蓝玉簪龙胆对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化的治疗研究

蓝玉簪龙胆对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化的治疗研究 word格式 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 蓝玉簪龙胆对二甲基亚硝胺诱导的肝纤 维化的治疗研究 作者,李鹏,唐坚, 李安,侯颖,田琼 【摘要】 目的观察蓝玉簪龙胆抗实验性大鼠肝纤维化的作用和可能的作用机理。方法30只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、二甲基亚硝胺(DMN)模型组、蓝玉簪龙胆组、强的松组和蓝玉簪龙胆+强的松组。除正常组外,各组大鼠均腹腔注射DMN,建立大鼠肝纤维化模型。造模的同时,各组给予相应的药物进行灌胃 治疗 ,1次/d,共4周。正常组大鼠及DMN模型组灌胃生理盐水。检测血清中谷丙转氨酶和透明质酸,肝组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、单胺氧化酶和丙二醛水平。病 理学 观察苏木素-伊红,HE,和MASSON染色切片,光镜下观察。结果和DMN组相比蓝玉簪龙胆能明显降低DMN诱导的实验性肝纤维化大鼠肝组织中的MAO及MDA含量,升高SOD及GSH的含量,HE和MASSON染色观察到肝纤维化程度改善。结论蓝玉簪龙胆具有预防DMN诱导的肝纤维化作用,可能与它调节体内的脂质过氧化,抑制肝星状细胞(hepatic word格式论文 satellite cells, HSC)活化作用有关。 【关键词】 肝纤维化,蓝玉簪龙胆, 二甲基亚硝胺 Abstract,ObjectiveTo investigate the protective effect of Gentiana vEitchiorum on liver fibrosis induced by dimethylnitmsamine (DMN) in rats. Methods30 SD rats were randomly divided into control group,DMN group, Gentiana-treated group, prednisone-treated group and Gentiana+prednisone group,Rats in the DMN group, Gentiana-treated group, prednisone-treated group and Gentiana+prednisone group were successively administered intraperitoneally with DMN (10 mg/kg/d),3 days per week for 4 weeks to induce hepatic fibrosis,At the same time,Gentiana-treated group was administered with Gentiana (4 g gruff/kg) i.g., prednisone-treated group was administered with prednisone (6 mg/kg) i.g., Gentiana+prednisone group was administered with Gentiana+prednisone (4g gruff+6mg/kg) i.g. for 4 weeks respectively. Control group recEIved normal sodium (NS) only,The contents of ALT and HA in blood, SOD, MDA, GSH, MAO levels in hepatic tissue bomogenate were measured,Pathological changes with HE staining and MASSON staining were observed under light microscope,ResultsCompared with the model group, the contents of MAO, MDA declined significantly and the word格式论文 contents of GSH, SOD were increased significantly in Gentiana-treated group (P0.05),Fibrosis degree of liver was ameliorated when treated with Gentiana,ConclusionGentiana has anti-fibrosis effects against liver injury induced by DMN and can be used in preventing the development of hepatic fibrosis by reducing the lipid peroxidation and suppressing the activation of hepatic satellite cells (HSC), Key words,Hepatic fibrosis, Gentiana veitchiorum, Dimethylnitmsamine 肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)是继发于各种原因引起的肝脏炎症或损伤后 组织修复过程中的代偿反应,以细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在肝内 过量沉积为病理特征,1,2,。肝纤维化的治疗以糖皮质激素为首选药物,但是 对于糖皮质激素对免疫系统产生的副作用无特效改善药物。我们早期的研究显 示,蓝玉簪龙胆花水煎液可以提高大鼠肺组织中的SOD活性,改善氧化/抗氧化 平衡,抑制胶原沉积,保护肺组织免受纤维化损伤,3,。在肝纤维化中,蓝玉簪 龙胆能否具有此种效能有待实验验证,本实验采用藏药蓝玉簪龙胆稠膏对实验性 肝纤维化进行干预,初步讨论其对肝纤维化的作用及其机理。 word格式论文 1 材料和方法 1.1 材料 二级雌性SD大鼠30只,体质量,192.8?11.5,g,由本校动物中心提供。二甲基亚硝胺,DMN,购自天津市化学试剂研究所,批号20061026,强的松片由西安利君沙制药股份有限公司生产,批号,20050110,蓝玉簪龙胆采自西藏高原,为蓝玉簪龙胆的花及茎叶,超氧化物歧化酶,SOD,、谷胱甘肽,GSH,、单胺氧化酶,MAO,、丙二醛,MDA,试剂盒均购自南京建成生物工程研究所,批号分别为20070427,20040424,20070427,20070427,透明质酸,HA,放免剂盒购自上海海研医学生物技术有限公司,批号为20070401。 1.2 方法 1.2.1 动物模型的建立 30只大鼠随机分为5组,每组6只,正常对照组、二甲基亚硝胺模型组 word格式论文 ,DMN组,、蓝玉簪龙胆治疗组,LYZ组,、强的松治疗组,强的松组,、蓝玉簪龙胆+强的松治疗组,LYZ+强组,,参照JENKINS等,4,5,介绍的制备DMN诱导大鼠肝纤维化模型的方法。其中正常对照组按2 ml/kg体重剂量腹腔注射生理盐水,DMN组、LYZ组、强的松组、LYZ+强组按2 ml/kg体重剂量腹腔注射(5 mg/L)DMN溶液,每周连续注射3 d,共4周。 1.2.2 治疗 建模当日对各组动物进行治疗,?正常对照组,每日按0.5 ml/100 g体重生理盐水灌胃,?二甲基亚硝胺对照组,DMN组,,每日按0.5 ml/100 g体重生理盐水灌胃,?蓝玉簪龙胆治疗组,LYZ组,,蓝玉簪龙胆稠膏由第四军医大学第三附属 医院 药剂科制作,主要成分为蓝玉簪龙胆,1 g蓝玉簪龙胆稠膏相当于0.852 1 g龙胆花生药,高效液相色谱结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明藏药蓝玉簪龙胆中主要成分 6,。每日按4 g生药?kg体重量灌胃,?强的松龙胆苦苷的百分含量为1.97%, 治疗组,将强的松片研成粉末,加蒸馏水配制成0.06,的溶液,参照 文献 ,7,按6 mg/kg体重进行灌胃;?蓝玉簪龙胆+强的松治疗组,LYZ+强组,,蓝玉簪龙胆稠膏每日按4 g生药?kg体重灌胃,强的松按6 mg/kg体重进行灌胃。 word格式论文 1.2.3 观察指标 于建模后28 d麻醉动物,颈总动脉插管取血,血液取出后静置1 h,置离心机中,4 000 r/min离心15 min,吸取血清置,20?冰箱中保存,备用,用于肝功能和透明质酸的测定。取最大的一叶肝组织投入10%甲醛溶液中固定,常规包埋,切片,切片厚度为5 μm,分别进行HE及MASSON染色,光镜下观察肝组织形态学及胶原纤维增生情况。肝纤维化分级 参考 ,8,,0级,肝组织正常,无胶原纤维增生,?级,胶原纤维在汇管区或中央静脉周围轻度增多,II级,中央静脉区胶原纤维间隔形成,III级,中央静脉到中央静脉或中央静脉到汇管区纤维间隔形成或相连接,IV级,多数纤维间隔形成,分隔肝实质并形成假小叶,假小叶中央时见汇管区。在剩余的肝组织中称取0.3 g,制成10%肝组织匀浆,匀浆稀释试剂为生理盐水,用于进行SOD,GSH,MAO,MDA的测定,测定均参照试剂盒说明。 1.2.4 统计学处理 数据采用SPSS11.0统计分析软件进行处理,均用?s表示。组间比较及两两比较采用方差分析以及SNK-q检验。 word格式论文 2 结果 2.1 病理变化 在实验进行过程中,模型组动物死亡1只,各组动物在给予DMN后体重均不同程度的降低,停止给予DMN后,体重逐渐恢复。HE和MASSON染色结果显示,正常对照组肝小叶结构正常,肝细胞排列整齐,肝窦无扩张出血,极少炎性细胞浸润,汇管区和中央静脉周围有少量胶原纤维,MASSON染色胶原纤维呈蓝色,主要分布于汇管区和中央静脉管壁中。DMN组中,可见中央静脉周围肝细胞坏死、脱失,多量炎性细胞浸润,窦周纤维化,胶原纤维大量分布于汇管区和中央静脉管壁以及不完全纤维间隔中,大都形成假小叶。各动物纤维化程度不等,2例II级,4例III级,图略,。LYZ组肝组织破坏程度较模型组明显减轻,坏死及炎性反应减轻,纤维间隔变细,胶原分布减少。胶原纤维分布和纤维化程度不如模型组明显。LYZ+强组纤维化程度和胶原纤维分布也较DMN组减轻。经各组肝组织纤维化程度分级计分分析,DMN组纤维化增生程度较正常对照组有极显著的差异,各 治疗 组均能改善纤维化进程,LYZ组能明显改善此过程。结果见表1。表1 各组肝纤维化程度比较,略, word格式论文 2.2 血清学指标的改变 与正常对照组比较,模型对照组血清ALT与HA均明显增高, (P0.05)。蓝玉簪治疗组较模型对照组ALT与HA明显下降(P0.05),强的松治疗组与蓝玉簪和强的松共同治疗组与模型对照组相比ALT和HA显著降低(P0.05)。而各治疗组在降低ALT和HA浓度作用中没有显著性差异。结果见表2。表2 各组大鼠血清ALT和HA的变化,略, 2.3 肝组织匀浆中SOD,GSH,MAO,MDA含量的变化 DMN组SOD,GSH活力均显著地低于正常对照组,P0.05,,MAO活力、MDA含量显著高于正常对照组,LYZ组SOD,GSH活力显著高于DMN组,P0.05,,较正常对照组没有显著差别,GSH含量高于DMN组,但二者没有显著性差异,MAO活力显著低于DMN对照组,P0.05,,与正常对照组没有显著性差异,MDA活力显著低于DMN对照组,P0.05,,也显著低于正常对照组,强的松组SOD,GSH活力显著低于正常对照组和,与DMN组没有显著性差异, MAO,MDA活力显著地低于DMN对照组,P0.05,与正常组相比没有 GSH活力显著低于正常对照组,P0.05,,且均显著性差异,LYZ+强组SOD, 与DMN组没有显著性差异,MAO,MDA活力显著低于DMN组,P0.05,,与 word格式论文 正常组相比没有显著性差异。结果见表3。表3 各组大鼠肝组织匀浆中SOD,GSH,MAO及MDA含量的变化,略, 3 讨论 DMN模型与四氯化碳(CCl4 )、半乳糖胺等肝纤维化模型不同,其病变具有进展性、短期内不易自发恢复,是观察抗肝纤维化药物治疗效果的最佳模型,9,。因此,本实验采用DMN腹腔注射的方法制备了DMN肝纤维化模型,以观察蓝玉簪龙胆防治肝纤维化的疗效并初步探讨其发生机制。 组织的病理切片观察是诊断的最直接的依据。本实验中,可以看到模型组动物肝脏遭到严重破坏,各只动物均出现不同程度的纤维化,胶原纤维大量分布于汇管区和中央静脉管壁以及不完全纤维间隔中,形成明显的假小叶,而蓝玉簪龙胆治疗组中,虽然还可以看到胶原增生,但程度明显较模型组减轻,没有形成明显的假小叶,炎症细胞的浸出也有所减少。实验结果还表明蓝玉簪龙胆可以显著降低DMN诱导的肝纤维化大鼠血清中的ALT含量,较对照药物效果明显,说明蓝玉簪龙胆具有保护肝脏、改善肝功能作用,能够起到预防和延缓肝纤维化形成作用。 word格式论文 蓝玉簪龙胆预防和延缓肝纤维化形成可能通过以下途径,? 拮抗DMN的毒性作用。近年来的研究表明,自由基和脂质过氧化损伤在慢性肝病发生、 发展 中起到重要作用,10,。因而抗氧化损伤在治疗肝纤维化以及抑制纤维化的发展中起到的作用显得越来越重要。DMN引起的肝损伤肝纤维化中,活性氧、超氧阴离子在体内产生的自由基通过脂质过氧化作用损伤破坏肝细胞,产生脂质过氧化物促进肝星状细胞活化,同时激活各种细胞因子,刺激ECM 的合成,抑制ECM 降解,导致肝纤维化。自由基及其引发的脂质过氧化是其损伤的根本原因,11,。本研究发现,蓝玉簪龙胆治疗组SOD活性较模型对照组显著升高,MAO活性较模型对照组显著降低,GSH的含量显著增高,MDA含量则明显降低,表明蓝玉簪龙胆有降低自由基生成、减轻脂质过氧化的作用,能够拮抗DMN的毒性作用,从而起到保护肝细胞、减轻肝损伤、改善肝功能的作用。?改善肝脏微循环障碍。DMN可使大鼠肝细胞变性、肿胀、坏死,肝血窦收缩、变窄,肝内微循环障碍,导致肝细胞缺血、缺氧及功能障碍等。经蓝玉簪龙胆治疗后,动物肝细胞肿胀消退,肝窦显露,提示肝内微循环障碍改善。 综上所述,蓝玉簪龙胆可以起到较好地干扰肝纤维化的发展进程,预防肝纤维化的发生的作用。至于是否还有其他机制发生作用,是否能够起到直接抑制HSC,从而起到减少ECM的生成的作用,有待实验进行更深入的研究。 【参考 文献 】 word格式论文 ,1,Bataller R,Brenner DA.Liver fibrosis,J,.J Clin Invest,XXXX年,等. 中药抗纤?号、?号对大鼠肺间质纤维化影响的实验研究,J,. 甘肃 科学 学报, 2001, 13 ( 1 ) ,62. ,8,王宝恩, 王惠占, 朱家璇,等,中药复方丹参不同剂型治疗肝纤 维化的实验研究与临床观察,J,.中华肝脏病杂志, 1993,1(2):69. ,9,George J,Rao KR,Stem R,et a1,Diethylnitrosamine-induced liver injury in rats,the early deposition of collagen,J,.Toxicology,2001, 156,129. ,10,Bachem MG Meyer D,Schafer W,et a1.The response of rat liveperisina soidallipocyte to polypeptide growth regulator changes with thEir transdifferdtiation into myofiblast-like cells in culture,J,.J Hepatol, 1993,18: 40. ,11,高峰,程留芳,王志强,等.木苏丸防治二甲基亚硝胺诱导的大 鼠肝纤维化的实验研究,J,. 现代 中西医结合杂志, 2004,13(24):3253.