ADHD大鼠前额叶皮层、纹状体中NGFI-B基因mRNA表达的变化

ADHD大鼠前额叶皮层、纹状体中NGFI-B基因mRNA表达的变化 ADHD大鼠前额叶皮层、纹状体中NGFI-B 基因mRNA表达的变化 238中国儿童保健杂志2005年06月第13卷第3期CJCHCJun.2005,VolI3,No.3 文章编号:1008—6579(2005)03—0238—03【基础科研论着】 ADHD大鼠前额叶皮层,纹状体中NGFI—B基因mRNA表达的变化 池霞,郭锡熔,陈荣华.,费莉.郭梅.,潘晓琴. (1南京医科大学附属南京妇幼保健院儿保所,江苏南京210011;2南京医科大学儿科研究所,江苏南京 210029) 中图分类号:R749.94文献标识码:A 摘要:【目的】探讨注意缺陷多动障碍(attentiondeficithyperactivitydisorder,ADHD) 大鼠前额叶皮层,纹 状体中NGFI—B基因mRNA表达水平的变化,分析NGFI—B基因与ADHD病理生理学之间的关系.【方法】以幼 年SHR大鼠为ADHD实验组,WKY大鼠为对照组,应用RT—PCR技术,检测两组大鼠前额叶皮层及纹状体中NG— FI-B基因的mRNA表达丰度.【结果1ADHD大鼠前额叶皮层,纹状体中NGFI—B基因mRNA的表达丰度分别 为(123.13?14.36),(79.O1土8.67),均显着高于对照组[分别为(45.14?7.79),(36.66?6.83)],差异有非 常显着性(P均<O.01).【结论1NGFI—B基因在大鼠前额叶皮层,纹状体中表达显着上调可能与ADHD的病理 生理学相关. 关键词:注意缺陷多动症;NGFI—B基因;RTPCR;多巴胺 ChangesoftheNGFI-BgenemrNAexpressioninprefrontalcortexandstriatumofSHR/WK YRat?-ananimalmodelofat?- tentiondeficithyperactivitydisorder.CHIXia,GUOXi—rong,CHENRong— hua.FEILi,GUOMei,PANXi ao-qin,(1ChildrenHealthCareResearchCenter,theSecondAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity. Nanjing.Jiangsu210011,China;2InstituteofPediatrics,NanjingMedicalUniversity.Nanji ng.Jiangsu210029. China) Abstract:【Objective】 Toinvestigatethechangesofthenervegrowthfactorinducilble-B(NGFI—B)genemR NAexpressioninprefrontalcortexandstriatumofSHR/WKYrats,ananimalmodelofattentiondeficithyperactivity disorder(ADHD),andtoanalyzetherelationshipbetweentheNGFI-Bandthepathophysio1ogyofADHD.【Meth- ods】 SixweeksoldSHRratswereusedforADHDmode1.andsameoldWKYratswereusedfortheeontro1group. Eachgrouphad8rats.TheexpressivelevelsofNGFI— BinthePFCandstriatumofSHR/WKYratswereverifiedby usingRT—PCRtechnique.IResults】ThelevelsofNGFI— BgenemRNAexpression(123.13?14.36)inthepre— fronta1cortexofSHRweresignificantlyhigherthanthose(45.14? 7.79)ofWKYrats(P<O.01).Thelevelsof NGFI-BgenemRNAexpression(79.O1土 8.67)inthestriatumofSHRratweresignificantlyhigherthanthose(36. 66土6.83)ofWKYrats(P<0.01).【Conclusion】ThehigherexpressionofNGFI— BintheSHRratsmaybeone oftheimportantpathophysiologicalbasesforADHD. Keywords:ADHD;nervegrowthfactorinducilble-B;RT—PCR;dopamine 注意缺陷多动障碍(attentiondeficithyperactivi— tydisorder,ADHD),又称多动性障碍,主要表现为注 意缺陷,多动,冲动,常伴学习困难,为儿童保健工作中 常见的心理障碍性疾病之一.现已知,多巴胺(dopa— mine,DA)在ADHD的病理生理学机制中起重要作 用_1],利他林,安非他明等兴奋性药物均可通过调节多 巴胺能神经的活性而有效治疗ADHD[2].近年来研 究发现NGFI—B(nervegrowthfactorinducilble—B)基 因在中枢神经系统中的表达分布与DA能神经分布关 基金项目:江苏省教育厅自然科学基金资助项目(02KJB320011);南京 医科大学科研基金资助项目(NY0101);江苏省卫生厅135重点学科资 助项目 作者简介:池霞(1973一),女,江苏人,主治医师,讲师,在读博士研究生, 主攻研究方向为儿童神经心理及儿童肥胖症. 系十分密切],而有关NGFI—B与ADHD疾病之间关 系的研究尚少见报道,因此本文以WKY(WistaKyo— tO)大鼠为对照,通过检测注意缺陷多动模型SHR大 鼠(spontsneouslyhyoertensiverat)[4前额叶皮层及 B基因mRNA的表达水平,初步探讨 纹状体中NGFI— 了NGFI—B基因与ADHD病理生理学之间的关系. 1材料和方法. 1.1材料清洁级SHR大鼠(实验组),WKY大鼠 (对照组)各8只,鼠龄6周,均为雄性,由上海斯莱克 实验动物有限责任公司提供.饲养于清洁级环境中, 大鼠自由摄食饮水,室温23?,湿度5O,照明时间 7:OO一2O:OO. 1.2前额叶皮层,纹状体中NGFI—B基因mRNA表 达丰度的测定取前额叶皮层30mg或纹状体25 中国儿童保健杂志2005年06月第13卷第3期CJCHCJun.2005,Vol13,No.3239 mg,用TRIzol一步法提取总RNA,经电泳显示28S, 18s和5s清晰三条带,OD260/280比值大于1.8.应 用RT—PCR法检测组织中NGFI—B基因mRNA的 表达水平,大鼠NGFI—B基因上游引物序列:5'一 GGTGAAGAAACCTCATGG3'.下游引物序 列:5,_ATGGCCCGAACCAAGCAGA一3',产物 250bpE.内参照大鼠GAPDH基因上游引物序列: 5'一ACCACAGTCCATGCCATCAC一3',下游引物 序列:5TCCACCACCCTGTTGCTGTA一3',产 物452bp.RT反应体系20l,PCR反应体系20l. PCR扩增条件为:95?预变性5min,94?变性30秒, 56?退火30秒,72?延伸30秒,循环30次,72?终末 延伸7min.PCR产物琼脂糖凝胶电泳后,以uVP计 算机图象扫描分析系统测定电泳条带密度值,以 GAPDH为内参照,计算NGFI—B基因mRNA的相对 含量,结果以NGFI—B条带密度占GAPDH条带密度 的百分比()表示. 1.3统计学方法结果采用?S表示,并采用SPSS 10.0进行数据整理和统计.两 样本 保单样本pdf木马病毒样本下载上虞风机样本下载直线导轨样本下载电脑病毒样本下载 均数的比较经方 差齐性检验后选择t检验. 2结果 ADHD大鼠前额叶皮层中NGFI—B基因mRNA 的表达丰度为(123.13?14.36),显着高于对照组 (45.14?7.79),经统计学分析,两组大鼠前额叶皮 层中NGFI—B基因的mRNA表达丰度差异有非常显 着性(t'一13.49,P<0.01);ADHD大鼠纹状体中 NGFI—B基因的表达丰度为(79.01?8.67),也显着 高于对照组(36.66?6.83),经统计学分析,差异有 非常显着性(t一10.84,P%0.01).见图1. 12345 1543bp 994bp 679bp 515bp 377bp 237bp (1PCRmarker;2ADHD大鼠前额叶皮层;3对照组大鼠前额叶 皮层;4对照组大鼠纹状体;5ADHD大鼠纹状体) 图1ADHD大鼠前额叶皮层及纹状体中NGFIB基因表达 的RT—PCR电泳条带示意图 3讨论 3.1NGFI,B在中枢神经系统的表达分布与多巴胺 能神经分布密切相关现已知,大鼠NGFI—B基因, 是人NR4A1(nuclearreceptorsubfamily4,groupA, number1)基因的同源基因,定位大鼠染色体7q36,编 码563个氨基酸组成的核蛋白.类似于类固醇/甲状腺 受体家族.该基因在多种有丝分裂素作用下可快速而 短暂地表达,故又属即刻早期基因.有资料表明,NG— FI—B基因可与特定DNA激素反应元件结合,起转录 调控因子作用,且在中枢神经系统中的表达分布与多 巴胺能神经分布密切相关.各种多巴胺神经通路中结 构都有较高水平的NGFI—B基因表达l3].由于多巴胺 在ADHD的病理生理学机制中具有重要作用,而有关 NGFI—B与ADHD疾病之间关系的研究尚未见报道, 因此本文采用RT—PCR技术初步分析了ADHD大鼠 前额叶皮层及纹状体中NGFI—B基因mRNA的表达 水平,以探讨NGFI—B基因与ADHD病理生理学之间 的关系. 3.2注意缺陷多动大鼠前额叶皮层,纹状体中NG— FI—B基因mRNA表达水平显着高于对照组SHR 大鼠,最初是由Okamoto等人利用选择性近亲交配法 从wistaKyoto(WKY)大鼠中分离而来的自发性高 血压大鼠模型,由于在培育过程中发现,幼年SHR大 鼠与WistaKyoto大鼠相比,具有显着的ADHD行为 特征,且利他林,安非他明等精神兴奋剂治疗有效,从 而逐渐发展为应用最为广泛的ADHD模型】.因此, 本研究以幼年SHR大鼠为ADHD实验组,WKY大 鼠为对照组,应用RT—PCR技术检测了各大鼠前额叶 皮层及纹状体中NGFI—B基因的mRNA表达水平,以 探讨NGFI—B基因与ADHD之间的关系.结果发现: ADHD实验组大鼠前额叶皮层中NGFI—B基因的表 达丰度为(123.13?14.36),显着高于对照组(45.14 ?7.79);ADHD实验组大鼠纹状体中NGFI—B基 因的表达丰度为(79.01?8.67),也显着高于对照组 (36.66?6.83).经统计学分析,ADHD实验组大 鼠前额叶皮层与纹状体中NGFI—B基因的表达丰度与 对照组比较,差异均具显着性,提示NGFI—B基因可能 在ADHD的病理生理过程中具有重要作用. 3.3NGFI—B基因在ADHD病理生理学中可能的作 用及其机制有关NGFI—B基因与ADHD病理生理 学之间的确切关系目前并不清楚.现已知,ADHD的 主要病理生理学特征为多巴胺能神经功能的不足,其 环节涉及多巴胺代谢及突触传递效率降低等多种机 制.由于研究发现安非他明能够促进脑组织中多巴胺 的释放,利他林能够作用于突触前膜多巴胺转运体而 抑制突触间隙对多巴胺的重摄取,显着增强多巴胺突 触传递的效率,二者在临床治疗中均能显着改善 ADHD的症状_7],因此目前普遍认为突触前膜对多 巴胺释放不足或重摄取增强均可能构成ADHD的发 240中国儿童保健杂志2005年06月第13卷第3期CJC…HC'Jun. 2005,V()113,No.3 病机制.本文分析认为,由于安非他明具有显着上调 扣带回,纹状体及伏核NGFI—B基因mRNA表达的作 用],而多巴胺转运体基因中则存在了NGFI—B的作 用位点口,ADHD时NGFI—B基因表达上调极有可能 是多巴胺释放不足,突触传递效率降低的一种代偿性 反应机制,机体通过自身高表达NGFI—B以弥补多巴 胺能神经功能的不足.有关NGFI—B基因在ADHD 病理生理学中的作用及其机制尚有待今后做进一步的 研究. [1] [2] [3] [4] [参考文献] MARYVS.DopaminedysfunctioninAD/HD:integrating clinicalandbasicneuroscienceresearch[J].BehavBrainRes, 2002,130:65—71. 李英,刘爱敏.注意缺陷多动障碍的治疗研究现状[J].中国儿 童保健杂志,2003,ll(1):42—44. MEYERLINDENBERGA.MILETICHRS.K0HNPD.et a1.Reduceprefrontalactivitypredictsexaggeratedstriataldo— paminergicfunctioninschiz0phrenia[J].NatNeurosci,2002, 5:267-271. DAVIDSE,ZHANGK,TARAZIFI,eta1.Animalmodelsof attention—deficthyperactivitydisorder[J].BrainResearch Reviews,2003,42:1—21. E5]BEAUDRYG,LANGLOISMC,WEPPEI,eta1.Contrasting patternsandcellularspecificityoftransciptionalregulaionof thenuclearreceptornervegrowthfactor—inducibleBbyhalo— peridolandclozapineintheratforebrain[J].JNeurochem, 2000.75:1694—1702. r6]MARUYAMAK,TSUKADAT,OHKURAN,etal,The NGFI—Bsubfamilyofthenuclearreceptorsuperfamily[J~.Int JOncol,1998,12:1237—1243. [7]BERTHAKM,GEGORYMM.AIANJF.eta1.Fhedopa— minetransporter:relevancetoattentiondeficithyperactivity disorder[]].BehavBrainRes,2002.130:57—63. 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[1O]SACCHETTIP,BROWNSCHILDELA,GRANNEMAN JG,eta1.Characterizationof5'一flanking—regionofhumando— paminetransportergene[J].BrainResMolBrainRes,1999. 74:167—174. 收稿日期:2004—1011 (上接第237页) 表3两组女童的家长问卷情况比较 注:两组人数均1O1人,括号内为检出率(). 3讨论 3.13,4岁组女童是进行外阴卫生保健的重点人群本调查 儿童外阴炎检出率为8.1,高于广州中山大学医学院报道的 7.44?.受检的女童中有25.8外阴不能保持应有的清洁 状态.其中阴唇间有污垢占17.7,两侧小阴唇粘连占4.4, 外阴道口潮红为5.0.从问卷调查的结果来看,与外阴炎相 关的因素包括:不能经常性地清洗外阴和换洗内裤,水盆和毛巾 不专用和不能每日消毒,以及不穿内裤等.大多数儿童家长忽 视女童外阴保健问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ,不知道如何正确地为儿童清洗外阴,对儿 童出现的外阴炎临床表现(外阴瘙痒引起抓挠的症状,阴唇粘连 引起的排尿异常等)不能及时辨认.通过整托与日托两组儿童 比较,发现整托女童外阴卫生状况明显好于日托女童,说明女童 外阴保健工作的薄弱环节主要在家庭护理方面.3,4岁组儿 童外阴卫生状况较差,应该是保健工作的重点关注对象. 3.2外阴卫生不洁是女童易惠外阴炎的重要原因近年来对 女童外阴阴道炎的报道多集中在病原学研究方面.常见的病原 菌有p一溶血性链球菌,流感嗜血杆菌,念珠菌属,肠道杆菌属 等J,但大多数小KPI"阴炎为非特异性炎症,最常见的原因是外 阴卫生状况差引起的感染【3].特别是2,6岁女童,其雌激素水 平非常低,外阴及阴道的自净作用较弱,外阴皮肤常缺乏油脂保 护,受尿液,汗液刺激后易发生外阴炎….本文通过对101例外 阴炎女童与非外阴炎女童进行了配对问卷调查,发现在外阴清 洗频率,内裤更换间隔时间,水盆和毛巾是否专用消毒等方面, 两组比较差异有非常显着性.说明外阴卫生不洁是女童易患外 阴炎的主要原因. 外阴炎是一种可防治的疾病,防治的关键是保持外阴清洁. 因此,加强女童外阴保健的社会宣教工作是非常重要和必要的. [参考文献] [13朱新群,贾殿举,马楠.妇产科感染基础与临床[M].北京:科学 出版社,2002.116-l17. [2]K0uMANTAKISEE,HASSANEA,DELIGEOROGLOUEK, eta1.Vulvovaginitisduringchildhoodandadolescence[J].JPe— diatrAdolescGynecol,1997,10:39—43. [3]扬冬梓,石一复.A,Jb和青春期妇科学[M].北京:人民卫生出 版社,2003.259-261. 作者简介:张娟(1958一),女,北京人,主治医师,大专学历,主要从事儿童 保健,儿童营养,儿童生长发育及托幼园所卫生保健管理工作. 收稿日期:2004一lO—O8