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首页 尿液内毒素定量测定早期诊断革兰阴性菌尿路感染的研究1

尿液内毒素定量测定早期诊断革兰阴性菌尿路感染的研究1.doc

尿液内毒素定量测定早期诊断革兰阴性菌尿路感染的研究1

陈小小小小华
2019-04-21 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《尿液内毒素定量测定早期诊断革兰阴性菌尿路感染的研究1doc》,可适用于医药卫生领域

尿液内毒素定量测定快速诊断革兰阴性菌尿路感染的研究【摘要】 目的 了解尿液内毒素定量测定与尿培养的一致性探讨尿液内毒素定量在尿路革兰阴性菌感染中的诊断价值。方法 对临床送检的新鲜尿标本同时作细菌培养和内毒素测定。细菌培养采用定量培养法病原菌计数≥cfuml作为尿培养阳性的判定依据内毒素测定采用动态浊度法。统计分析两种方法的一致性。 结果 以pgml作为尿液内毒素定量测定判断革兰阴性菌尿路感染的cutoff值则其敏感性为、特异性、假阴性、假阳性Kappa=与细菌培养的一致性相当高。革兰阴性菌生长组与无细菌生长组间有非常显著的差异(t=P<)革兰阴性菌生长组与革兰阳性菌(包括真菌)生长组间有非常显著的差异(t=P<)革兰阳性菌(包括真菌)生长组和无细菌生长组间无显著差异(t=P=)。结论 尿液内毒素定量测定可作为革兰阴性菌尿路感染的快速诊断方法对临床尿路感染的诊治具有重要的指导作用。【关键词】 尿液尿路感染内毒素ResearchofurineendotoxindetectingindiagnosisofurethralgramnegativebacillusinfectionXUXiuli,ZHANGYuanchang,ZHANGJianfang,SUNYiqun,FANXin,YANGPeihong,HAOXiaokeClinicalLabofXijingHospital,theFourthMilitaryMedicalUniversity,Xi’an,China【Abstract】Objective TostudythevaluementofurineendotoxindetectingindiagnosisofurethralgramnegativebacillusinfectionMethodsBacterialcultureandendotoxindetectionoffreshurinesampleswerecarriedatthesametimeCulturepositivemeansbacterialquantityisovercfumlendotoxinwasdetectedbyturbidimetricassaywithlimulusreagentsResultsThesensitivityandspecificityofurineendotoxinindiagnosisofurethralgramnegativebacillusinfectionisandwhenregardpgmlascutoffvalueThefalsenegativerateisandthefalsepositiverateisThecoherenceofurineendotoxintoculturemethodisquitehigh(Kappa=)Therearenotabledifferencesbetween gramnegativebacillusgrowthgroupandnobacillusorgramnegativebacillus(includingfungi)growthgroup(t=P<andt=P<,respectively)Butthereisnonotabledifferencebetweennobacillusorgramnegativebacillus(includingfungi)growthgroup(t=P=)ConclusionUrineendotoxindetectingcanbearapidmethodforurethralgramnegativebacillusinfectionandhasinstructiveeffectindiagnosisofurethralinfection【Keywords】UrineUrethralinfectionEndotoxin作者单位:西安第四军医大学西京医院检验科(徐修礼张建芳孙怡群樊新杨佩红郝晓柯)西安航天总医院检验科(詹远长)通讯作者:郝晓柯,电子信箱:haoxkgfmmueducn泌尿系感染是常见的感染性疾病约占感染性疾病的%~%。近年来由于各种介入性诊断治疗手段的广泛使用、广谱抗生素广泛使用造成的耐药株增加和免疫抑制剂应用致使机体抵抗力下降导致尿路感染有逐年增加的趋势。而临床常规细菌培养所需时间较长且易受一些不确定因素的影响有可能延误治疗。本实验以鲎试验的动态浊度法来检测尿液内毒素含量并与尿液细菌培养相比较分析两种方法的一致性了解尿液内毒素定量测定是否可以对单纯或伴有革兰阴性菌的尿路感染作出早期诊断从而指导临床早期对症治疗利于病人的康复。材料和方法一、材料标本来源 年月至月临床科室送检住院患者作尿培养的尿液标本共计份。其中男份女份(年龄~岁)男女比例为:。仪器及试剂 MB-微生物动态快速测定系统、T智能恒温仪购自北京金山川科技发展公司。EKT-Mset动态内毒素检测试剂盒(批号EKT)无热源试管、无热源吸头、无热源平底试管等均购自天津一瑞生物工程有限公司API鉴定系统、VITEK自动微生物分析仪购自法国生物梅里埃公司。二、方法尿液细菌培养及鉴定 接收到标本后立即接种按常规方法分离培养细菌获得纯培养后用API鉴定系统或VITEK全自动微生物分析仪鉴定到种病原菌计数≥cfuml作为尿培养阳性的判定依据。 尿液内毒素测定 动态动态浊度法检测原理 内毒素与鲎试剂中的C因子反应由内毒素引发激活的凝固酶切断凝固蛋白原中的精氨酸肽链形成凝固蛋白而产生凝胶在形成凝胶的过程中产生浊度变化。根据达到事先设定的反应液浊度变化所需时间对数值与内毒素浓度对数值成反比的关系进行测定。 测定步骤 ①样品制备 对接收到的标本在接种的同时留取适量于无热源具塞试管置冰水浴中(尿液混浊时可进行rpm 分钟离心取上清液备用)即为待测样品。②样品处理 取上述样品ml加入装有ml样品处理液中混匀后置T智能恒温仪中℃处理分钟取出后立即置冰水浴中(处理后混浊的样品可行rpm分钟离心取上清液备用)。③样品测定 取处理后的样品ml直接加入反应主剂中溶解后用微量移液器转移至×mm无热源标准反应管中勿产生气泡插入MB-微生物动态快速测定系统中进行反应。④结果分析 反应结束后由MB-微生物动态快速测定系统自动计算出样品中的内毒素含量。 数据分析 测定结果采用SPSS统计软件进行分析两种方法的一致性采用Kappa值进行评价。结果尿培养结果 尿培养阳性标本份阳性率为其中男性标本份占()女性标本份占()男女比例为:共检出株细菌其中革兰阴性菌种株占革兰阳性菌种株占真菌种株占。份尿培养阳性标本中份有革兰阴性菌生长占份为革兰阳性菌或革兰阳性菌伴真菌生长占份标本为真菌生长占阳性标本结果见表。表 尿培养阳性标本结果尿培养结果例数比率()单纯革兰阴性菌革兰阳性菌或伴真菌单纯真菌合计   内毒素测定结果 尿培养革兰阴性菌生长组、革兰阳性菌(包括真菌)生长组与无细菌生长组内毒素测定结果见表。表 内毒素测定结果(pgml)尿培养尿液内毒素定量测定平均值例数标准差革兰阴性菌*革兰阳性菌或伴真菌**无细菌生长***全部    注:*包括单纯革兰阴性菌生长和革兰阴性菌伴革兰阳性菌生长菌落计数≥cfuml。** 包括单纯革兰阳性菌、真菌生长及革兰阳性菌伴真菌生长菌落计数≥cfuml。***包括无细菌生长及菌落记数<cfuml。革兰阴性菌生长组、革兰阳性菌(包括真菌)生长组和无细菌生长各组间内毒素测定数据采用SPSS统计软件分析:革兰阴性菌生长组与无细菌生长组间有非常显著的差异t=P<革兰阴性菌生长组与革兰阳性菌(包括真菌)生长组间有显著的差异t=P<革兰阳性菌(包括真菌)生长组和无细菌生长组间无显著差异t=P=其结果t(P)值见表。表各组间内毒素测定数据统计分析结果t(p)值 革兰阴性菌组革兰阳性菌或伴真菌组无细菌生长组革兰阴性菌组 (<)(<)革兰阳性菌或伴真菌组(<) ()无细菌生长组(<)()     讨论近年来在泌尿系感染的病原菌中革兰阳性球菌和真菌感染率逐渐上升革兰阴性菌逐渐下降。但尿路感染病例中绝大部分仍然为单纯或混合有革兰阴性菌感染。当患者泌尿系感染革兰阴性菌时尿中内毒素含量即显著升高。对尿液内毒素含量定量测定对临床早期诊断、及时治疗有重要意义且不受测定前是否使用抗菌药物的影响。目前国外已开展了尿液中内毒素测定方法的研究并应用于临床。国内临床应用较多是血液内毒素的测定发展速度很快方法已比较成熟。也有用于肺泡灌洗液、前列腺液、脑脊液、腹水等体液内毒素测定的研究。而用于尿液测定仅有卜一珊等作过小样本的研究。目前国内未查见有关尿液内毒素定量测定cutoff值的资料。本研究中以尿培养菌落记数≥cfuml作为尿路感染的判断标准内毒素定量测定值≥pgml作为cutoff值时用内毒素定量测定判断革兰阴性菌引起的尿路感染其灵敏度、特异度、假阳性、假阴性分别为:灵敏度、特异度、假阴性、假阳性如果以内毒素定量测定值≥pgml作为cutoff值则为:灵敏度、特异度、假阴性、假阳性。从本组实验的数据来看若要以尿液内毒素定量测定来预测革兰阴性菌尿路感染pgml作为cutoff值比较合适灵敏度、特异度均在以上而假阴性、假阳性均在以下。以尿培养革兰阴性菌生长菌落记数≥cfuml作为革兰阴性菌尿路感染的判断标准采用Kappa值评价尿液内毒素定量测定与尿培养判断革兰阴性菌尿路感染的一致性分析结果为:内毒素定量测定值≥pgml作为cutoff值Kappa=内毒素定量测定值≥pgml作为cutoff值Kappa=。当Kappa≥即可说明实验取得了相当满意的一致性。本实验以≥pgml作为cutoff值Kappa达两种方法的一致性结果已经非常满意。根据尿培养结果将内毒素测定结果分为革兰阴性菌生长组、革兰阳性菌(包括真菌)生长组和无细菌生长组经SPSS软件对各组间内毒素定量测定结果进行统计分析革兰阴性菌生长组与无细菌生长组间有非常显著的差异t=P<革兰阴性菌生长组与革兰阳性菌(包括真菌)生长组间有显著的差异t=P<革兰阳性菌(包括真菌)生长组和无细菌生长组间无显著差异t=P>。尿液内毒素动态浊度法定量测定完全能够满足临床作为革兰阴性菌尿路感染诊断方法的要求无需等待细菌培养鉴定结果即能对尿路革兰阴性菌感染作出早期快速诊断对临床尿路感染的诊治具有重要的指导意义。本方法尿液内毒素定量测定范围为~pgml过低均只能得到<pgml的结果对实验数据的统计和分析可能有一定影响,还需继续完善。内毒素测定动态浊度法的灵敏度很高微量的内毒素污染既可导致测定值升高实验所用器材都应无内毒素污染特别是留取尿液的容器最好采用一次性无热源尿杯。故标本的留取和实验过程应去热源操作否则对实验结果可能有一定影响,影响大小尚需进一步实验证实。血尿、浑浊尿标本和℃处理后浑浊的标本可经转分离心取上清液测定对结果无影响颜色特别深的尿标本和乳糜尿尚未见到能否直接测定有待进一步研究。

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