收稿日期:第一作者:关瑾,女,博士研究生,主要从事药物分析法研究通讯联系人:李发美,女,教授,博士生导师,Tel:(),Email:fameilicom基金项目:沈阳市科技局资助项目()第期关瑾,等:万古霉素键合手性固定相高效液相色谱法直接分离泰妥拉唑对映体兰索拉唑,泮托拉唑,雷贝拉唑及左旋奥美拉唑泰妥拉唑与上述药物相比,其抑制HKATP酶的活性更强,抑制胃酸分泌的效果更好,而且具有理化性质稳定的特点泰妥拉唑化学名为甲氧吡啶一甲基亚磺酰基)基(甲氧基,二甲基咪唑并,b吡啶,其分子结构中有一个硫原子手性中心(结构式见图),因而具有一对对映异构体目前,关于泰妥拉唑对映体手性分离方法以及单一对映体的药理活性,药代动力学研究均未见文献报道建立泰妥拉唑手性分离方法对深入研究其对映体的药效,药理作用具有重要意义本文采用万古霉素键合手性固定相高效液相色谱法实现了泰妥拉唑对映体的直接分离方法简单,操作方便,重现性好,可以用于泰妥拉唑对映体的质量控制及立体选择性药代动力学的研究H图泰妥拉唑结构式FigThestructureoftenatoprazole实验部分仪器与试剂Agilent高效液相色谱仪,包括脱气机,四元梯度泵,自动进样器,柱温箱,二极管阵列检测器(DAD),HPChemstation色谱工作站(Agilent公司,美国)泰妥拉唑(HPLC面积归一化法测定纯度为),甲醇,乙腈,四氢呋喃(THF)为国产色谱纯试剂,所有其他试剂均为分析纯,实验用水为二次去离子水色谱条件色谱柱:ChirobioticV色谱柱(mm×mm,ixmmm×mm,ixmAdvancedSeparationTechnologiesInc,美国)流动相:OmolL醋酸铵缓冲溶液(pHO)一四氢呋喃(体积比为:)柱温:流速:OmLmin检测波长:am进样体积:L色谱柱死时间均以不保留的溶剂进样测定结果与讨论不同因素对对映体分离的影响缓冲液种类,浓度和pH值对对映体分离的影响分别考察了醋酸铵,硝酸铵和磷酸二氢钠种盐在O,O,O和OmolL浓度下,pH值在O,O范围内与四氢呋喃组成流动相(体积比为:)对对映体分离的影响实验结果表明,缓冲液种类,浓度对分离影响不大,pH值对分离影响较大在有机改性剂比例不变的情况下,对映体的分离度R随pH值升高而增大,pH值为O时分离度R为OpH值为O时对映体的色谱峰达到基线分离,分离度R为,此条件下泰妥拉唑对映体分离色谱图见图a泰妥拉唑为弱碱性化合物,pK约为,在pH值为O时化合物呈分子状态,因此,静电作用不是影响对映体分离的主要因素由于低浓度缓冲盐有利于延长色谱柱使用寿命,本实验选择OmolL醋酸铵(pHO)与四氢呋喃组成缓冲液EE图泰妥拉唑对映体在不同pH的流动相下的色谱图FigChromatogramsoftenatoprazoleenantiomersseparatedunderdifferentPHvaluesofbufferMobilephase:moLLammoniumacetatebufferTHF(:,vv)temperature:flowrate:mLrainaPH:bPH有机改性剂的种类和浓度对对映体分离的影响分别选用不同比例的甲醇,乙腈,四氢呋喃作为有机改性剂,考察有机改性剂的种类和浓度对对映体分离的影响实验结果表明,四氢呋喃更有利于对映体的分离流动相中四氢呋喃的比例对对映体分离的影响较大随着流动相极性的减弱,两对映体的保留因子k和分离度R都增加(见表)流表流动相中四氢呋喃的比例对分离泰妥拉唑对映体的影响TableInfluenceoftetrahydrofuran(THFlcontentinmobilephaseonthechiralseparationof色谱第卷动相中加入有机改性剂影响溶质在色谱柱上的保留行为和手性作用,这是改性剂和溶质竞争固定相上作用点的结果随着流动相中四氢呋喃的比例增加,溶质与固定相之阃的作用减弱,保留因子k和分离度R都减小在保证对映体达到基线分离的前提下,为使色谱分离时问尽量短,本实验确定流动相中四氢呋喃的比例为柱长对对映体分离的影响在流动相为molL醋酸铵缓冲溶液(pH)一四氢呋喃(体积比为:),流速为mLmin,柱温为的色谱条件下,考察了ChirobioticV色谱柱(mmxmm,m和mmxmm,m)同一类型不同色谱柱长度对对映体分离的影响实验结果表明,柱长对两个对映体分离有明显的影响在mm柱长条件下,两个对映体分离度R达到,但分析时问需要min以上这是因为色谱柱越长,两个对映体与固定相作用时间越长,保留时间和分离度都增大,两个对映体表现出更大的色谱行为差异考虑到分析时间要适当,本文选择mm柱长的ChirobioticV色谱柱为分离柱'温度对对映体分离的影响在ChirobioticV色谱柱(mm×mm,m),流动相为molL醋酸铵缓冲溶液(pH)四氢呋喃(体积比为:),流速为mLmin的色谱条件下,在,范围内,考察了温度对对映体分离的影响在每一个设定温度下,将色谱柱平衡min实验结果表明,温度对对映体分离的影响较大在考察的温度范围内,随着温度的升高,保留因子k和分离度都减小,说明低温有利于对映体的分离(见表)按照Armstrong等的观点,如果在一定温度范围内,In与T呈良好的线性关系,则可以有下列关系式:In=一A(RT)AAS~R在本实验考察温度,范围内,In与呈良好的线性关系,线性回归方程为In=T(r=),计算出,AR值分别为一(一)和一(,一S),说明泰妥k拉J唑对映体k和ca固l定相之间Jcal的各种作用均为焓控过程的绝对值为kJ(kca),按照Kiisters等认为手性识别主要因为立体障碍,弱的仃一仃作用和弱的氢键作用表温度对分离泰妥拉唑对映体的影响TableInfluenceoftemperatureonthechiralseparationoftenatoprazoleenantiomersk,OOjRO泰妥拉唑对映体分离的重复性在优化的色谱条件下将mgL泰妥拉唑试样连续重复进样次,两个对映体保留时间的相对标准偏差分别为和,峰面积的相对标准偏差分别为和参考文献:DingGS,TangAN,WangJD,CongRz,BaoJMChineseJournalofChromatography(丁国生,唐安娜,王俊德,丛润滋,包建民色谱),,()ShinJM,HomerinM,DomagalaF,FicheuxH,SachsGBiochemPharmacol,,:fGalmicheJPDesVarannesSBDucrotteP,SacherHuvelinSVavasseurFTaccoenA,FiorentiniP,HomerinM,AlimentPharmacolTher,,l():HuntRH,ArmstrongD,JamesC,ChowdhurySK,YuanYH,FiorentiniP,TaccoenA,CohenPAmJGastroenterol,,():BerthodA,LiWY,ArmstrongDWAnalChem,,KustersE,SpondlinCJChroma~grA,,:

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