首页 石蜡切片和HE染色详细步骤

石蜡切片和HE染色详细步骤

举报
开通vip

石蜡切片和HE染色详细步骤石蜡切片和HE染色详细步骤 石蜡切片和HE染色 方法与步骤 1(取材 颈椎脱臼法处死小鼠,打开腹腔,剪取肝组织(或其他组织)。切取的组织块不宜太大,以利于固定剂穿透,通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。取下所需要的肝组织,切成一小块2,3mm厚。 注意事项: (1)取材动作要迅速,不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。 (2)切片材料应根据需要观察的部位进行选择,尽可能不要损伤所需要的部分。 2(固定 将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下,立即投入中性福尔马...

石蜡切片和HE染色详细步骤
石蜡切片和HE染色详细步骤 石蜡切片和HE染色 方法与步骤 1(取材 颈椎脱臼法处死小鼠,打开腹腔,剪取肝组织(或其他组织)。切取的组织块不宜太大,以利于固定剂穿透,通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。取下所需要的肝组织,切成一小块2,3mm厚。 注意事项: (1)取材动作要迅速,不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。 (2)切片材料应根据需要观察的部位进行选择,尽可能不要损伤所需要的部分。 2(固定 将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下,立即投入中性福尔马林固定液中固定,固定30,50min。 注意事项: (1)一般固定液,都以新配为好,配好后应贮存在阴凉处,不宜放在日光下,以免引起化学变化,失去固定作用。 (2)有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用,一定要在使用前才混合,如果混合太早,固定时就没有作用了。 (3)固定材料时,固定液必须充足,一般为材料块的20~30倍,有些水分多的材料,中间应更换1-2次新液。 (4)材料固定完毕后,保存于严密紧塞或加盖的容器里,同时在容器外上标签,并随同材料在溶液中投入相应的标签,以免相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字,应用黑色铅笔或绘图黑墨水 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 写。 3. 脱水 50%酒精?70%酒精?80%酒精?95%酒精?100%酒精?100%酒精。每级0.5h。 注意事项: (1)脱水必须在有盖的玻璃品中进行,防止吸收空气中的水分。 (2)在更换高一级的脱水剂时,最好不要移动材料以免损坏,可用吸管吸出器皿中的脱水剂,再用吸水吸尽器皿内剩余液,然后于皿中加入高一级脱水剂。 (3)在低浓度酒精中,每级停留不宜太长,否则易使组织变软,助长材料的解体。 (4)在高浓度或纯酒精中,每级停留的时间也不宜太长,否则会使组织变脆,影响切片。 (5)如需过夜,应停留在70%酒精中。 (6)脱水必须彻底,否则不易透明,甚至使透明剂内出现白色混浊现象 4. 透明 1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2h) ?纯二甲苯(1.5h) ?纯二甲苯(1.5h)。由于乙醇与石蜡不相溶,而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡,所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时,光线可以透过,组织呈现出不同程度的透明状态。 注意事项 (1)使用透明剂时,要随时盖紧盖子,以免空气中的水分进入。 (2)更换每级透明剂,动作要迅速,一方面为了不使材料块干涸,另一方面能避免吸收湿气。 3)在透明过程中, 如果材料周围出现白色雾状,说明材料中的水未被脱净,应退回纯酒精中重新脱( 水,然后再透明。 5. 浸蜡 将处理的材料置于1/2石蜡+1/2二甲苯中,40?烘箱40min。再放入石蜡?30min、石蜡?40min。 透蜡的目的是除去组织中的透明剂(如二甲苯等),使石蜡渗透到组织内部达到饱和程度以便包埋。透蜡时间根据组织大小而定。透蜡应在恒温箱内进行,并保持箱内温度在55-60?左右,注意温度不要过高,以免组织发脆。一般置于恒温箱0.5h。 注意事项 (1)尽量保持在较低温度中进行,以石蜡不凝固为度; (2)透蜡温度要恒定,不可忽高忽低; (3)操作要迅速,力求在最短的时间内完成石蜡透入过程,以免引起组织变硬、变脆、收缩等。 6. 包埋 先提升恒温箱的温度至60?,换纯蜡3次,每次1-2h,用硬的电光纸、牛皮纸叠纸盒,置于45-60?的烫板上,倒入材料,摆放好材料,把标签(正面向外置于底部),补足石蜡,倒好后轻轻的置于冷水盆中,注意底面要接触盆中凉水,待石蜡全部凝固后可取出晾干,也可在凉水盆中放置过夜。 7. 切片 ?将已固定和修好的石蜡块装在切片机的夹物台上。 ?将切片刀固定在刀夹上,刀口向上。 ?摇动推动螺旋,使石蜡块与刀口贴近,但不可超过刀口。 ?调整石蜡块与刀口之间的角度与位置,刀片与石蜡切片约成15度左右。 ?调整厚度调节器到所需的切片厚度,一般为4-10微米。 ?一切调整好后主可以开始切片。此时右手摇动转轮,让蜡块切成蜡带,左手持毛笔将蜡带提起,摇转速度不可太急,通常以40-50r/min。 ?切成的蜡带到20-30cm长时,右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起,以免卷曲,并牵引成带,平放在蜡带盒上,靠刀面的一面较光滑,朝下,较皱的一面朝上。 ?用单面刀片切取蜡片一小段,放在载玻上加水一滴,置于放大镜或显微镜下观察切片是否良好。 ?切片工作结束后,应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的石蜡,把切片机擦拭干净妥为保存。 8. 粘片 将粘贴剂置簿玻片上,再取切片浮置粘片剂上,然后置烘片台上,使切片展开烫平,材料不现皱纹为度。最后将切片依次排好,用滤纸吸去多余水分,同时以记号笔在玻片上编号,放入温箱中烘干,温度30,40?中过夜。 10. 脱蜡和染色 纯二甲苯(10-20min)?纯二甲苯(5-10min),1/2 二甲苯十1/2纯酒精?100%酒精?95,酒精?85,酒精?70,酒精?50,酒精?自来水冲洗10s?切片放入苏木精中染色约10-30min ?用自来水流水冲洗约15min使切片颜色变蓝。 11. 分化和漂洗 将切片放入1%盐酸乙醇液中褪色,约2秒至数十秒钟。见切片变红,颜色较浅即可。切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。 12. 脱水?和复染 切片入50%乙醇?70%乙醇?80%乙醇中各3-5min。用0.5%伊红乙醇液对比染色1-3min。 伊红主要染细胞质,着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合,如果细胞核染色较浓,细胞质也应浓染,以获得鲜明的对比。反之,如果细胞核染色较浅,细胞质也应淡染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染,促使细胞质容易着色,并且经乙醇脱水时不易褪色。 13. 脱水?和透明 将切片放入95%乙醇中洗去多余的红色,然后放入无水乙醇中3-5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇,将切片放入二甲苯?、?中各3-5min。 二甲苯应尽量保持无水,应经常更换,或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲苯中出现白雾现象,说明脱水未尽,应退回乙醇中重新脱水,否则切片难以镜检。 14. 封藏 中性树胶封存,因切片经二甲苯透明,使用中性树胶作为封藏剂,树胶可用二甲苯稀释至合适的稠 度。
本文档为【石蜡切片和HE染色详细步骤】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑, 图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
该文档来自用户分享,如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服,我们会及时删除。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
下载需要: 免费 已有0 人下载
最新资料
资料动态
专题动态
is_511210
暂无简介~
格式:doc
大小:16KB
软件:Word
页数:5
分类:企业经营
上传时间:2017-09-25
浏览量:126