【doc】 锌（Ⅱ）-氟罗沙星光化学荧光法测定药物制剂中的氟罗沙星

【doc】 锌（Ⅱ）-氟罗沙星光化学荧光法测定药物制剂中的氟罗沙星 锌(?)-氟罗沙星光化学荧光法测定药物 制剂中的氟罗沙星 第25卷,第9期 2005年9月 光谱学与光谱分析 SpectroscopyandSpectralAnalysis Vo1.25,No.9,pp1468—1470 September,2005 锌(?).氟罗沙星光化学荧光法测定药物制剂中的氟罗沙星 冯瑞琴,丁芬,刘昱 北京师范大学化学系,北京100875 摘要氟罗沙星在紫外光的照射下易发生光解作用.依据氟罗沙星的光解产物与zn2离子形成配合物, 能显着地增敏氟罗沙星的荧光强度,建立了敏化荧光分析氟罗沙星的新方法.探讨了酸度,[zn]/[PHFL— RX]浓度比和光照等对荧光强度的影响.结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明该方法的线性范围为5.0×10一--5.0×10一mol?L,,检 出限为4.2×l0mol?L一.对浓度为5.0×10mol?L的氟罗沙星平行测定 ,计算其相对 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 偏差 20次 (RSD)为1.7%.对针剂,片剂和尿样中的氟罗沙星分别进行了测定,其 回收率为95.0%,105.0%.并在实 验的基础上,对其机理进行了合理的推测. 主题词氟罗沙星;锌离子;光化学荧光 中图分类号:(2)657.3文献标识码:A文章编号:1000—0593(2005)09—1468—03 氟罗沙星(fleroxacin,FLRX)是第三代氟喹诺酮类广谱 抗菌药,其突出特点是抗菌作用强HJ,半衰期长,体内分布 广,在临床上有广泛的应用.目前生物体液中氟罗沙星的含 量测定多采用色谱法’,近来也开始使用荷移反应荧光光 谱法测定_4.氟罗沙星(结构式见图1)有一个较大的共轭平 面,内源荧光较强,但是其喹啉环8位上含有F原子,易发 生光解反应,其光解产物表现出10倍以上的细胞毒性.因 此对FLRX光解产物的分析在药动学研究上有很大意义.本 文将FLRX溶液经紫外光照射发生光解,FLRX光解产物 (用PHFLRX表示)与zn2离子形成了荧光很强又较稳定的 配合物,激发波长和荧光波长分别为276和433rim.利用该 方法测定了针剂,片剂和尿样中FLRX的含量,结果令人满 意.此方法灵敏度较高,背景干扰少,操作简便快速,选择 性较好. 0 Fig.1ThemolecularstructureofFLRX 1实验部分 1.1仪器与试剂 M850荧光分光光度计(日本日立公司);pHS-3B型精 收稿日期:2004—05.08.修订日期:2004—08.26 基金项目:北京市自然科学基金(2022007)资助项目 作者简介:冯瑞琴,女,1946年生,北京师范大学化学系副教授 密pH计(上海雷磁仪器厂).FLRX标准品(中国医学科学院 医药生物技术研究所提供);FLRX(1.0×10一mol?L)储 备液的配置:准确称取36.90mgFLRX标准品于烧杯中,滴 加4mL0.1mol?LI1HC1溶液和少量二次水将其完全溶解, 然后转移至100n容量瓶中,定容至刻度,放在冰箱中储 存,用时逐级稀释至所需浓度.zn”储备液(1.0×10mol? L).所有试剂均为分析纯,实验用水为二次重蒸水. 1.2实验方法 于10n具塞刻度比色管中依次加入适量FLRX标准 溶液,zn2标准溶液,以二次水定容摇匀.光照30min(光 照强度30mw?cin),放置30min后测定.装在1cin石英 池中,选定激发波长276rim,发射波长433rim,激发和发射 通带为6n,n/8rim,测定溶液的荧光强度F,同时做试剂空 白Fn,相对荧光强度?F=F—F.. 2结果和讨论 2.1激发光谱和荧光光谱 为了探讨Zn”一FLRX光解产物的发光机理,我们研究 了PHFLRX和zn2一PHFLRX配合物的激发和荧光光谱(见 图2).FLRX光解产物的最大激发峰和荧光峰分别为276和 433nrll,与未光解的FLRX相比,峰位均发生了紫移且强度 变大.而FLRX光解产物与zn2形成配合物后的荧光强度 增大了6.5倍,灵敏度显着提高.这是由于紫外光照使FL— RX的结构发生了变化,生成了荧光更强的醌亚胺构型J. 第9期光谱学与光谱分析 looO 8o0 6o0 4o0 2o0 0 2 Wavelength/rim Fig.2Theexcitationandfluorescencespectra ofPHFLRXandZ.PHFLRX 1,1’,TheexcitationandfluorescencespectraofPHFLRX; 2.2’.TheexcitationandfluorescencespectraofPHFLRX—Zn2 A:276lm1,A=433nm,c(FLRX)=1.0×10tool.L,, f(Zn2)=1.0×10—mo1.L一 2.2酸度对荧光强度的影响 酸度对zn2一PI-IFLRX体系荧光强度有一定的影响,pH 值小于2.0时zn2一PI-IFLRX不能形成配合物,pH5.5,6.5 之间其荧光强度最大且稳定.而我们用的去离子水配制的 zn2和FLRX溶液的pH值均在此范围内.故实验中未加任 何缓冲溶液. 2.3[Zn2]/[PHFLRX]浓度比的影响 荧光峰强度是溶液中[zn2]/[PI-IFLRX]浓度比的函数. 随着zn2倍数的加大,荧光峰明显增强.而这种影响与FL— RX的浓度也有关.当FLRX浓度为5.0×10.mol?L时, zn2过量大约50倍时发光强度较大且平稳;而浓度为5.0× 10I6mol?L时,需要zn2过量大约200倍才能促使配合反 应尽快达到平衡.当FLRX的浓度为5.0×10,mol?L,, zn2的浓度为1.0×10mol?L时,荧光强度已经很大, 所以在以后的实验中选用zn的浓度为1.0×10,mol? L_. 2.4光照的影响 由于FLRX溶液易光解,荧光强度不稳定,无法用荧光 法直接测定.本文采用光化学的手段,将配好的FLRX与 zn2的溶液放在365n/Tl的紫外灯下光照一段时间,使FL— RX的光解产物与zn2离子生成荧光更强的配合物,然后测 定其荧光强度.实验发现紫外光强度,光照时间,FLRX的 浓度及[zn2]/[FLRX]的比值都对FLRX的光解有影响.经 实验,我们选择光照强度为30mw?ClTI一,光照时间为30 min,光照后放置30min后测定效果最佳. 2.5干扰实验 在选定的最佳实验条件下,考察了体内常见的一些金属 离子,有机物对zn2一PFIFLRX体系相对荧光强度的影响, 以加入干扰物对相对荧光强度的影响不超过?5%计算.实 验结果表明100倍的K,Na,ca2,M;10倍的c02, Pb2,Ni2,Cu2;1倍的A1”,Fe3;20倍的淀粉,糊精, 血红蛋白,肌红蛋白,维生素Bl,一丙氨酸对样品的测定无 影响.实验采用的大多数的无机离子浓度远远高于其在真实 样品中的浓度,所以它们对真实样品的测定基本上无影响. 2.6工作曲线,检出限和精密度 在选定的最佳实验条件下,以276nm]433n/Tl荧光峰强 度定量.当FLRX浓度在5.00×10,,5.00×10,mol?L 的范围内,zn2一PFIFLRX配合物体系的相对荧光强度与 FLRX浓度呈良好的线性关系,线性回归方程为:AF= 1.5724×10.CFLRX+3.4403,r=0.9988. 按实验方法对空白溶液进行了20次平行测定,根据IU— PAC建议,空白信号的标准偏差的3倍与工作曲线斜率的比 值即为检出限.据此计算其检出限为4.2×10mol?L,.按 实验方法对浓度为5.0×10,mol?L的FLRX平行测定10 次,相对标准偏差(RSD)=1.7%. 2.7样品的测定 2.7.1片剂和针剂中FLRx含量的测定 取5片天方罗欣药片研磨均匀成粉状,准确称取相当于 1片FLRX的质量(约含FLRX100mg),置于100l1烧杯 中,加热溶解,电磁搅拌1h过滤,将滤液定容至500—. 测定时适当稀释. 将一支天方罗欣针剂(含FLRX200mg)置于100l1容 量瓶中,用去离子水定容至刻度(5.415×10mol?LI1),放 在冰箱中储存,测定时稀释至所需浓度.结果见表1. Table1DeterminationresultsofFLRXinsamples(n=3) Table2DeterminationresultsofFLRXinurine(n5) 2.8.2尿样中FLRX回收率的测定 根据文献[7]报道,单次口服FLRX胶囊后,24h内,依 时间不同尿药浓度不同,约在30,200mg?L范围(即为 8.1×10一,5.4×10mol?L).人工合成尿样,使尿药浓 度在工作曲线范围之内.取1.0rnL尿样按实验方法测定. 扫【s一u?皇0【J》口BIH 1470光谱学与光谱分析第25卷 尿样中FLRX的浓度在2.0×10-.,5.0×10I6md?LI1范围归方程为:AF=15.155×10cFL+152.96,r=0.9989,加 内与相对荧光强度呈线性关系,尿样中加标工作曲线线性回标回收 率95.0%,103.0%,见表2. [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] 参考文献 MorinM.Ana1.Chim.Acta,1989,219:67. PredragDiurdievic,MilenaJeffkic—Stankov,AleksandraLabanTalanta,2001,55:631. EvaMGolet.AlfredoCAlder.AndresHartmann,etalAna1.Chem.,2002,73: 3632. DULi—rning.FANZh}feng.ZHANGRui—feng(]~黎明,范哲锋,张瑞 凤).SpectroscopyandSpectralAnalysis(谱学与光谱分析),2003, 23(2):328. LydiaJMartinez,GalaxyLi,ColinFChignel1.PhotochemistryandPhotobiol ogy,1997,65:599. ZHANGTie—li,ZHAOHui—chun,JinLin.pei,etalJournalofPhotochemistryandPhotobiologyA:Chemistry,1999,121:37. LIHua,etal(李华,等).ChineseJournalofNewDrugs(中国新药杂 志),1996,5(1):55. DeterminationofFleroxacinbyPhotochemicalFluorescenceof Zinc-FleroxacinComplex FENGRui—qin.DINGFen,LIUYu DepartmentofChemistry,BeijingNormalUniversity,Beijing100875,China AbstractBasedonthecomplexformedbyZn2whichcanstrengthentherelativefluorescenceintensityoffleroxacinevidently,a novdDh.toch锄icalfluorescencemethodWaSdeveloped.Theelf&坞 oftheacidity,theconcentrationratio0{Ztofleroxacin,and thetimeforilluminationwerestudied.Undertheoptimumexperimentconditions,thelinearrangeofthedeterminationWaS5.00× 108—5. 00×10mol?L-..ThedetectionlimitWaS4.2×10一 mol?L-..Therelativestandarddeviationofthedetermination0{ fleroxacin(5.0×10mol?LI1)waS1.7%(=20).ThemethodWaSsuccessfullyappliedtothedeterminationoffleroxadnin specimens.andtherecoverieswereintherangeof95.0%一 105%.Themechanismofthissystemisproposed. KeyworflsFleroxacin;Zincion;Photochemicalfluorescence (ReceivedMay8,2004;acceptedAug.26,2004)