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吡格列酮对游离脂肪酸作用下βTC

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吡格列酮对游离脂肪酸作用下βTC吡格列酮对游离脂肪酸作用下βTC 3细胞GPR40表达的干预作用 [ 10-11-15 15:06:00 ]    作者:张贝蕾,杨立勇    编辑:studa20 【摘要】  目的 探讨游离脂肪酸(FFA)作用下胰岛βTC 3细胞G蛋白受体40(GPR40)mRNA表达的改变以及吡格列酮(Piog)对此改变的干预作用。 方法 以βTC 3细胞为研究对象,分为对照组及FFA组(0.25,0.5及1 mmol/L)。半定量RT PCR方法检测GPR40的表达。用不同浓度的Piog(0,0.1,1,10 μmol/L)...

吡格列酮对游离脂肪酸作用下βTC
吡格列酮对游离脂肪酸作用下βTC 3细胞GPR40 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达的干预作用 [ 10-11-15 15:06:00 ]    作者:张贝蕾,杨立勇    编辑:studa20 【摘要】  目的 探讨游离脂肪酸(FFA)作用下胰岛βTC 3细胞G蛋白受体40(GPR40)mRNA表达的改变以及吡格列酮(Piog)对此改变的干预作用。 方法 以βTC 3细胞为研究对象,分为对照组及FFA组(0.25,0.5及1 mmol/L)。半定量RT PCR方法 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 GPR40的表达。用不同浓度的Piog(0,0.1,1,10 μmol/L)预孵育βTC 3细胞6 h,加入1 mmol/L FFA继续孵育24 h,半定量RT PCR方法检测GPR40的表达。 结果 (1)FFA孵育12 h后,各组间GPR40的表达差别无统计学意义。(2)FFA孵育24 h后,与对照组比较,0.25 mmol/L FFA组GPR40的表达无差异,但0.5 mmol/L和1 mmol/L FFA组GPR40表达下调(P<0.05);0.5 mmol/L与1 mmol/L FFA组比较GPR40表达差别无统计学意义。(3)与1 mmol/L FFA组比较,0.1 μmol/L Piog+1 mmol/L FFA组GPR40 mRNA表达无差异,而1 μmol/L Piog +1 mmol/L FFA组和10 μmol/L+1 mmol/L FFA组GPR40表达升高(P<0.01)。 结论 长期高浓度FFA作用能够下调βTC 3细胞GPR40的表达,而Piog有助于保护或减轻FFA水平异常导致的βTC 3细胞GPR40表达的损害。 【关键词】  噻唑烷二酮类; PPAR γ; 脂肪酸类; 糖尿病,2型; 受体,G 蛋白偶联 of GPR40 in βTC 3 cells induced by free fatty acids(FFA) and the intervention effect of pioglitazone(Piog) on those expressions.  Methods  βTC 3 cells studied in the experiment were subject to different treatments with a blank and three concentrations of FFA (0.25, 0.5 and 1.0 mmol/L).  Semi quantitative RT PCR analysis was used to determine the RNA expression level of GPR40 in βTC 3 cells after 12 hours and 24 hours respectively.  Afterwards, βTC 3 cells were preincubated with different concentrations of Piog(0, 0.1, 1, 10 μmol/L)for 6 hours, and 1 mmol/L FFA was then added and the cells were incubated for another 24 hours.  The RNA expression level of GPR40 was determined by semi quantitative RT PCR at last.  Results  (1) After the cells were incubated with FFA of different concentrations for 12 hours, there was no statistically significant difference among all the groups.  (2) After the 24 hour incubation, no difference was shown between the group with 0.25 mmol/L FFA and the control group.  But compared to the control group and the group with 0.25 mmol/L FFA, the expression of GPR40 in βTC 3 cells in both groups with 0.5 mmol/L FFA and that with 1 mmol/L FFA decreased after the 24 hour incubation (P<0.05).  There was, however, no statistical difference between the group with 0.5 mmol/L FFA and that with 1 mmol/L FFA.  (3)Though no statistically significant difference was found between the group with 0.1 μmol/L Piog+1.0 mmol/L FFA and that with 1.0 mmol/L FFA, the RNA expression level of GPR40 in both the group with 1 μmol/L Piog+1.0 mmol/L FFA and that with 10 μmol/L Piog+1.0 mmol/L FFA increased compared to the group with 1 mmol/L FFA (P<0.01).  Conclusion  The expression of GPR40 in βTC 3 cells may be inhibited by long term administration of FFA of high concentration, while Piog can help to protect the expression of GPR40 against FFA induced impairment in βTC 3 cell. KEY WORDS:  thiazolidinediones; fatty acids; PPAR gamma; diabetes mellitus, type 2; receptors, G protein coupled 游离脂肪酸(FFA)对胰岛β细胞胰岛素分泌的影响具有双向性,短期作用刺激其分泌而长期作用则损害胰岛素分泌功能[1 2],但其机制尚不清楚。近年来的研究表明,孤儿型G蛋白偶联受体40(GPR40)是中、长链FFA的特异性受体并在胰岛β细胞膜上大量表达[3]。中、长链FFA能够通过活化GPR40从而促使胰腺分泌胰岛素(GSIS)[4 5]。过氧化物酶体增殖物激活受体 γ(PPAR γ)是一类由配体激活的核转录因子,近年来已经发现其在胰岛β细胞上高度表达,可保护β细胞免于FFA介导的损害[4,6]。本研究观察FFA与过氧化物酶体增殖物激活受体 γ激活剂吡格列酮(Piog)对体外培养的胰岛βTC 3细胞GPR40表达影响,以期为拮抗FFA的脂毒性作用以保护胰岛β细胞,以及进一步评估PPAR γ受体对糖、脂代谢的调控作用提供参考。 1  材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方法 1.1  细胞和试剂  小鼠胰岛β细胞瘤细胞系的βTC 3细胞(福建医科大学分子医学中心馈赠)。DMEM培养基(美国GIBCO公司),油酸和棕榈酸均(美国Sigma公司),Piog(恒瑞集团江苏德源药业有限公司)。 1.2 方法 1.2.1  FFA溶液的制备  FFA贮备液中油酸与棕榈酸的比例为2∶1。溶解所需剂量的油酸和棕榈酸于10 mL 99%酒精中,振摇1 h。每10 mmol/L FFA加入40 μL的NaOH(10 mol/L),混匀,置于通风橱中过夜干燥。加入10 mL蒸馏水,加热溶液至呈透明皂液样时,加入40 mL冰冷的10%小牛血清白蛋白,混匀。经0.22 μm CA过滤器过滤消毒后将FFA贮备液存于-20 ℃。 1.2.2  Piog溶液的制备  量取Piog 5 mg,用DMSO溶液溶解稀释配制成1 mmol/L的母液,过滤除菌,4 ℃保存,使用前用DMEM培养液稀释成所需浓度,并使培养液中DMSO的终浓度不高于0.01%。 1.2.3  细胞培养与分组  β TC3细胞以1×104 mL-1的浓度接种于6孔培养板中培养,进入对数生长期后进行干预实验。 1.2.3.1  FFA干预试验  将细胞分成4组:空白对照组(只加含10%胎牛血清的DMEM培养液),0.25 mmol/L FFA组,0.5 mmol/L FFA组,1 mmol/L FFA组。分别加入含不同浓度的FFA或不含FFA(对照组)的DMEM培养液培养12 h或24 h。 1.2.3.2  Piog与FFA共同干预试验  将细胞分成4组:1 mmol/L FFA组(不加Piog),0.1 μmol/L Piog+1 mmol/L FFA组,1 μmol/L Piog+1 mmol/L FFA组,10 μmol/L Piog+1 mmol/L FFA组。各组先加入不同浓度的Piog培养6 h,再加入FFA并使其终浓度为1 mmol/L,继续培养24 h。 1.2.4  细胞总RNA的制备 细胞用PBS冲洗两遍后,采用Trizol一步法提取细胞总RNA,并取少量样品作紫外扫描 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 和琼脂糖电泳分析,其余-80 ℃保存。 1.2.5  RT PCR试验 1.2.5.1  RT PCR引物  引物由上海鼎安生物科技有限公司合成。 GPR40(255 bp): F1:5’ AACTTGTTAGCCATCCGAGGC 3’ R1:5’ TTCCGTTTGTGGCTCAGGC 3’ F2:5’ TTGCCTTGGCCCACTTTG 3’ R2:5’ GAGCCATTCACGGGTATGTTG 3’ 内对照小鼠β 肌动蛋白(β actin,291 bp): F:5’ GCTACAGCTTCACCACCACAG 3’ R:5’ GGTCTTTACGGATGTCAACGTC 3’ 1.2.5.2  cDNA第一链的合成  取总RNA 2 μg,以 Oligo(dT)18 Primer 为引物,组成总体积为20 μL的逆转录反应体系,42 ℃孵育60 min,70 ℃ 10 min终止反应;将cDNA产物于-20 ℃保存。 1.2.5.3  PCR反应  PCR反应扩增目标cDNA:参照2×Taq PCR Master Mix(北京天为时代科技有限公司)试剂盒说明,加入25 μL PCR反应体系(cDNA模板2 μL,20 mmol/L PrimerⅠ上游引物1 μL,20 mmol/L PrimerⅡ下游引物1 μL,2×Master Mix 12.5 μL,ddH2O 9.5 μL)。β actin的反应参数:94 ℃ 5 min→94 ℃ 30 s→54 ℃ 30 s→72 ℃ 30 s,30个循环,最终延伸72 ℃ 7 min;GPR401反应参数:94 ℃ 5 min→94 ℃ 30 s→58 ℃ 30 s→72 ℃ 30 s,30个循环,最终延伸72 ℃ 7 min;GPR402反应参数94 ℃ 5 min→94 ℃ 30 s→58 ℃ 30 s→72 ℃ 30 s,30个循环,最终延伸72 ℃ 7 min;产物在2%琼脂糖凝胶上进行电泳,用凝胶成像系统对DNA条带进行光密度扫描,以目的基因/β actin的比值表示相对表达水平。
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