正交试验设计优化茶藨子木层孔菌总多糖的提取条件

正交试验设计优化茶藨子木层孔菌总多糖的提取条件 正交试验设计优化茶藨子木层孔菌总多糖 的提取条件 20食品与药品FoodandDrug2009年第11卷第09期 正交试验设计优化茶藤子木层孔菌总多糖的提取条件 刘玉红一,王凤山 (1.山东大学药学院,山东济南250012:2.山东中医药大学药学院,山东济南250355) 摘要:目的研究提取茶藤子木层孔菌总多糖的最佳条件.方法用葸酮一硫酸法测定 总多糖含量,以提取温度,时间, 次数,溶剂用量等4项因素,设计3个水平进行正交试验.结果最佳工艺为l5倍量 水,9O?提取4h,共3次.结论本实验 确定的最佳条件稳定性好且简便易行. 关键词:茶蔗子木层孔菌;多糖;正交试验 中图分类号:Q539文献标识码:A文章编号:1672-979X(2009)09-0020—03 OptimizationofExtractionConditionsofTotalPolysaccharidesfromPhellinusribisby OrthogonalDesign LIUYu-hong,WANGFeng-shan' (』.SchoolofPharmaceuticalSciences,ShandongUniversity,Jinan250012,China;2.SchoolofPharmaceutical Sciences,ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine,Jinan250355,China) Abstract:ObjectiveTostudytheoptimalextractionconditionsofthetotalpolysaccharidesfromPhellinusribis. MethodsThetotalpolysaccharidescontentwasdeterminedbytheanthrone-sulfuricacidmethod.Theextraction temperature,extractiontime,extractiontimesandsolventvolumewereinvolvedinaL9(3)o~hogonalexperiment. ResultsTheoptimalextractionconditionswerehotwater(w/v)of1:15,extractionat90? for4h,threetimes repeated.ConclusionWithgoodstabilityandconvenientprocessing,themethodinthisexper imentisfeasibleforthe extractionofthetotalpolysaccharidesfromPhellinusribis. KeyWords:Phellinusribis;polysaccharide;o~hogonaltest 茶蔗子木层孔菌(Phellinusribis)为锈革孔菌科 (Hymenochaetaceae)木层孔菌属(Phellinus)真菌, 寄生于山楂,梨树的活体根茎上,民间用于防治肝炎, 增强免疫力,疗效确切.初步研究表明,茶蔗子木层孔 菌总多糖可显着促进小鼠脾淋巴细胞增生,有免疫促进 作用,是茶蔗子木层孔菌发挥作用的活性成分.我们采 用正交试验法研究茶藤子木层孔菌多糖的提取条件. 1仪器与试药 WFZ-UV-2102PC型紫外一可见分光光度计(尤尼柯 中国上海仪器公司);RE一52C旋转蒸发器(巩义英峪 予华仪器厂);LXJ.II离心沉淀机(上海医用分析仪器 厂);ZKXF.1型电热真空干燥箱(上海树立仪器仪表 公司).茶蔗子木层孔菌(采集于济南山区)由山东中 医药大学生药教研室徐凌川教授鉴定.葡聚糖4万(中 国医药集团上海化学试剂公司),葸酮(上海五联化工 厂),硫酸(北京益利精细化学品公司),分析纯. 2方法 2.1正交试验设计 为确定最佳提取条件,我们以温度,时间,提 取次数,溶剂用量4项因素,分别设计3个水平进行正 交试验L(4).因素水平见表1. 表1因素与水平 收稿日期:2009.02.10 作者简介:刘玉红(1975一),女,山东菏泽人,博士,主要从事天然药物多糖类研究 E-mail:liuyuhongwu@yahoo.tom.cn 通讯作者:王风山,男,博士,教授,博士生导师E—mail:fswang@sdu.edu.cn 食品与药品FoodandDrug2009年第1I卷第09期2l 2.2茶蔗子木层孔茵总多糖的提取 精密称取粉碎成粗块的茶蔗子木层孔菌50g,共 9份,投入沸水0.5h,以灭活共存酶,浸泡过夜.按 表1的实验条件提取,纱布过滤,滤液合并,50?减 压浓缩至50mL,离心,弃沉淀.上清加4倍量无水乙 醇,沉淀过夜,离心,收集沉淀,依次用无水乙醇, 丙酮,乙醚洗涤.将沉淀置入有五氧化二磷的真空干 燥箱中,50?真空干燥24h,得黄色粉末状粗多糖, 称重,测定多糖含量. 2.3多糖含量的测定 采用葸酮.硫酸".糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛 或其衍生物,可与葸酮试剂缩合产生颜色物质,反应 后溶液呈蓝绿色,于620nm处有最大吸收,显色与多 糖含量呈线性关系. 2g/L葸酮试剂:0.2g蒽酮溶解于100mL浓硫酸 中,当日配制使用.0.1L葡聚糖溶液:称取葡聚糖 4万0.0274g溶于200mL蒸馏水中,定容至250mL. 绘制 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线:分别量取0.1g/L葡聚糖标准溶液2, 4,6,8,10mL转入l0mL容量瓶,蒸馏水补至刻 度,各取1mL置于试管中按顺序编号1,2,3,4, 5,分别加入葸酮试剂4.00mL,迅速浸于冰水浴中 冷却,充分振摇均匀,浸入沸水浴中,管口加盖开 始反应.白水浴沸腾时起,准确煮沸10min,自来水 冷却,室温放置约10min,振摇均匀,以蒸馏水为空 白,在:.mn处测吸光度A.以吸光度为纵坐标,糖 浓度C为横坐标,绘制标准曲线. 样品含量测定:取糖浓度约50gg/mL的样品溶 液1mL,加入葸酮试304.00mL,按标准曲线方法操 作,测吸光度,根据标准曲线和样品浓度计算含量. 3结果 3.1蒽酮一硫酸法测定多糖含量的标准曲线 以吸光度A为纵坐标,浓度c为横坐标,得回归 方程:A=7.4375C+0.0517,r=-0.9993. 3.2正交试验确定最佳提取条件 结果见表2和表3.由极差值和方差分析可见, 影响多糖收率因素的顺序为A>C>D>B,其中温度 对多糖收率的影响具有显着意义(P<0.05).由实 验结果确定茶蔗子木层孔菌多糖的最佳提取条件为 AB1C2D,即l5倍量水,90?提取4h,提取3次.验 证实验,多糖收率为l7.43mg. 表2正交试验结果 方差来源离差平方和自由度均差雅P 3-3精密度实验 取同一样品液,依法测定5次,计算样品中多糖 含量,RSD为0.87%(n=5). 3.4重现性实验 精密称取茶藤子木层孔菌5份,各50g,按最佳的 提取条件提取后,测定多糖含量,每份测定3次,取 平均值,5fk样品中多糖含量分别为1.73%,1.68%, 1.79%,1.69%.1.76%,RSD2.68%(,F5). 3.5稳定性实验 同一供试品液,葸酮.硫酸法显色后,分别于0, 10,20,40,60min时在620nlYl处测吸光度值,RSD 1.64%("=5),表明吸光度值在lh内基本稳定. 4讨论 一 般用水提取植物中的糖类.由于植物体内有水 解酶共存,须采用适当的破坏或抑制酶的方法,才能 提制原存形式的.方法包括新鲜材料迅速加热干 燥或冷冻保存等.宜用沸水,醇或先用碳酸钙拌和后 再提取.将茶蔗子木层孔菌直接投入沸水中0.5h,而 22食品与药品FoodandDrug2009年第1l卷第O9期 石榴皮水提物对中华大蟾蜍心电活动的影响 祝建平,刘瑜,张立盈,崔希云,艾洪滨 (山东师范大学生命科学学院,山东济南250014) 摘要:目的观察石榴皮水提物对中华大蟾蜍心电活动的影响.方法腹腔分别注射1,10,100mg/mL3种不同浓度的石 榴皮水提物溶液1mL, 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 麻醉状态下,中华大蟾蜍给药前后II导联心电图波形的变化,观察其心率,P波,R波,S波, P.R段,S—T段,QRS波群持续时间及波幅变化.结果与给药前相比,10,100mg/mL2种浓度的石榴皮水提物均使动物 心率显着变慢;随着给药时间延长心率变慢更趋明显,一直持续到给药后30min;而lmg/mL~[[心率随实验时间的延长 也变慢,但无显着差异.3组动物P波,R波,S波,P.R段及S.T段的持续时间和波幅变化与给药前相比均无显着差异;10 mg/mL组的QRS波群时程在给药15430min期问显着延长.结论l0,100mg/mL石榴皮水提物对麻醉蟾蜍的心率和心电 活动均有抑制作用;石榴皮水提物对麻醉蟾蜍心电活动的调节作用主要表现为影响心室的去极化过程,对心房去极化及 复极化过程的影响均不显着. ;心率 关键词:石榴皮水提物:蟾蜍:心电图 中图分类号:Q445文献标识码:A文章编号:1672.979X(2009)09—002204 EffectofWaterExtractionfromPomegranatePeelonCardiacElectricalActivity ofBufoBufoGargarizansinVivo ZHUJian-ping,L1UYu,ZHANGLi-ying,CUIXi-yun',AIHong-bin (CollegeofLifeScience,ShandongNormalUniversity,Jinan250014,China) Abstract:ObjeetiveTodeterminatetheeffectofwaterextractionofpomegranatepeelonthecardiacelectrical activityofBufoBufoGargarizansinvivo.MethodsTheanimalswereinjectedabdominallywithdifferent concentrationsoflmLwaterextractionfrompomegranatepeel(1mg/mL,10mg/mL,100mg/mL).TheII-lead electrocardiography(ECG)wasrecordedbeforeandafterinjectingdrugs.Thechangesofheartrate,durations andamplitudesofR,S,P-Rsegment,S-TsegmentandQRScomplexwereobserved.Resultslnjecting10meCn~ and100mg/mLwaterextractionfrompomegranatepeelresultedinadecreaseofheartrateandshowedatime? dependentresponse.Therewasnosignificantchangeinthegroupwhichwasinjectedwithlmg/mLdrug.There werenosignificantdifferencesinthedurationsandamplitudesofwavesofP,R,S,P— RsegmentandS-Tsegment. 收稿日期:2008—12.28 项目基金:山东省教育厅科技 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 项目,J08LE63 作者简介:祝建平(1978.),男,博士生,专业生理学 通讯作者:崔希云(1955-),女,教授,研究方向神经生物学E-mail:cuixiyun@sina.com 非直接煎煮,是为了灭活其共存酶. 从茶蔗子木层孔菌中提取得到的总多糖,湿态下 接触空气氧化变色,棱角尤甚,可能因其中色素易氧 化.因此,水提醇沉得到茶蔗子木层孔菌总多糖后, 需依次用无水乙醇,丙酮,乙醚洗涤,尽可能保留较 少的水份,真空干燥或冻干,可在一定程度上避免氧 化发生. 本实验优选了茶藤子木层孔菌总多糖的最佳提取 条件:即15倍量水,90?提取4h,提取3次,此条件 下多糖的得率最高,为茶藤子木层孔菌多糖的进一步 研究提供了依据. 参考文献 【1】张惟杰.糖复合物生化研究技术[M].第2版.杭州:浙江大学出 版社,1999:12. [2】姚新生.天然药物化学[M】.北京:人民卫生出版社,1988:113.