化妆品菌落 总数 的测定
3.1检测菌落总数的意义
菌落是只细菌在固体培养基上经培养后生长繁殖而形成的能被肉眼所识别的生长物集落，它是由数以万计的相同细菌聚集而成的。
化妆品中细菌总数是指1g或1mg化妆品中所含的活的细菌数量。检测这个指标，就可断定化妆品被细菌污染的程度，从而可以了解和核查该化妆品所选用的原料、，生产设备、生产工艺及操作人员的卫生状况，故该检测指标是对化妆品进行卫生学评价的综合依据，它是进行微生物检测中首先且必需进行的内容，通过检测得到的量化数据，立即就可断定该化妆品是否符合卫生
标准
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。
3.2检验细菌总数的准备
(1)试样液的制备在化妆品的微生物检验中，开始的工作就是试样液的制备。为了计数细菌个数，试样必须稀释;需要将试样配成1:10、1:100和1:10003种规格的稀释液。化妆品的品种很多，但其剂型可分为:液体、膏霜及乳液类半固体、固体3种;在溶解特性上，化妆品又可分为水溶性(亲水)和油溶性(疏水)两大类。
(2)培养基--种类、作用及制备培养基的种类:培养基是用人工方法，依据细菌生长繁殖所需的营养物质，适量配制而成的一种基质，用以人工培养细菌作各种用途。依不同的目的要求，常用的培养基可分为下列几类。
?基础培养基:通常在牛肉浸液中，加入适量的蛋白胨、氯化钠及磷酸氢二钾，然后调节pH值至7.2~7.6，经消毒灭菌而成肉汤培养基，为液体培养基。若在其中加入适量(0.5%~2%)的琼脂，便成为半固体或固体培养基。使用时可根据不同的菌种加入所需要的营养物质。
?增殖培养基:可用来繁殖细菌。当试样中细菌数较小时，需经增菌，该培养基一般是在普通的基础培养基中加入另外的营养物质，使某菌种在其中生长较快，并逐渐淘汰其他细菌。
?鉴别培养基:因为细菌分解的废物及其代谢产物各不相同，故可利用含有一定废物和指示剂作为培养基的成分领先指标剂的生化显色反应，以鉴别不同种类的细菌。例如在蛋白胨水中加入各种糖类(如葡萄糖、乳糖、麦芽糖等)和指示剂，由于各种细菌发酵糖类的能力不同，可根据其产酸产气的情况，来鉴别细菌的种类。如以伊红美兰作指标剂，当大肠杆菌分解乳糖生酸时，带阳电荷，所以染上伊红，呈紫色且有金属光泽，故依此就用来鉴别大肠杆菌。
?选择培养基:在培养基中加入染料或其他化学药品，使有利于试样(标本)中致病菌的生长，而抑制不需要的细菌。如从试样中要分离出肠道致病菌就需要此类培养基。
培养基在检测微生物中的作用:将待检试样液加至固体培养基中，经过一段时间培养后，在培养基表面出现单个的细菌集团，这个集团称为菌落。各种细菌在一定的培养基上有一定的菌落形态。细菌菌落的各种形状、大小、高起或扁平、表面的性质、光泽、色素的产生、边缘的形态等各有特点，能产生色素的细菌，菌落呈现不同的颜色，故可通过细菌菌落形态的识别进行细菌的鉴定;另外，一般认为，一个菌落是由一个细菌繁殖而成的，故可利用固体培养基上的单个菌落来分离细菌(纯种)和计算试样液中细菌的数目。
培养基的制备:培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物所需要的营养环境。选择合适的营养基是进行微生物检测的基础，根据不同的目的选择合适的营养基。
3.3检验细菌总数的操作及计数
(1)检验方法提要及操作程序在检测化妆品中的微生物时，由于化妆品大都是添加了防腐剂，抑制微生物的生长和繁殖，使化妆品可较长时间保存使用而不变质。这样在检验时，化妆品中的细菌等微生物都处于抑制状态(濒死或半死损伤状态)，这不利于检测(活的)细菌总数，因此在检测时必须消除化妆品中的防腐剂，并注入培养基中，令细菌生长繁殖生成菌落，依菌落特征进行计数，而得到化妆品中的细菌总数。由于化妆品中污染的细菌种类不同，每种细菌都有它一定的生理特性，培养时对营养要求、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同，在实际检测时，不可能做到满足所有细菌的要求，因此所
检测的结果，只是在标准检测方法所使用的条件下(在卵磷脂、吐温-80营养琼脂上，于37?培养48h)
生长的一群嗜中温的需氧及兼性厌氧的细菌总数。
消除防腐剂抑菌作用的方法，有物理方法和化学方法，物理方法主要是稀释法、离心沉淀和薄膜过滤法;化学方法是在试样液中加人中和剂(化学制品)，以中和防腐剂的抑菌效果，不同的防腐剂有不同的中和剂。
标准检验方法中消除防腐剂除采用稀释等物理方法外，所使用的中和剂是吐温-80和卵磷脂，而化妆品所使用的防腐剂品种很多，而标准方法现只采用了一种中和剂。
(2)细菌总数的计数规则菌落的计数:选取菌落总数在30~300之间的平皿为菌落总数测定的标准。一个稀释度使用两个平皿应采用两个平皿菌落的平均数，其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜计数，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平皿的一半，而另一半中菌落分布又很均匀，则可计算半个平皿的菌落数后乘以2表示该皿的菌落数。
3.4细菌总数的
报告
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?选择平均菌落数在30~300之间的稀释度，细菌总数则以菌落数乘以该稀释度的稀释倍数。
?若有两个稀释度，其生长之菌落数均在30~300之间，可计算出每个稀释度的细菌总数，若其比值小于2，则以该二细菌数的平均值为细菌总数;若该比值大于2，则以其中较小的为细菌总数。
?若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则以最高稀释度的菌落数乘以该稀释倍数(最大)为细菌总数。
?若所有稀释度的平均菌落数均小于300，则以最低稀释度的菌落数乘以该稀释倍数(最小)为细菌总数。
?若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则以最接近30或300的平均菌落数乘以相对应的稀释倍数为细菌总数。
细菌总数一般采用两位有效数字，数字后面的零数常以10的指数采表示，如细菌总数280个/g可写为2.8X10个/S。
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