血浆甲硫氨酸脑啡肽测定的影响因素

血浆甲硫氨酸脑啡肽测定的影响因素 磐狮) 中国药理学通报ChinesePharmacotocalBulletin1998Aug;14(4):379~80?379? j], 血浆甲硫氨酸脑啡肽测定的影响因素 徐星铭汪延杨明功刘树琴徐新华储晓红 赢医院内科.治疗药物监碉4室,台肥23.022) 中国图书分类号R392—33{R965.2 内源性阿片肽(endogenousopioidpeptide, EOP)包括内啡肽([3-endorphin,p—End),强啡肽 (1eucine— (dynorphin,Dyn),亮氯酸脑啡肽 enkephalin,Len—Enk)和甲硫氨酸脑啡肽(methion— ine—enkephalin,Met—Enk)等,大量研究表明,它们 在维持正常生理功能方面具有重要作用,且在一些 疾病状态时累及病理机制",因此研究EOP与疾 病的关系及其机制具有重要意义.有不同方法用于 EOP的测定,其中最常用的是放射免疫测定法(ra, dioirnmunoassay,RIA).,我国亦相继研制了 End,Dyn和Leu—Enk等放免测定试剂盒,但目前国 内使用Met—Enk放免测定试剂盒测定血浆Met, Enk水平的研究甚少.本文应用Incstar公司Met— Enk放免测定试剂盒研究了测定血浆Met—Enk水 平的部分影响因素. 1材料与方法 1.1试剂Met—Enk放免测定试剂盒,美国Inc— star公司;甲醇(分析醇),上海化学试剂厂;乙酸,蚌 埠化学试剂厂. 1.2血浆来源取自来本院体检的正常健康志愿 者(年龄在25,39岁之间)的早晨空腹静脉血,用 EDTA抗疑,760g离心10min后取血浆备用. 1.3仪器ODS—Silicacolumns(Sep—Pak),美国 Incstar公司;LDR4—84C冷冻离心机,北京医用离 心机厂}低温冰箱,日本Sanyo公司;FJ一2011计数 仪,西安262厂. 1.4方法 1.4.1血浆的收集与贮存本研究将采集到的血 液用两种方式进行处置:(1)收集血液后即在低温下 进行血浆的提取工作;(2)收集的血液在常温(18, 20)?放置1h再进行血浆的提取工作 1.4.2血浆Met—Enk的提取取1ml抗凝血浆 用1tool?LHCI100酸化,使其pH为3,4,用 注射器加压,缓慢过柱;用4乙酸2Om1洗涤柱 子,以除去血浆中的脂质等杂质.尔后取3ml甲醇 199:~05—05收稿 作者简介:橡星铭,女,35岁.硕士,主治医师 6.fI 过柱,本研究中设置了两个过柱时间;(1)缓慢过柱 3min;(2)缓慢过柱5min.用16×100mm试管收 集样品,置于3TC水浴中用氮气吹干. 1.4.3血浆Met—Enk放免剖定按 说明书 房屋状态说明书下载罗氏说明书下载焊机说明书下载罗氏说明书下载GGD说明书下载 程序用 计数仪测定每管沉淀物的cpm值. 1.44样品中Met—Enk含量计算以B/B.为纵 坐标, 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品浓度的对数为横坐标,用计算机绘出标 准曲线,并计算待测样品中Met—Enk含量. 1.4.5统计学方法数据7r~s表示,显着性检 验采用组间t检验. 2结果 2.1血液标本的处置对血浆Met-Enk含量的影响 表1结果表明,经EDTA抗凝血液标本即进行低 温离心,其测得的血浆Met—Enk水平明显高于标本 在常温下(18,20)?放置lh后再进行低温离心取 血浆所测得的Met—Enk水平. 衰1血液标本的赴置对血菜Met-Enk含量的响G+s,一14) 即刻处埋455.5-&92.5 放置后处理2891士45.2 与即刻处理组比较.P<o.05 2.2甲醇过柱时间对血浆Met—Enk含量的影响 表2结果表明,用甲醇3ml缓慢过柱3min,其测定 的血浆Met—Enk含量明显低于缓慢过柱5min的 MetEnk含量. 衰2甲醇过柱时间对血浆Met—Eak言量的响(~4-s.n=15) 过柱5min444.3士112.6 过柱3min367.9士33.1 与过柱5rain组比较,'P<O0S 3讨论 本研究观察了样本处理的两个重要因素对血浆 Met—Enk含量的影响.温度对Met—Enk的稳定性极 为重要,离体血液在常温下放置较短时间,即可使部 分Met,Enk丧失,使测得的含量降低.由于样本常 常为成批收集,所以常将收集的血液在室温下放置 一 段时间再同时进行处理,这样可能会造成所测样 本的Met—Enk含量难以真实反映其实际水平. 肖殇丙胎氮t肌?栏螽岔?蟛 ?380?中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin1998Aug;14(4):380 ?研究简报? 硝苯异丙吡啶对豚鼠心脏乳头肌慢反应动作电位的影响 塑重查张贵卿72 '河南医科大学药理学教研室,郑州..52氏7/ 中国图书分类号R331.31;R972 硝苯异丙吡啶为二氢毗啶类衍生物,其对豚鼠乳头肌及 蛙心收缩有抑制作用.,提示可能与阻滞钙离子内流有关, 为进一步探明该药的作用特性,本研究采用常规微电扳技 术,观察硝苯异丙吡啶对豚鼠乳头肌慢反应动作电位的影 . 响 1材料和方法 1.1动物豚鼠,体重(300~50)g,早0兼用 1.2药品硝苯异丙吡啶j盼剂,由郑州大学化学系提供. 1.3实验步骤用固定微电扳法引导快反应动作电位 (FAP),在获得稳定的FAP3Omln后,用下列方法诱发慢反 应动作电位: 1.3.1用含异丙肾上腺素(Iso,1×10moI?L叫)的高 K(2.5×10叫moI?L1)台氏液灌流标本 1.3.2用含组织胺(His,1×1omoI?L叫)的高K台氏 液灌流标本. 1.3.3用含BaC12(2×10叫moI?L叫)的高K一台氏液灌流 标本. 上各种方法诱发出的慢反应动作电位均稳定45min 后采用累积浓度给药法.每个浓度作用3omin,用示渡器照 慷机摄影记录均在同一细胞内取得的结果,采用配对t检验 进行统计处理 2结集 3×10一,3×10一,3×10moI?L的硝苯异丙毗啶均 显着降低分别由lso,His,BaC1.诱发的SAP的…APA, 缩短APDs.,APD*,见表1 3讨论 高K除极可使Na通道失活而诱发SAP,心肌的SAP 主要由ca件所介导?.其APA与,反映了ca蚪跨膜内流 19971208收稿,1998-o2-1o修回 作者简介:温洪涛,男3o岁,硕士,讲师 张贵卿,男,65岁,教授 寰1硝苯鼻丙吡喧对lsa.His,B2诱发的 动作电位的影响(土,3o) +Iso021?275=5144士6164士5 3×10一20土278土5.188土5.'156士4'. 3×10B16土3.71土5.199士4''145士5'. 3×1O13土267土3.114士4.'129士2'' +His022士382士6188士11180士13 3×10—021士380土5'158土13'177=15' 3X1019士2'77士6.150土1O.'189士l3'. 3×10一15士3'.n士7.141土1O.158土l3' +BaCI2O8士370士7159土7196士l0 8×10—7士3'67士7.155士7192土9. 3×10—6士3.64士7'.141士15..178土21'' 与用药前比较,P<O.05.''P<0.01 和程度与速度,BacI.,组织胺与异丙肾上腺素可提高胞浆 中ca抖浓度而加大SAP振幅,硝苯异丙吡啶抑制上3 种物质所诱发的SAP的…APA,提示其作用可能与钙通 道阻滞有关,而其缩短APD,是否与1K或1K有关.尚待进 一 步研究 参考文献 1乔膀,朱进霞,温洪涛,吴被苗.硝荤异丙吡啶对心肌活动的影 响.河南医科太学学租,1996I31(1)93,4 2SchneiderJA_Spere[akisN.SlowCaandNaresponsesin- ducedby[soprotetenolandraethy[xantbinesiai*olstedpedu*ed guineapheaztsexposedtoelevatedK+JMolCell"t 1975l7-249,73 3Fl~kensteinA.Histoyofcalciumantagonists.CircRes.1983I 52(3):I3,I6 4陈惨.心血管药物和药理学研究进展与展望中国药理学与毒 理学杂志,1995l9(3):161,6 5董华进,詹皓.组膀及组胺受俸研究近况.中骂薛理学通报, 1992;8(3):184,7 本研究还观察到用甲醇缓慢过ODS硅胶柱3 rain时所测得的血浆Met—Enk的量明显低于过柱5 rain的Met—Enk水平,提示这一过柱时间的长短明 说明书所规定的不少 显影响收集Met—Enk的多少, 于3rain过柱时间并不能准确反映该步骤的实际情 况. 影响生物活性物质测定的因素较多,研究中应 合理设计并严密观察一些可变因素对结果的影响, 以提高研究的科学真实性. 参考文献 1GramscbC,Ho[itV,MehraeinPeg4厶Regionaldlstributionof methJotdne-enkephalinandbeta-endorphlnlikeimmunoreactivity inhumaabrainandpituitany.BroinRes,1979I171I260,70 2MaggiR.PimpinellFtMartiniLeta1.Characterizationoffun- tiona[oploiddeltareceptorsinaLuteinizinghormone-reLeasing hormone—producingneuronalcellliaeEndocrinology,1995l136: 289,95 3CLement?JoBV.LowryPL.ReesLHa1.Met-enkephatin circulatesinhuumnplasma.Nature,1980l283:295,301