补体激活对内皮细胞分泌组织型纤溶酶原激活物的影响

补体激活对内皮细胞分泌组织型纤溶酶原激活物的影响 补体激活对内皮细胞分泌组织型纤溶酶原 激活物的影响 VoL2420o6N0.7 ~1-体激活对内皮细胞分泌组织型纤溶酶原激活物的影响 桂军胜,黄守坚 (1.增城市卫生学校,广东增城511300;2.中山大学医学院,广东广州510080) 摘要:目的探讨眼镜蛇毒因子(CVF)激活补体对内皮细胞(Ec)分泌组织型纤溶酶原激活物(t—PA)的影响.方法EC用 CVF加人新鲜血清分别处理0小时(对照组),2小时(实验组I),4小时(实验组?)和6小时(实验组?)后,再继续培养,用 发色底物$2390检测法测定培养液中t—PA的活性.结果CVF加人新鲜血清处理时间越长,培养液中t—PA的活性越 低.结论CVF激活补体可引起ECt—PA的分泌减少. 关键词:眼镜蛇毒因子;补体:内皮细胞;组织型纤溶酶原激活物 中图分类号:G424.31文献标识码:B文章编号:1671—1246(2006)07—0136—02 已有证据 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,目前仍难以处理的自身免疫性疾病,异种 器官移植的超急性排斥反应等是通过补体激活介导的.补体激 活形成的攻膜复合物可直接溶解内皮细胞endothelialcell. EC),但在溶解之前能引起EC的形态和功能发生改变,而这些 改变均有利于血小板变形聚集,白细胞激活,被排斥器官迅速 出现血管内凝血及发生炎症反应【I1.为了排除整体动物实验中 炎症细胞和血小板对EC的影响,我们采用离体培养的EC做实 验,并在先期实验中证实了眼镜蛇毒因子(cobravenomfactor. cw)激活补体对EC有损伤作用,但这些损伤作用主要是一些 形态上的变化,对功能上的变化了解甚少【21.在此基础上,我们 观察了CVF激活补体对EC分泌组织型纤溶酶原激活物(tissue plasminogenactivator,t—PA)的影响,以期更多了解EC功能上 的变化,现报告如下. 1实验材料 1.1动物 长白种小公猪由华南农业大学茅山种猪场提供,体重约 10kg. 1.2试剂 CVF由中山大学医学院药理教研室提供,t—PA活性测定 试剂盒由复旦大学医学院分子遗传研究室提供,人新鲜血清从 健康成年人随机抽取血液离心分离而成,培养剂Medium199 (M199),第八因子相关抗原抗体和LSAB组合试剂盒均由美国 Gibco公司提供,胎牛血清由杭州四季青生物工程材料研究所 提供,胰蛋白酶由美国Sigma公司提供. 1.3仪器 COz培养箱(R.K.I.日本),倒置相差显微镜(Olypus,ITM 一 2,日本),超净工作台(杭州净化设备厂),酶标仪(Denley dragon,美国). 2方法与结果 2.1内皮细胞培养与签定 将小公猪主动脉内膜用含0.01%EDTA浓度为1.25g/L 的胰蛋白酶消化后,取消化液,置37?含5%CO的培养箱中用 含20%胎牛血清的M199培养液培养.培养至细胞融合状态 时,取细胞进行第八因子相关抗原免疫组化染色鉴定.鉴定结 基金项目:国家自然科学基金资助课题(NO39670838) .. 136.. 果为阳性的是EC,取这种细胞用于实验. 2.2实验方法 将48孔板中培养至融合后的EC,分成4组,每组包括12 个孔(即12个重复).每组分别用含25%人新鲜血清和lO~g/ml CVF的培养液作用0小时(对照组),2小时(实验组I),4小时 (实验组?)和6小时(实验组?)后,弃去处理液,每孔重新加入 无酚红的基础培养剂M199lml,培养24小时,再收集条件培养 液,按下列步骤进行t—PA活性测定.(1)标准t—PA活性系列 的制备.t—PA标准品用蒸馏水溶解.使t—PA活性为100IU/ml; 再用酸化的M199(酸化液:M199=1:1)稀释t—PA,使t—PA活性 为2IU/ml;再用缓冲液TB稀释,使t—PA活性成为标准系列, 即0,1,2,4,6,8×10IU/mI.(2)样品制备.将上述条件培养液 加上等体积的酸化液进行1:1酸化,再取酸化的条件培养液用 缓冲液TB进行稀释.稀释倍数为5倍.(3)加样.取干净96孔 板一块,将上述准备好的样品和t—PA标准品加到各孔中(100 微升/孔).(4)底物混和.将纤溶酶原,发色底物及加速剂等各种 试剂混和摇匀,立即加入酶标板各孔中(100微升/孔).再混匀. (5)保温.在37?保温3小时.(6)测定A一.在酶标仪上测定各 孔A一.以标准系列中不含t—PA的调至零点.(7)数据处理.以 A一对t—PA标准品作标准曲线,待测样品t—PA活性从标准曲 线上求算,再乘稀释倍数2×5. 2.3实验结幂 根据所测A4值(Y)和标准品浓度(x),求得的回归方程为 Y=0.013+0.067X,用直接查表法…对相关系数作假设检验得 r:0.939(P<0.05).由此方程计算培养液的t—PA活性,结 果见表1.利用多个样本均数间两两比较的统计学方法(新复极 差法)【3】,对4组均数作方差 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 ,实验组I,实验组?及实验组 ?与对照组比较均有显着性差异(P<0.01),实验组?与实验 组I比较也有显着性差异(P<0.01),实验组?与实验组I比较 也有显着性差异(P<0.05). 表ICVF加人新鲜血清抑制EC产生t—PA(i,4-s 注:'表示和对照组比较P<0.01,'表示和实验组I比较P Vo1.242006No.7 中华扁桃对小鼠保健作用的实验研究 王志凡,杜潇利,吴永祥. (1.兰州大学,甘肃兰州730000;2.兰州大学第二医院,甘肃兰州730030; 3.甘肃黄土地科技开发公司,甘肃兰州730000) 摘要:用中华扁桃提取液对小鼠进行抗氧化及抗疲劳等保健作用的实验研究.结果 表明,中华扁桃提取液可明显提高实验 小鼠血清SOD活性并降低MDA水平,在1.0g/kg时作用明显;另外,在改善实验动 物的游泳耐力和记忆力,增加脑重系数, 提高免疫力等方面均具有明显促进作用. 关键词:中华扁桃;小鼠;保健作用 中图分类号:R285.5文献标识码:B文章编号:1671—1246(2006)07—0137—02 随着人们生活水平的不断改善,饮食观念也相应发生了变 化.人类摄食不仅仅是维持生命,而是要吃的"安全,卫生,营 养,保健".合理开发,利用天然食物的保健功能是当前研究的 热点.据报道…,多食杏仁能增强机体的抗氧化能力.甘肃黄土 地科技开发公司成功引种了美国大杏仁(以下简称中华扁桃), 其营养成分独特,经济价值极高,较进口的同类产品有价格优 势.有很好的开发,利用价值.本文在营养成分分析的基础上, 对中华扁桃进行抗氧化,增强耐力,记忆力等保健作用及免疫 功能的实验研究. 1材料与方法 1.1材抖 中华扁桃由甘肃黄土地科技开发公司引种栽培.浸泡过夜 后.用匀浆机制成含0.2g/ml的中华扁桃提取液,离心取上清 液于一2O?保存待用. 基金项目:甘肃省自然科学基金项目(GS012一A43—96) 1.2动物及分组 选取昆明种雄性小鼠,购于兰州生物制品研究所.共4o 只,体重182O克.随机分为4组,每组1O只.中华扁桃+肿 瘤I组,中华扁桃+肿瘤?组,中华扁桃+肿瘤?组,分别以 o.1g/l~,0.5g/kg,1.0g/kg的中华扁桃提取液灌胃;IV组为 肿瘤对照组,用蒸馏水灌胃并接种肿瘤细胞.以上各组于灌胃1 周后在右腋窝皮下接种S?"肿瘤细胞2×1o5/只,继续灌胃,基 础饲料喂养3O天.于第31天停止灌胃并眼眶取血. 1.3样暑处理及掩潮方法 分别取血清3O测定SOD,0.2ml测定MDA.SOD和MDA 】.试剂盒购自南京建成生物工程研究 均采用试剂盒法检测【2 所;比色仪器用722型分光光度计;免疫功能测定试剂~rrr(瑞 士);刀豆蛋白A(进口,北京分装);RPMII640培养液(美国). 1.3.1抗疲劳测定于停止灌胃后即第31天,给小鼠尾根负荷 <0.01..表示和实验组I比较P<0.05 3讨论 t—PA是一种丝氨酸蛋白酶,主要由血管EC合成.合成后 分泌到血液中的t—PA含530个氨基酸,分子量为68KD…. t—PA的主要功能是将纤溶酶原精561一缬562处的肽键裂 解,使之激活为具有活性的纤溶酶.游离状态的t—PA与纤溶 酶原的亲和力很低,只有在t—PA,纤溶酶原和纤维蛋白三者形 成复合体后,t—PA才能有效地将纤溶酶原裂解为纤溶酶,促使 纤维蛋白凝块溶解,达到抗血栓形成和溶解血管微血栓的目的【5】. Saadi发现,在异体器官移植实验中,补体激活后,自然抗 体和膜攻击复合物在猪EC上的沉积可导致白细胞介素一1a (IL一1a)的分泌增多,而几一1a可诱导EC发生一系列功能变 化.其中最重要的变化就是内源性t—PA活性降低和纤溶酶原 激活物抑制剂一1(PAI一1)活性增加【6】.本实验结果与之相 符.在本实验中,CVF能激活新鲜血清中的补体,3个实验组与 对照组比较存在显着性差异(P<0.01),实验组I,实验组?及 实验组?的t—PA活性与对照组相比所占的比例分别为 51%,35%和17%.这些数据充分显示,随着CVF作用时间的 延长.t—PA含量急剧下降.此结果提示,CVF激活补体给EC 造成损伤后.t—PA合成和分泌大量减少,纤溶活性大大降低, 极有利于血凝和血栓形成,这可能是超急性排斥反应中导致移 植物死亡和补体激活引起的组织损伤中凝血进一步加剧的重 要原因之一. 参考文献: 【1】BachFH.Xenotransplantation:problemsandprospects[J].AnnuRev Med.1998,49:301—310. 【2】桂军胜,黄守坚,刘青.眼镜蛇毒因子引起内皮细胞损伤【J】.中国 药理学通报.2000.16(6):635—638. 【3】马斌荣.医学统计学【M】.第3版.北京:人民卫生出版社,2003. 【4】李家增.贺石林.王鸿利.血栓病学【M】.北京:科学出版社,1998. 【5]FhuryV.Characterizationofbindingofplasminogentofibrinsurfaces 【J】.Biochemistry,1991,30:7630—7636. 【6】S.Complement—mediatedregulationoftissuefactoractivityin endothelium[J].JEIpMed,1996,182:1807.A .. 137..