电针百会、三阴交对大鼠睡眠剥夺（SD）行为学的实验研究

电针百会、三阴交对大鼠睡眠剥夺（SD）行为学的实验研究 word格式论文 电针百会、三阴交对大鼠睡眠剥夺,SD, 行为学的实验研究 作者,陈利华 胡幼平 罗荣 陈敏 【摘要】 ,目的,探讨电针对SD大鼠的行为学的影响。,方法,健康SD大鼠30只,随机分为正常对照组,简称正常组,10只,模型对照组,简称模型组,10只,电针加模型组,简称电 针组,10只三组,正常组采用大平台法造模,模型组采用小平台法造模,电针组造模同模型组,给予每日1次的电针 治疗 。采用旷场实验检测方法,观察针灸的抗睡眠剥夺作用。,结果,电针能明显改变其行为学指标。,结论,电针可以改善其行为学,这种作用可能与电针促进神经内分泌免疫学机制有关。 【关键词】 电针,大鼠睡眠剥夺,SD,,行为学,百会,三阴交 word格式论文 Abstract, ,Objective, To investigate the effects of REMl sleep deprivation ,SD, on actions to investigate the efficacy of application of electroacupuncture for treating sleep deprivation.,Methods,Thirty healthy SD rats randomly allocated to three groups ,normal control,model ,A1,, electrotreatment groups,.The rats of model ,A1,group and electrotreatment group were induced in male rats by housing them on small platforms overwater,normalcontrol group rats were on big platforms overwater.After electrotreatment for electrotreatment groups,the changes of normal status and Open Field Test were measured with all rats.,Results, Electroacupuncture treatment can improve the actions.,Conclusion, Application of electroacupuncture can produce a fighting effect on sleep deprivation.The effect may be related to promoting the nerval endocrine cytokine of electroacupuncture. Key words,electroacupuncture; rats sleep deprivation; actions;Baihui; San yinjiao 睡眠剥夺,sleep deprivation,SD,是指由于某些原因导致的所需睡眠 数量被迫减少,1,。本研究通过观察针刺对睡眠剥夺大鼠行为学的影响。探索针 word格式论文 刺改善失眠等睡眠障碍患者临床症状的作用机理。 1 SD大鼠模型的建立 1.1 实验动物 健康SpragueDawley,SD,大鼠30只,雌、雄各半,体重200,250g,由成都中医药大学实验动物中心提供。动物饲养环境温度,,20?2,?,湿度,60,,80,,水温,保持在20?左右。 1.2 主要仪器设备 小平台,20个,,根据 文献 ,2,制成30cm×30cm×40cm鼠箱,睡眠剥夺装置为圆柱形,正中立一直径6cm,高8cm的小平台,从箱底注水,使水面离平台约1cm。每天早晚8,30更换鼠箱中的水。上午8?00,11?00之间在安静的房间内进行观察记录。将大鼠置于中心方格内,记录大鼠在3min旷场内的活动,彻底清洁敞箱后再进行下,只大鼠的观察。 word格式论文 1.3 动物造模 采用小平台水环境法,剥夺箱为30cm×30cm×40cm大小的塑料水箱,正中立一直径6cm圆形平台,箱中注满水,水面距平台面约1.0cm。大鼠在平台上可自由进食进水,如果睡眠,会因为肌张力松弛而落入水中,因而造成SD。为排除隔离、限制活动和水环境造成的应激影响,我们采用了大平台水环境法,其平台直径为18.0cm,大鼠在平台上可以睡眠,其他环境与小平台水环境法相同。SD期间持续灯光照射,室内温度控制在18?,22?。每天更换箱中的水,水温保持在20?左右。正常组,大平台组,单独笼养, 自然 昼夜光照,电针组条件同睡眠剥夺组,共持续9d。结果:健康SpragueDawley,SD,大鼠30只,成功造模28只,实验大鼠在造模过程中死亡两只。其中正常组9只,电针组10只,模型组9只。 1.4 实验分组及处理 SD动物模型成功28只,按照随机分组的原则,分为正常组,即大平台组,、电针组、模型组。 word格式论文 正常对照组,简称正常组,,9只,采用大平台,大鼠在已注水平台上可以自由进食饮水和睡眠,并在电针组治疗时,用与电针组相同方法进行抓放、固定,但不针刺。试验期间持续灯光照射,室温,20?2,?。 模型对照组,简称模型组,,10只,采用小平台水环境法。将大鼠放于已注水的小平台上,大鼠在平台上可自由进食饮水,如果睡眠,会因为肌张力松弛而落入水中。余同正常组。 电针加模型组,简称电针组,,9只,从试验第2天开始,于每天上午9?00针刺针灸组大鼠“百会”、“三阴交”,选用1寸30号毫针,电针,留针20min。穴位定位,根据李忠仁编著的《实验针灸学》的实验动物穴位定位。电针治疗仪,采用G6805I型电针仪,青岛生产,;电针刺激参数,频率100HZ,电压24V,波形,疏密波,强度,以大鼠能安静耐受为度,约为2mA, 疗程,1次/d,共治疗9d。余同模型组。 2 电针SD大鼠一般状况的影响 word格式论文 模型组与电针组在早期均表现为兴奋性增高,易激惹,对外界的反应性及攻击性增强,但72h后,可见身体明显消瘦、精神萎靡、反应迟钝、警觉力下降等现象。而电针组在72h后大鼠并无身体明显消瘦、精神萎靡、反应迟钝、警觉力下降等现象。正常组全程全部精神活泼、稳定,活动如常,抓取时反抗较剧,咬人,自48h起全部对照动物耳廓、双目和四肢末颜色呈淡粉红色,144,216h,本组鼠毛由正常变为略枯槁、潮湿。 3 电针对SD大鼠的旷场实验的影响 3.1 指标检测方法 各组动物每天按组处理,并于处理后30min放入旷场中,测试其水平得分、垂直得分和中央格停留时间。旷场箱为木质箱,底面为12m 的正方形,划为25个面积相等的小方格,箱高40cm,周壁涂成黑色。测试时,将大鼠置于旷场测试箱底面中心,观察其3min内的行为。观察指标,以大鼠在中央格,即不靠近周壁的9个格子,停留的时间为中央格停留时间,time of staying in center,,以大鼠穿越底面的方格数为水平得分,crossing core ,,以后肢站立的次数为垂直得分,rearing core,。记录各组动物每天的垂直活动得分、水平活动得分和中央格内停留时间。并观察动物修饰行为和大小便次数。每只动物仅做 word格式论文 一次行为测定,每次试验后,清洗旷场周壁及底面,以免上次动物余留的信息影响下次测试结果。 3.2 实验结果 实验结果见表1、2及图2,4。 表 1 不同时间大鼠在旷场反应中的水平得分,s,,略,表2 不同时间大鼠在旷场反应中的水平得分,s,,略, 图1及表1、2所示,正常组与电针组相比较,水平得分比较无意义,P=0.507,P0.05,,正常组与模型组比较有极显著差异,P=0.001,P0.01,,电针组与模型组比较有极显著性差异,P=0.006,P0.01,,电针组 治疗 后水平得分下降,同正常组的下降趋势基本一致。而模型组则先下降而后直线上升。 图2及表3、4所示,正常组与电针组相比较,垂直得分比较无意义,P=0.681,P0.05,,正常组与模型组比较有极显著差异,P=0.002,P0.01,,电针组与模型组比较有极显著差异,P=0.001,P0.05,。电针组治疗后垂直得分下降,同正常组的下降趋势基本一致。而模型组则先下降而后上升,其上升幅度较大。表3 不同时间大鼠在旷场反应中的垂直得分,s,,略,表4 不同时间大鼠 word格式论文 在旷场反应中的垂直得分,s,,略, 从图3、表5及表6可知,正常组与模型组比较有极显著差异,P0.01,,电针组与模型组比较有极显著差异,P0.01,。电针组及正常组的中央格停留时间整个变化趋势基本一致,幅度小,走向平稳,表明其变化不明显。而模型组的中央格停留时间呈明显上升变化趋势。表5 不同时间大鼠在旷场反应中的中央格停留时间,s,,略,表6 不同时间大鼠在旷场反应中的中央格停留时间,s,,略, 4 讨论 4.1 关于SD动物模型的选择 睡眠剥夺动物模型是引起失眠较理想的研究睡眠的手段。本研究采用小平台水环境法进行SD表明,平台面积与大鼠体重量之比为1?1时不会产生SD,故本研究中大平台直径为18.0cm,在实验前后大平台组体重无明显变化,说明其应激水平远远低于SD组。水环境和隔离对动物确实产生一定的应激作用,这从旷场实验得分可知。由旷场实验得知,与正常组相比,大鼠SD后精神行为表现出一定的兴奋性,修饰行为或“洗脸”行为增多。我们知道修饰行为常发 word格式论文 生于产生矛盾或害怕的情境中,3,,说明SD环境使大鼠情绪非常紧张恐惧,攻击行为增多。SD时间短,表现为一定的兴奋,72h以后则有抑制趋势。正常组由于一定的应激作用,兴奋性较高,并且没有SD的影响,所以旷场实验得分优于其他各组。由于大鼠SD后兴奋性的提高,随着SD时间的延长,剥夺程度加深。 4.2 电针对SD大鼠旷场实验的影响 旷场实验,Open Field Test,是目前最常用的一种动物心理实验方法,用来研究新环境中自发活动,Spontaneous Activity,和探究行为,Explore behavior,,检验受试动物在新环境下探究行为和适应性。 从测试结果可知,正常组动物的水平得分及垂直得分呈下降趋势,表明动物活动性下降。实验中观察到,正常组动物生活相对安逸,又因为旷场测试在白天进行,正是大鼠的相对安静时间,故而动物不爱活动,实验的后期尤其如此,这可能也同其对旷场环境的逐步熟悉有关,4,。但与此同时,正常组动物表现机敏、反应灵活、目光有神、空间识别能力强。模型组动物却不如此,水平得分及垂直得分均有很大的波动,在SD192h时仍相当高,在最后一次测试时仍在增加。此时动物极为疲惫,体力己衰弱而殆尽,行走时表现方向感极差。与此同时,电 word格式论文 针组动物则表现较为稳定,波动比较小。 中央格停留时间反映动物对环境的认知能力。正常动物会避开空旷环境,迅速离开中央格,沿周边活动。如果对新环境的认知能力差,则停留在中央格的时间就会延长。从我们的测试结果来看,正常组大鼠在中央格的停留时间日益减少,事实上,这组动物在放入旷场实验箱后通常会迅速离开中央地带,行至角落或箱壁下,整理毛发,偶尔站立,少有行走。模型组动物经过长时间SD,对环境的认知能力明显下降,常反复穿越中央地带并在其中逗留,呆在中央格中的时间不断增长。电针组动物的中央格停留时间则有不同程度的下降,提示电针可以改善睡眠剥夺大鼠的空间认知能力。 此外,旷场行为测试指标还包括理毛时间,修饰时间,和排便次数。理毛是动物满足的表现,排便多则反映了动物的紧张程度高。由于我们采用改良多平台水环境法造模,接受SD的动物常常水湿毛发,放入旷场中时欲将其毛发舔干而使理毛时间增加,从而对结果产生干扰。本实验中,接受SD的动物虽然与正常动物有同样的进食进水机会,但由于中枢、躯体双重应激的影响,食欲明显下降,尤其是实验后期,进食显著减少,因此,排便次数作为考察指标的准确性特异性也不强。故而我们没有将这两项作为考察药物作用效果的指标。 word格式论文 【 参考 文献 】 ,1,Drummond SP,Brown GG.The effects of total sleep deprivation on cerebral Responses to cognitive performance,J,.Neuropsychopharmacology,2001,25,5,,68. ,2,Mendelson W.B,Guthrie R.D,et al.The flowerpot technique of rapid eye movement sleep deprivation,J,.Pharmacol Behave,1974,2, 553556. ,3,Brady KJ,Brown JW,Thurmond JB.Behavioral and neurochemical effects of dietary tyrosinEin young and agedmicefollowing coldswimstress,J,.Pharmacal Biochem Behav,1979,12,5,,667672. ,4,SK Kulkarni.Open field test,its status in psychopharmacology ,J,.Ind J Pharmac,1977,9,4,,241246.