探讨临床血液样本放置时间对生化检验结果的影响.

探讨临床血液样本放置时间对生化检验结果的影响. Hubei University of Chinese Medicine 本科毕业论文 题 目:探讨临床血液样本放置时间对 生化检验结果的影响 姓 名: 陈孝琴 指导老师: 陈仕银 学 号: 20090401150 专 业: 医学检验 年 级: 2009级 实习单位: 四川省广安市人民医院 完成日期: 2013 年 4 月 15 日 1 学位论文作者声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外～本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。 本人完全了解有关保障、使用学位论文的规定～同意学校保留并向有关学位论文管理机构送交论文的复印件和电子版。同意本论文被编入有关数据库进行检索和查阅。 本学位论文内容不涉及国家机密。 论文题目:探讨临床血液样本放置时间对生化检验结果的 影响 实习单位:四川省广安市人民医院 作者签名: 指导老师: 2013年 4 月 15日 2 目录 一、中文摘要---------------------------------------------------------------------------3 二、英文摘要---------------------------------------------------------------------------3 三、正文---------------------------------------------------------------------------------5 1 前言--------------------------------------------------------------------------------5 2 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方法-----------------------------------------------------------------------5 2.1标本采集-------------------------------------------------------------------5 2.2生化分析仪----------------------------------------------------------------5 2.3试剂-------------------------------------------------------------------------6 2.4方法-------------------------------------------------------------------------6 2.5 检测指标------------------------------------------------------------------6 2.6 统计方法------------------------------------------------------------------6 3 结果-------------------------------------------------------------------------------6 4 讨论-------------------------------------------------------------------------------7 四 参考文献----------------------------------------------------------------------------9 五 综述 影响生化检验结果的因素-----------------------------------------------------10 综述文献--------------------------------------------------------------------------16 3 一、中文摘要 摘 要: 目的,探讨血液标本放置时间对生化检验结果的影响及部分生化检验结果 对血液标本放置时间的要求。方法:采用日立7600全自动生化分析仪检测100例血 液标本在不同存放时间的28项生化检验的数值。结果:血液标本放置24 h结果差异 2+有显著性的项目有Mg、AST、ALP、ALB、GLU、TBIL、GGT、LDH、α-HBDH、 2+++Ca、K、COCP;血液标本放置8 h结果差异有显著性的项目有K、GLU、COCP、22 AST;血液标本放置3h结果差异有显著性的项目有GLU、COCP。结论:标本放置2 时间对结果是有影响的;血液标本长时间放置后，其结果偏高的是:TP、ALB、AST、 2++2+ALP、α-HBDH、LDH、Ca、K、Mg;其结果偏低的是:GLU、TBIL、COCP、2 ++GGT;血液标本放置时间对结果影响差异无显著性的是:Na、Cl、DBIL、TG、UA。 关键词: 生化检验;血液标本;放置时间 二、英文摘要 To expiore how the placing time of clinical blood samples to affect the results of biochemical tests Abstract Objective: To research how the time of blood samples placing to affect the results of biochemical tests. And the time of placing is requested by some results of biochemical tests.ethods:Adopt Hitachi 7600 automatic biochemical analyzer to detect the 28biochemical tests figures of 100 cases of blood samples in the different storage time .Results:blood samples were placed for 24 h, the items of significant different results are ALT, AST, ALP, ALB, GLU, TP, TBIL, GGT, LDH, α-HBDH, Ca, Pi; blood samples were placed for 8 h, the items of significant different results are AST, GLU, TP and LDH; blood samples were placed for 3h, the item of significant different result is GLU .Conclusions: the sample storage time can affect the results; After blood samples are 4 placed for a long time , the higher results of samples are : TP, ALB, AST, ALP, and GGT, α-HBDH in and LDH, Ca and Pi; the lower results of samples are : GLU, TBIL, ALT;the placing time of some blood samples has no effect in the results.They are: DBIL ,Na,Cl,TG,andUA. biochemical tests; blood samples; storage time Key words: 三、正文 1.前言 随着时代的前进，科技不断发展，医学检验行业也在发生着翻天覆地的变化;随着全自动化分析仪的广泛使用，传统的生化检验模式发生了变化，由传统的手工、半手工模式转变为现在的单标本要进行多项目测定，但是对于标本量较大，很多住院患者以及门诊患者由于早晨采血时间过早，以及每天对生化分析仪进行质控和增加试剂等准备工作过于长，血液标本在采集离心处理后往往不能及时上机检测，离心后的血液标本(含有血球)大多放置了2小时以上;而对于标本量小的生化室为了节省试剂，降低成本，把标本集中起来做，这样就造成了大多数标本需放置1 h以后甚至更长时间才能上机检测血液标本因素是影响临床化学分析准确性和可靠性的最重要最直接的因素，但是影响血液标本的因素也是多种多样，为确保实验数据的真实、可靠，从病人的准备、标本收集、贮存、处理等方面入手。为了探讨血液标本放置时间的长短对检测结果的影响，我们采集了100例年龄在18,26岁，平均年龄为22岁健康体检者(男女各50例)的血液标本，分别对1、3、8、24h的28项生化项目检验结果进行统计分析，本文就血液标本放置时间对血液化验结果的影响加以总结。 2.材料与方法 2.1 标本采集 用BD公司生产的一次性真空采血管，对100例健康体检者进行空腹静脉采血5ml，并分别 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 采血时间。 2.2 生化分析仪 日立7600全自动生化分析仪。 5 2.3 试剂 所有试剂均由四川迈克生物科技有限 责任 安全质量包保责任状安全管理目标责任状8安全事故责任追究制幼儿园安全责任状占有损害赔偿请求权 公司提供。 2.4 方法 将门诊采集的100份血液标本放置15min后，用离心机以3500r/min离心10min分离血清。质控血清及校准品严格按照说明书的要求进行，上机对16项生化项目进行校准及质控，使每一项质控项目均在(?1S)范围内。于采血时间1h，分别对各标本进行生化项目测定，做好记录，然后将各标本加盖后放置2-8?冰箱储存。再分别于相应的3h、8h、24h对28项项目上机测定，并做好记录。 2.5 检测指标 生化指标检测项目尽可能多，因为不同的生化指标变化代表不同的病变类型。本 +-+2+2+2+实验选择了钠(Na)、氯(Cl)钾(K)钙(Ca)、镁(Mg)、磷(Pi)、铁(Fe)、葡萄糖(Glu)、素(Urea)、肌酐(Crea)、尿酸(UA)、二氧化碳(CO)、谷草转氨酶(AST)、2 谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酸转移酶(GGT)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸(HBDH)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)等生化指标作为检测指标，用以比较不同放置时间对血液标本生 化指标检测结果的影响。 2.6 统计方法 SPSS15.0统计软件对数据做统计处理，采用t检验比较血液标本的1小时检测值与3小时，8小时，24小时放置时间的离心后的血液标本生化指标检测值，并采用F检验比较不同放置时间的检测值，P<0.05为差异显著。 3 结果 如果以采血1h测定的结果为基准,血液标本放置3h结果差异有显著性的项目有GLU;血液标本放置8h结果差异有显著性的项目有GLU、AST;血液标本放置24h其结果差异有显著性的项目有GLU、ALB、TBIL、ALT、TP、AST、LDH、ALP、CA、Pi.具体见表1 6 表1 100例健康体检者血液标本放置不同时间的28项生化检验结果比较。 项目名称 项目简称 测定结果 1小时 3小时8小时24小时 ,X1, ,X3, (X8) X(24) + 钾,mmol/L, K4.14 4.22 4.28 5.25 + 钠,mmol/L, Na141.2 141.7 141.9 142.0 - 氯,mmo/L, Cl101.1 101.3 101.4 101.6 2+ 钙,mmol/L, Ca2.28 2.30 2.35 2.44? 2+ 镁,mmol/L, Mg0.84 0.84 0.86 0.89 磷,mmol/L, Pi 0.95 0.94 0.91 0.89? 2 铁,umol/L, Fe12.2 12.4 12.5 12.6 葡萄糖,mmol/L, Glu 4.61 4.27? 3.95? 3.62? 尿素,mmol/L, Urea 4.32 4.31 4.32 4.35 肌酐,umol/L, Crea 55.1 55.5 55.4 55.8 尿酸,umol/L, UA 418 418 416 415 二氧化碳,mmol/L, COCP 24.5 22.3 19.1 16.9 2 谷草转氨酶,U/L, AST 17 19.2 23.2? 29.1? 谷丙转氨酶,U/L, ALT 15 15.3 15.9 18 碱性磷酸酶,U/L, ALP 62 62.3 62.7 69.1? 谷氨酰转移酶,U/L, GGT 14 14 13.8 12.9? 白蛋白,g/L, ALB 45.5 45.7 45.9 47.1? 总蛋白,g/L, TP 72.5 72.8 73.1 74.9? 总胆红素,umol/L, TBIL 22.4 22.1 22.7 20.9? 直接胆红素,umol/L, DBIL 6.3 6.3 6.2 6.1 总胆汁酸,umol/L, TBA 6.2 6.3 6.5 7.1 肌酸激酶,U/L, CK 135.4 136 136 137 乳酸脱氢酶,u/L, LDH 169 169 170 175? α-羟丁酸脱氢酶,U/L, HBDH 141 141.5 142.3 146.3? 甘油三脂,mmol/L, TG 1.02 1.04 1.05 1.03 总胆固醇,mmol/L, TC 4.73 4.73 4.70 4.69 高密度胆固醇,mmol/L, HDL 1.4 1.41 1.42 1.43 低密度胆固醇,mmol/L, LDL 2.13 2.13 2.14 2.13 注:注:X1、X3、X8、X24表示项目在相应时间的结果均值～带?表示P,0.05差异明显。 4 讨论 血液标本生化指标监测在临床疾病中具有十分重要的意义，如血清中若ALT升高则表示该患者肝功能有可能损伤或者是有心肌梗塞、心肌炎及胆道疾病等;皮肌炎、 7 肌肉损伤、肌营养不良、心包炎、脑血管意外及心脏手术等则会导致CK增高，等。所以为确保检测结果的准确性，就需要保证所采用的血液标本质量。不同的放置时间会对血液标本产生不同程度的影响。本实验表明血液标本离体后会因不同放置时间而 +-引起生化检测值发生变化，影响相关疾病的诊断准确性。其中Na、Cl,TP等于4? +冰箱放置较稳定，AST、LDH、K、Glu则是以离心分离血清后4?冰箱较稳定。所以可以针对不同的诊断需要选择较为合适的血液标本放置方式及时间，但是，为了保证生化指标的准确性，应该及时对临床住院病人血液标本以及门诊病人血液标本进行处理和检测。 标本放置时间过久，由于红细胞被破坏或酶类活性降低可致检验结果异常，如Glu [1]可因RBC利用及细菌的分解和糖酵解酶的作用使其浓度下降;因细胞中某些物质释放人血清中，干扰和降低了其催化谷氨酞基转移到双甘肽分子上，释放硝基苯胺的能 [2]力和活性，导致吸光度下降，使GGT降低;TBIL因胆红质被氧化随存放时间的延长略有降低;血脂因脂蛋白中的胆固醇在贮存过程中，脂蛋白颗粒的结构可能发生改变，甚至裂解而影响选择性改变;脂蛋白之间也可能有部分脂质交换，导致对部分结果产 [3-5]生影响。因此，血液标本放置时间越短越好。 标本检测结果受诸多因素的影响。所采集的血液标本往往因为各种原因不能及时送达实验室，特别是放置时间和存放温度等这些人为能够控制、技术性要求不高的条件，经常会被忽视。这在一定程度上会影响临床检验结果的准确性，从而影响医师做出正确的判断，给临床治疗带来不利因素。这就要求实验室工作人员应根据各检测指标对保存时间的要求，选择适当的标本保存条件，尽量避免检测中系统误差的产生 。采血后标本存放和送检时间的快慢对检验结果的准确与否有着直接的影响，实验室接到标本后应尽快进行检查，否则，应将血清或血浆分离出来，放置冰箱中低温 [6,7]保存，尽可能减小对结果的影响 。以上结果表明标本放置时间对结果是有影响的，考虑到实验室方法学允许误差，对具体项目的测定提出如下要求:GLU应3h内测定，AST、TP、LDH应8 h内完成，ALT、ALP、ALB、TBIL、GGT、α-HBDH、Ca、Pi 8 应24 h内测定完。 考虑到实验室方法学允许误差，对具体项目的测定提出如下要求:GLU应在4 h 2+内测定，BUN、TBIL应在8 h内完成，TP、ALB、ALT、AST、ALP、GGT、Ca、P应在24 h内测定完。血液标本长时间放置后，其结果偏高的是:TP、ALB、ALT、 2+AST、ALP、GGT、Ca;其结果偏低的是:BUN、TBIL;对结果影响差异无显著性的是:TG、DBIL。这提示，要得到血脂等指标的可靠准确的检测结果，标本也不适宜在低温下长时间保存。正是由于血液放置时间对有些生化检验项目的影响，对于工作量大的生化室应先测定不宜长时间放置的标本，而不能及时测定的项目应把血清分离出来后放置2-8?冰箱保存。因此，生化工作人员不仅要知道对标本放置时间的要求，还要知道其结果的变化趋势，以便了解长时间放置后其结果是偏高还是偏低，在实际检测中要合理安排检测项的顺序，对GLU和CO等不稳定的项目要及时测定，其他2 项目测定可以采取分批处理的方法力争把对实验结果的影响降到最低。 四、参考文献: [1]沈红五，陈宏梅，徐秀群，等(标本放置时间与保存温度对血糖血钾结果的影响[J](护理学杂志，2011，26(8):61—63( [2]叶应妩.全国临床检验 操作规程 操作规程下载怎么下载操作规程眼科护理技术滚筒筛操作规程中医护理技术操作规程 ,M,(第三版).南京:东南出版社，2006:313-315. 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++,它们在使用抗凝剂后的血清浓度会抗凝剂本身还常含有某些的离子成分如K、Na 2+2+升高;某些酶的活化还需要Ca、Mg的辅助，当使用上述抗凝剂后，这些抗凝剂 2+2+与标本和试剂中的离子结合，使得游离Ca、Mg的含量明显减少，从而抑制这些酶的活性;此外草酸盐可与乳酸、丙酮酸发生竞争性抑制，又能与LDH、烟碱辅酶 +腺嘌呤二核苷酸(NADH)、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)形成复合物。因此用这些抗凝剂分离的血浆一般不适用于酶活性的测定。肝素为含硫酸基团的粘多糖，对ALT、AST、LDH、酸性磷酸酶(ACP)无影响，适用于急诊时迅速分离进行测定，但值得注意的是肝素对CK等酶有轻微的抑制作用，因此临床上生化检测除纤维蛋白原测定外，基本都是采用血清标本。 5.标本处理 储存对生化检验结果的影响 5.1 标本处理 检验科收到标本后如果先45?水浴10min,再3000rpm离心5min即可使血清LDH、K+浓度显著升高，因此只需要低速离心分离血清即可。 5.2 标本储存 标本分离前放置太久可造成溶血，另外，由于葡萄糖的酵解作用和细胞对葡萄糖的利用导致标本采集后的血液葡萄糖浓度进行性下降，有报道全血样品中葡萄糖在室温下条件下，每小时约酵解5%;Na+、Cl-、K+静置2-3h后则会有明显上升的趋势。血清蛋白对酶蛋白有一定的稳定作用，如果没有细菌污染，大部分酶存在于清蛋白中可在室温下保存1-3天而活性不受影响，但是也有有些酶如CK放置4h后其活性明显下降;前列腺酸性磷酸酶极不稳定，在离体后较短的时间内活性即明显下降，此外大部分酶在低温下比室温更稳定，但有些酶如醛缩酶(ALD)在低温下特别是-20?冰冻时，可引起不可逆性失活;LDH在低温下反而不如室温稳定。标本分离 14 后放置太久，其水分容易蒸发，使标本浓缩而结果偏高。因此标本应尽快分析，对于暂时不能分析的标本应该先密封然后保存于4?冰箱中。 6.标本状态对生化检验结果的影响 6.1 溶血 溶血是临床生化检验中最常见的一种影响因素，它能引起很多指标明显异常。引起标本溶血的原因有很多:注射器或容器内不干净;抽血时使用的针头过小、抽血用力过大、较长时间地使用止血带、产生过多的泡沫;抽血后未取下针头直接将血液注入容器内、混匀抗凝剂时用力过大等。因此有研究者主张抽血时不束扎止血带，因扎带可造成局部淤血、缺氧、水肿、溶血等而影响检验结果，若确需扎带，则不宜过紧，且不能超过1分钟。溶血的干扰机理有以下三种:一是血细胞中高浓度组分逸出，使测定结果增高,血细胞内浓度比血浆中浓度明显高的物质有LDH、ACP、AST、+K，只要轻微溶血就可以对这些项目产生很大影响。另外若某些物质的血细胞内浓度低于血清浓度时，则溶血相当于血清被稀释，因而使这些血清成分特别是发生重度溶 2++-血时的检测值降低，这类项目主要有Ca、Na、Cl、UA等。二是血细胞成分进入血清中后因化学反应而引起其他物质的浓度改变，如溶血后红细胞的磷脂进入血清被血清中的磷酸酯酶水解，其结果造成血清无机磷浓度显著增高。三是血红蛋白本身颜色对检测的光学干扰，血红蛋白的颜色在431nm和555nm波长附近能使比色、比浊法 [5-7]的吸光度增高，如溶血引起重氮单试剂法胆红素测定结果明显升高。实际上，以上三类干扰在溶血标本中同时存在并可相互作用，因而使受影响的检项更为复杂，这在超微量、高精度和多指标的检测分析中显然不可忽视，因此，严控标本溶血是保证检验质量的重要方面。 6.2 脂血 血液脂浊可散射光线，所以对吸光度一般产生正向干扰，导致某些项目如ALB、UA、总蛋白(TP)等测定结果偏高,此时即使使用两点法或连续监测法不能排 [3]除脂血干扰。而在pH10以上的环境中，乳糜中的TG会皂化可使血清逐渐变清，使 2+许多比色法测定如Ca、Cr、ALP、TP等结果产生负误差,此时可以用双波长法或 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 样本空白消除干扰。在某些实验室用乙醚处理脂血以消除脂浊对生化检验结果的影 15 响，但是乙醚处理的脂浊标本虽然可以排除脂浊对ALT、AST、TP等指标的干扰， 2+[7]但是不能排除对ALB、GGT、LDH、BUN、GLU、Ca等指标的干扰。 6.3 黄疸 胆红素对反应结果产生黄色化合物的比色分析影响很大，一般可以用样本空白或两点比色法、连续监测法来消除胆红素对黄色结果的影响，但由于胆红素不稳定，随着胆红素被氧化为胆绿素、胆褐素而变色，此时如果使用两点法、连续监测法 [3]同样也不能排除胆红素对结果的干扰。此外胆红素作为一种还原剂对氧化反应有干扰，如氧化酶法测定GLU、TG、UA、胆固醇等，因为胆红素可以与上述过程中HO22分解产生的新生态氧发生反应，从而使新生态氧与氧化酶法反应中的色源物质结合减少，导致结果偏低。此时也可用双波长法或设计样本空白消除干扰，亦或当外观检查发现是黄疸血清时可先除蛋白，然后加胆红素氧化酶预先将胆红素氧化成较稳定的氧化产物胆褐素，可大大减低甚至消除胆红素的干扰。 综述文献 [1] 张运斌 采血因素导致错误检验结果分析 [J] -中国误诊学杂志 2001(10) :1547-1548 [2] 吕赛平,邹学森,袁水斌 分析前各因素对生化检验结果的影响[J] 江西医学检验 2006, 24(6):557-559 [3,邱谷 临床生化分析过程之外的质量控制 [J] -现代检验医学杂志 2002(02):44-45 [4] 贺志安,张铁汉,卢光洲 输液过程中生化检验采血时间与部位的选择 1998(08):474-474 [5] 刘兰平,李芳,罗大和 护理人员抽血对检验结果的影响因素探讨 [J] -护士进修杂志 2000(01):7-9 [6] 轩东霞,吴春香 影响血液标本采集质量的因素分析及控制措施 [J -中国当代医药 2011(3):106-107 [7,杨玮 浅谈血标本采集的质量影响因素及护理对策 [J] -遵义医学院学报 2009(5) :528-529 [8] 王亚 浅谈血液生化标本采集的影响因素及方法 [J] -社区医学杂志 2010(6) :33-34 16