甲硝唑注射液无菌检查方法学验证研究

甲硝唑注射液无菌检查方法学验证研究 应用技术企业科技与发展2011年第3期(总第297期) AppliedTechnologyEnterpriseScienceAndTechnology&Developm entNO.3,2011(CumulativelyNO.297) 甲硝唑注射液无菌检查方法学验证研究 李玲,宋碧婵 (广西南宁百会药业集团有限公司,广西南宁530003) 【摘.耍】文章主要探讨建立甲硝唑注射液的无菌检查方法.本试验 取甲硝唑注射液,按《中国药典》2oo5~版二 部附录所载的”无菌检查法’J进行方法学验证试验.结果表明采用本 试验方法?进行甲硝唑注射液的无菌检查, 供试品无菌生长,而6株阳陛菌生长良好,方法可行. 【关键词】甲硝唑注射液;无菌检查法(薄膜过滤法);方法学验证 【中图分类号]~927A1【文献标识码】A【文章编号】 164_0688(2o11)03-0022-03 AStudyontheMethodologyoftheTestingSterilityMethodonMetronidazole Injection LILing,SONGBi—chan (GuangxiNanningBaihuiPharmaceuticalsGroupCo.,Ltd.,NanningGuang xi530003) 【Abstract】 ThearticlemainlyelaboratesthetestingsterilitymethodonmetronidazoleInjection.Thistestmethodgetsmetron— idazoleinjection,andexaminesitsmethodology,basedonthesterilitytestingmethodsrecordedinChinesePharmacopeia,Edi— tion2005,thevolumeIIAppendix.Theresultsshowsthatapplyingthistestingmethodmtocarrysterilitytestonmetronida— zoleinjectionandmakethetestobjectsgrowinsterility,andallofsixstrainspositivecontroltubesrevealthegrowthofmi— croorganismthatprovesthismethodisfeasible. 【Keywords】 metronidazoleinjection;sterilitytestingmethods;methodology 甲硝唑注射液具有抗阿米巴虫,滴虫和厌氧菌感染的强大 作用,体内分布广,能进入脑脊液达高浓度,具有毒性小,疗 效高,价格低等特点.临床上主要用于治疗各种厌氧菌的感 染,如败血症,心内膜炎,脓胸,腹腔感染,妇科感染,骨和 关节感染,脑脓肿,皮肤软组织感染,牙周感染等.本品属注 射剂,为确保临床用药安全,《中国药典》2005年版 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 无 菌检查方法必须进行验证,以 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 其方法可靠,有效,不抑 菌.笔者按《中闰药典》2005年版二部所载的”无菌检查法” 进行了探索试验,建立了甲硝唑注射液的无菌检查方法. 1实验环境与仪器材料 1.1实验环境 无菌检测室(洁净度为10000级下的局部洁净度100级) 监测数据见表1. 表1洁净度测定结果(静态,温度:22?;湿度:61%) 无菌室l尢菌室洁净台阳性室阳性室洁净台监测项日 (个/m)(个/(个/m)(个/m) 埃粒子数?0.5m48O3726526233l45 沉降菌数O000 洁净级别10000级100级l0000级100级 1.2仪器与试药 智能集菌仪HTY一2000型,一次性全封闭集菌培养器 (KSF330型,杭州泰林生物技术设备有限公司);甲硝唑注射液 (广西南宁百会药业集团有限公司,规格:100ml,500mg;批 号:0701001,0701002,0701003). 1.3试验用菌种 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)260031,铜绿假单孢菌[CM— CC(B)10104],枯草芽孢杆菌[CMCC(B)635011,生孢梭 菌[CMCC(B)64941)1,白色念珠菌[CMCC(B)98001】,黑 曲霉菌[CMCC(B)980031(中国药品生物制品检定所). 1.4培养基,冲洗液 硫乙醇酸盐培养基(批号:070316),改良马丁培养基(批 号:070310),营养肉汤培养基(批号:060313),营养琼脂培 养基(批号:051026),玫瑰红钠琼脂培养基(批号:070302, 广西食品药品检验所),配制方法按标签说明配制,0.1%蛋白胨 缓冲溶液,按《中国药典》2005年版二部附录配制. 2试验方法与结果 2.1菌液制备 分别取经34?1?温度条件培养l8,24h的金黄色葡萄 【作者简介】李玲(1968一),女,本科,现任广西南宁百会药业集团有限公司质监部部长. 22 球菌,铜绿假单孢菌,枯草芽孢杆菌的营养肉汤培养物,用 O.9%无菌氯化钠溶液稀释成小于100cfu/ml的菌液备用. 取经343-1oC温度条件培养18,24h的生孢梭菌硫乙醇 酸盐流体培养基培养物,用0.9%氯化钠溶液稀释成小于100 cfu/ml的菌液备用. 取经23,25?温度条件培养18,24b的白色念珠菌真菌 液体培养基培养物,用0.9%氯化钠溶液稀释成小于100cfu/ml 的菌液备用. 取黑曲霉菌的新鲜培养液置于改良马丁琼脂斜面培养基 中,在23—25?环境条件下培养5,7d,加入3,5ml0.9% 无菌氯化钠溶液将孢子洗脱,取洗脱液用O.9%无菌氯化钠溶 液稀释成小于100cfu/ml的菌液备用.菌液的稀释度,菌落数 及接种量见表2. 表2验证用菌液的稀释度及接种量 试验菌名称稀释级菌落形成数(个)接种量(m1)规定接种菌液浓度(cfu/m1) 金黄色葡萄球菌1O741<10O 铜绿假单孢菌lO88l<1O0 枯草芽孢杆菌l0701<1O0 生孢梭菌l0631<1OO 白色念珠菌l0581<l0O 黑曲霉菌10891<l0O 2.2方法验证试验I 取本品9瓶,平均地过滤于三联式的全封闭过滤器的3个 筒中.在3个筒内分别注入液体硫乙醇酸盐培养基100ml,再 分别加入小于100cfu的金黄色葡萄球菌,铜绿假单孢菌,枯 草芽孢杆菌各1ml. 取本品9瓶,平均地过滤于三联式的全封闭仪菌器的3个 筒中,其中1筒注入液体硫乙醇酸盐培养基100ml,加入小于 100cfu的生孢梭菌1ml;其他2筒分别注入改良马丁液体培 养基100ml,再分别加入小于100cfu的白色念珠菌和黑曲霉 孢子各1ml. 再取2套三联式的全封闭过滤器,除无样品外,每筒分别 加入6种试验菌液相应的培养基及菌液(小于100cfu)作相 应的阳性对照. 另取l套二联式的全封闭培养器分别加入硫乙醇酸盐培 养基和改良马丁液体培养基各100ml,不加对照菌液,作阴 性对照. 将以上液体硫乙醇酸盐培养基管置于35?1温度环境培 养3,5d;将改良马丁液体培养基管置于25?1温度环境培 养3,5d.结果见表3. 2.3方法验证试验? 取本品9瓶,平均地过滤于j联式的全封闭过滤器的3 个筒中,每管用0.1%蛋白胨水溶液每次100ml冲洗6次.在 3个筒内分别注入液体硫乙醇酸盐培养基100ml,再分别加入 小于100cfu的金黄色葡萄球菌,铜绿假单孢菌,枯草芽孢杆 表3方法I实验结果 \\养天数 试验菌 l2345阳性对照阴性对照 金黄色葡萄球菌 铜绿假单孢菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉菌 菌各1ml. 取本品9瓶,平均地过滤于三联式的全封闭仪菌器的3个 筒中,每管用0.1%蛋白胨水溶液每次100ml冲洗6次.其中, 1筒注入液体硫乙醇酸盐培养基100ml,加入小于100cfu的生 孢梭菌lml;其他2筒分别注入改良马丁液体培养基100ml,再 分别加入小于100cfu的白色念珠菌和黑曲霉孢子各1ml. 再取2套三联式的全封闭过滤器,除无样品外,每管用 0.1%蛋白胨水溶液每次100ml冲洗6次,分别加入6种试验 菌液相应的培养基及菌液(小于100cfu)作相应的阳性对照. 另取1套二联式的全封闭培养器分别加入硫乙醇酸盐培养 基和改良马丁液体培养基各100ml,不加对照菌液,作阴性对 照. 将以上液体硫乙醇酸盐培养基管置于354-1oC温度环境培 养3,5d;将改良马丁液体培养基管置于254-1?温度环境培 养3,5d.结果见表4. 表4方法II实验结果 \培养天数 试验菌 12345阳性对照阴性对照 金黄色葡萄球菌+ 铜绿假单孢菌++ 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉菌 2.4方法验证试验? 取本品9瓶,平均地过滤于三联式的全封闭过滤器的3个 筒中,每管用0.1%蛋白胨水溶液每次100ml冲洗l0次.在3 个筒内分别注入液体硫乙醇酸盐培养基100ml,再分别加入小 于100cfu的金黄色葡萄球菌,铜绿假单孢菌,枯草芽孢杆菌 各1ml. 取本品9瓶,平均地过滤于三联式的全封闭仪菌器的3个 筒中,每管用0.1%蛋白胨水溶液每次100ml冲洗10次.其中 1筒注入液体硫乙醇酸盐培养基100ml,加入小于100cfu的生 孢梭菌1ml;其他2筒分别注入改良马丁液体培养基100ml, 再分别加入小100cfu的白色念珠菌和黑曲霉孢子各1ml. 再取2套三联式的全封闭过滤器,除无样品外,每管用 23 0.1%蛋白胨水溶液每次100ml冲洗10次,分别加入6种试验 菌液相应的培养基及菌液(小于100efu)作相应的阳性对照. 另取1套二联式的全封闭培养器分别加入硫乙醇酸盐培养 基和改良马l_r液体培养基各100ml,不加对照菌液,作阴性对 照. 将以上液体硫乙醇酸盐培养基管置于35?1?温度环境培 养3,5d;将改良马丁液体培养基管置于25?1?温度环境培 养3—5d.结果见表5. 表5方法?实验结果 ,\培养天数 \I2345阳性对照阴性对照\ 试验菌名称,\ 金黄色葡萄球菌+ 铜绿假单孢菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭莴 白色念珠菌 黑曲霉菌 2.5样品的无菌检查 取本品9瓶,平均地过滤于联式的全封闭过滤器的3个 管中,每管用0.1%蛋白胨水溶液每次100ml冲洗lO次.在2 个管内分别注入液体硫乙醇酸盐培养基100ml,其中1管加入 小于100cfu的生孢梭菌1ml作为阳性对照管,第三管中注入 改良马丁液体培养基100ml,按规定温度培养14d,逐日观 察,供试品管均澄清,阳性对照管生长良好,判供试品的无菌 检查符合规定. 取本品9瓶,平均地过滤于三联式的全封闭仪菌器的3个 筒中,每管用0.1%蛋白胨水溶液每次10,9ml冲洗12次.其中, l筒注入液体硫乙醇酸盐培养基100ml,加入小于100efu的生 24 孢梭菌1ml;其他2筒分别注入改良马丁液体培养基100ml, 再分别加入小于100efu的白色念珠菌和黑曲霉孢子各1ml. 再取2套i联式的全封闭过滤器,除无样品外,每管用 0.1%蛋白胨水溶液每次100ml冲洗12次,分别加入6种试验 菌液相应的培养基及菌液(小于100efu)作相应的阳性对照. 另取1套二联式的全封闭培养器分别加入硫乙醇酸盐培 养基和改良马丁液体培养基各100ml,不加对照菌液,作阴 性对照. 将以上液体硫乙醇酸盐培养基管置于35?1oC温度环境培 养3,5d;将改良马丁液体培养基管置于25?1?温度环境培 养3—5d.结果见表5. 3讨论 方法验证试验I证明,本品在未冲洗时对生孢梭菌和枯草 芽孢杆菌有明显的抑制作用.在方法验证试验?中对样品进行 了冲洗(冲洗量为600m1),但仍不能消除本品对生孢梭菌的 抑制作用,于是在方法验证试验?中加大冲洗量至1000ml, 这样消除了本品的抑菌作用.经实验建立的方法验证试验?可 作为甲硝唑注射液的无菌检查方法,以生孢梭菌为阳性对照 菌.囝 参考文献 [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005年版二部[M]. 北京:化学工业出版社,2005. [2]中国药品生物制品检定所.中国药品检验 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 操作 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 [M].北 京:中国医药科技出版社,2005. 『3]潘友文,钱维清,熊家娟.现代医药工业微生物实验室质量管理 与验证技术[M].北京:中国协和医科大学出版社,2004. [责任编辑:胡译文]