ELISA法
检测
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HBsAg的影响因素
分析
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临床输血与检验2001年6月第3卷第2期?43? ELISA法检测HBsAg的影响因素分析
王昕
本文以ELISA双抗体夹心法检测HBsAg为 例,从边缘效应,内源物质(包括溶血,乳糜血清,补 体,AFP,相关自身抗体等)的干扰和外源物质(如 EDTA,肝素等)的干扰等方面探讨ELISA法的影 响因素.
材料和
方法
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1材料HBsAgELISA试剂盒由科华公司提
HBsAg
标准
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由卫生部临检中 供,批号20001019;
心提供,批号991.
2方法参照《全国临床检验操作规程}}ELISA 双抗体夹心法,按试验盒
说明书
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操作.
结果
1内源物质的干扰
1.1乳糜血清,AFP,相关自身抗体的影响:随机 选取相关指标高于参考值且HBsAg阴性的标本 (TG4.0?0.4mmol/L,AFP460?50g/L,C3 2.0?0.3g/L,ANA和抗DNA抗体强阳性),血 清与5,ug/IHBsAg标准品1:1稀释.再用5,ug/ LHBsAg标准品与正常人血清1:1稀释作对照, 检测HBsAg,以A值作配对t检验,结果见表:l. 1.2溶血的影响:取HBsAg强阳性样品,分离血 清350l(不溶血)用干净竹签人为破坏RBC,制备 溶血血清(Hb239g/L),分离350l,同时检测
HBsAg,测吸光值(A),将两组A值作t检验,结果 见表1.
表1内源物质对吸光度的干扰
2外源物质的干扰分离EDTA,肝素抗凝的正 常人血浆和5g/LHBsAg标准品1:1稀释,再 作者单位:230022安徽省建医院检验科 用5g/LHBsAg标准品和相应未抗凝血清1:1 稀释作对照.检测HBsAg,测吸光度值(A),两组 A值作配对t检验,结果见表2.
表2外源物质对吸光度的干扰
3边缘效应以2pg/LHBsAg标准品作样品, 采用37?水浴1小时,37?孵箱1小时两种不同 温育法,检测HBsAg,读取吸光度A值.将周围孔 (96孔板周边38孔)和中央孔的A值分组t检验, 结果见表3.
表3边缘效应的比较
讨论
从表1结果显示,溶血和乳糜血清对检测结果 没有影响.补体,AFP,自身抗体阳性标本的A值 明显高于对照组,有显着性差异,可能是补体, AFP,和相关自身抗体(如ANA,抗一SSDNA抗体 等)会和固相一抗,标记二抗Fc结合或干扰它们的 结合而造成假阳性?.
从表2可看出,EDTA抗凝标本的吸光度值 与非抗凝对照组A值无显着性差异,肝素抗凝的 标本则有显着性差异.
边缘效应大都认为是由于在温育过程中周围 孔与中央孔温度升降的速率差异导致z一.从表3来 看,两种不同温育方式均会导致边缘效应,中央孔
和周围孔的A值有显着性差异.
参考文献
1BoscatoLM,StuartMC.Lncidenceandspecificityof interferenceintwo-siteimmunoassays.Ciinchem, l986,32:1491.
2曹文飞.酶联免疫测定的干扰因素与对策.中国实验临
床免疫学杂志,1998,10(3):60.
浙公网安备 33021202002483