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蛋白质提纯研究进展.doc

蛋白质提纯研究进展

王一妹
2017-11-27 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《蛋白质提纯研究进展doc》,可适用于综合领域

蛋白质提纯研究进展第卷第期年月天津化工TianjinChemicalIndustryVoNOJuo蛋质握纯研(苎展许亚平林俊岳(井冈山学院化学系,江西吉安)摘要:本文综述了蛋白质的提取方法,纯化技术,及影响蛋白质分离和提取的因素为开展蛋白质的制备及应用提供了一定的依据关键词:蛋白质提取纯化中图分类号:文献标识码:A文章编号:()蛋白质的制备工作涉及物理,化学和生物等方面知识,但基本原理不外乎两方面一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中,如盐析,有机溶剂提取,层析和结晶等二是将混合物置于单一物相中,通过物理力场的作用使各组分分配于同区域而达到分离目的,如电泳,超速离心,超滤等蛋白质(包括酶)的提取大部分蛋白质都可溶于水,稀盐,稀酸或碱溶液,少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇,丙酮,丁醇等有机溶剂中,因此,可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好,溶解度大,是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解提取的温度要视有效成份性质而定一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间但另一方面,温度升高会使蛋白质变性失活,因此,基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温(以下)操作另外,蛋白质,酶是具有等电点的两性电解质,提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH范围内一般来说,碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白质用偏碱性的提取液再则,稀浓度可促进蛋白质的溶解,称为盐溶作用同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合,有保护蛋白质不易变性的优点,因此在提取液中加入少量NaC等中性盐,一般以molL浓度为宦缓冲液常采用~M磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液李凤英等【l用盐溶法提取葡萄籽的蛋白质有机溶剂提取法一些和脂质结合比较牢固或分子中非极性侧链较多的蛋白质和酶,不溶于水,稀盐溶液,稀酸或碱中,可用乙醇,丙酮和丁醇等有机溶剂,它们具有一定的亲水性和较强的亲脂性,是理想的提脂蛋白的提取液冷乙醇分离法提取免疫球蛋白最早是由Cohn于年提出的,用于制备丙种球蛋白目前,国际上常用的冷乙醇法有两种,一种是美国等主要使用的Cohnoncley法,另一种是西欧等国主要使用kistler和Nitschman法冷乙醇分离法是WHO规程和中国生物制品规程推荐用的方法,不仅分离物质多,可同时分离多种血浆成分,分辨率高,提纯效果好,而且有抑菌,清除和灭活病毒的作用,但是要需要在低温下操作丁醇提取法对提取一些与脂质结合紧密的蛋白质和酶特别优越,一是因为丁醇亲脂性强,特别是溶解磷脂的能力强二是丁醇兼具亲水性,在溶解度范围内不会引起酶的变性失活另外,丁醇提取法的pH及温度选择范围宽酶法由于米糠中的蛋白质与纤维素,糖类,植酸盐等其他成分键合牢固,使得米糠蛋白较其他植物蛋白的提取困难米糠蛋白的传统提取方法是采用强碱溶液提取,但提取效果较差而且,在强碱作用下,蛋白质中的赖氨酸与丙氨酸或胱氨酸会发生缩合反应,生成有毒物质(对肾脏有害),丧失食用价值收稿日期:一ll天津化工年月李喜红等闭用酶法从脱脂米糠中提取蛋白质如果戊聚糖复合酶与碱性蛋白配合使用,脱脂米糠中的蛋白质的提取率可达到添加不同的糖酶或蛋白酶均能有效地提高脱脂米糠中蛋白质的提取率,其中糖酶中以戊聚糖复合酶的效果最好,蛋白酶中以碱性蛋白酶的效果最为突出戊聚糖复合酶提取脱脂米糠蛋白质的优化条件是:加酶量,pH值,温度~C,提取时间h碱性蛋白酶的适宜作用条件是:加酶量,pH值,温度~C,提取时间h郭荣荣等同碱法与酶法与酶法提取大米蛋白工艺及功能特性比较研究得出结论是碱法提取的大米蛋白持水性,吸油性和起泡性优于酶法提取的大米蛋白,而酶法提取的大米蛋白的溶解性,乳化稳定性和泡沫稳定性优于碱法提取的大米蛋白两种方法提取得到的产品乳化能力相当酸碱度法王桃云等就是运用这种方法配合使用加热法提取蓰草叶蛋白取獯草鲜叶晾干混匀,取g烘干称重,测定干物质重鲜叶打浆后在适量浸提剂中浸泡,然后用四层滤布压汁得滤液,用双缩脲法测定其吸光度,以比较不同的打浆时间,浸提剂pH值,料液比以及浸提时间对提取效果的影响压汁后的滤液再经低速离心分离(rrain,n)得到去除杂质的汁液,使其在恒温水浴锅内快速加热到规定温度,恒温得絮凝物,过滤,得叶蛋白沉淀物,~C烘干,得叶蛋白浓缩成品上清液用pH的HC和pill的NaOH调汁液pH值,得叶蛋白沉淀物,烘干得叶蛋白浓缩成品根据它们的沉淀率比较得到最佳絮凝温度和汁液pH值最后将得到的诸多最佳条件组合作为蓰草叶蛋白提取工艺流程采用酸碱度法及加热法提取蓰草叶蛋白的较优工艺以及工艺参数是:常温,料液比:,打浆时间min,浸提时间min,浸提剂选用中性水溶液,絮凝温度~C时,沉淀分离得到叶绿体叶蛋白调pH值为时分离出细胞质叶蛋白,pH值为时分离出细胞质叶蛋白,前者为深绿色粉末,后两者为土黄色和灰白色粉末蓰草叶蛋白产品在~C条件下干燥在以上条件下,叶蛋白的得率为陈申如等用酸法提取了鲢鱼鱼肉蛋白质,提取的蛋白质无腥味,色泽洁白,蛋白质产率高,可达左右反胶团相转移法反胶团相转移法是年代兴起的一种新型分离技术,它利用表面活性剂分子在有机溶剂中自发形成的反向胶团(反胶团),在一定条件下将水溶性蛋白质分子增溶进反胶团的极性核(水池)中,再创造条件将蛋白质抽提至另一水相,实现蛋白质的相转移,达到分离和提纯蛋白质的目的反胶团中的蛋白质分子受到周围水分子和表面活性剂极性头的保护,仍保持一定的活性,甚至表现出超活性比如程世贤等同就运用反胶团提取大豆中的蛋白质和豆油蛋白质的纯化蛋白质的一个主要特点是分子大,而且不同种类的蛋白质分子大小也不相等由此可以用凝胶过滤法,超滤法,盐析法,离心法及透析法等将蛋白质与其它小分子物质分离,也可将大小不同的蛋白质分离如顾有方等就是根据蛋白质的这种特性对血液中免疫球蛋白进行提取的根据蛋白质溶解度不同的分离方法蛋白质的溶解度受溶液的pH,离子强度,溶剂的电解质性质及温度等多种因素的影响在同一特定条件下,不同的蛋白质有不同的溶解度,达到分离的目的分以下三种方法:蛋白质的盐析,等电点沉淀法,低温有机溶剂沉淀法中性盐对蛋白质的溶解度有显着影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出,这种现象称盐析,将大量盐加到蛋白质溶液中,高浓度的盐离子(如硫酸铵的SO和NH)有很强的水化力,可夺取蛋白质分子的水化层,使之"失水",于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小,因而溶解度也最小,各种蛋白质的等电点有差别,可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使之沉淀,但此法很少单独使用,可与盐析法结合用用与水可混溶的有机溶剂,甲醇,乙醇或丙酮,可使多数蛋白质溶解度降低并析出,此法分辨力比盐析高,但蛋白质较易变性,应在低温下进行胡卫新等阿在室温下,采用盐析和等电点沉淀工艺分离除去提取液中的大豆蛋白质根据蛋白质带电性质进行分离蛋白质在不同pH环境中带电性质和电荷数量第卷第期许亚平等:蛋白质提纯研究进展不同,可分为电泳法,离子交换层析法各种蛋白质在同一pH条件下,因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开值得重视的是等电聚焦电泳,这是利用一种两性电解质作为载体,电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度,当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时,到达各自等电点的pH位置就停止,此法可用于分析和制备各种蛋白质离子交换剂有阳离子交换剂(如:羧甲基纤维素CM一纤维素)和阴离子交换剂(二乙氨基乙基纤维素当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时,带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上,随后用改变pH或离子强度办法将吸附的蛋白质洗脱下来翁瑜等的双向凝胶电泳比较三种常用蛋白质提取方法可以看出双向凝胶电泳的效果更好根据配体特异性的分离方法一亲和色谱法亲和层析法是分离蛋白质的一种极为有效的方法,它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来,而且纯度很高这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体(Lg~d)的分子能特异而非共价地结合其基本原理:蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在,每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质,因此蛋白质的分离,提纯和鉴定是生物化学中的重要的一部分,至今还没有单独或一套现成的方法能把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来,因此往往采取几种方法联合使用仝向荣等q通过离子交换,凝胶过滤,亲和层析及反向高效液相色谱操作,提取了棒纹牛蛭体内抗凝血蛋白展望蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂的混合物形式存在,每种类型的细胞都含有成千种不同的蛋白质蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务,到目前为止,还没有一个单独的或一套现成的方法能把任何一种蛋白质从复杂的混合物中提取出来,但对任何一种蛋白质都有可能选择一套适当的分离提纯程序来获取高纯度的制"d】蛋白质提纯的总目标是设法增加制品纯度或比活性,对纯化的要求是以合理的效率,速度,收率和纯度,将需要蛋白质从细胞的全部其他成分特别是不想要的杂蛋白中分离出来,同时仍保留有这种多肽的生物学活性和化学完整性【希望今后科学工作者们能够找出更多更好的方法来提纯蛋白质,使得对蛋白质的研究有更深更进一步的研究为人类对生命的探索奠定好基础,解决人类生命的重大问题参考文献:李凤英,崔蕊静,李春华葡萄籽蛋白质的提取工艺研究J中国油脂,,():李喜红,代红丽,魏安池酶法从脱脂米糠中提取蛋白质J粮油加工与食品机械,,:郭荣荣,潘思轶,王可兴碱法与酶法提取大米蛋白工艺及功能特性比较研究【J食品科学,,():王桃云,马红昌,刘江颖蓰草叶蛋白提取工艺的优化【D苏州科技学院(自然科学版),,():陈申如,张其标,倪辉酸法提取鲢鱼鱼肉蛋白质技术的研究【J海洋水产研究,,():程世贤,龚福忠,黄小凤,罗良荣反胶团提取大豆中的蛋白质和豆油【J食品科学,,():顾有方,刘艳慧,陈会良,刘德义免疫球蛋白分离提取方法及其应用的研究进展【J畜牧兽医科技信息,,:胡卫新,王晓磊,张洁大豆异黄酮提取条件和大豆蛋白质分离工艺研究J大豆科学,,():翁瑜,曾群力,姜槐,许正平双向凝胶电泳比较三种常用蛋白质提取方法【J中国生物化学与分子生物,,():o仝向荣,王德斌,马绍宾棒纹牛蛭体内抗凝血蛋白的提取D昆明师范高等专科学校,,():王洪新,胡昌云茶叶蛋白质提取及初步纯化研究【J食品工业科技,,():李殿宝从葵花脱脂粕中提取分离蛋白质工艺的研究【J辽宁师专,,():SALZETMAnticoagulantsandinhibitorsofplateletaggregationderivedfromleeches【JFEBSLetters,,:CHANGJYStabilityofHimdin,aThrombinspecificInhibitorJJbioChem,,():BASANOVAAV,BASKOVAIIP'etaVasculaPlateletandPlasmaHomeostasisRegulatorsfromBloodsuckingAnimals【JBiochemistry,,():第卷第期年月天津化工TianjinChemicalIndustryVoNoJu二氧化碳催化转化新进展刘葸莉(西~LEz研究院,陕西西安)摘要:本文介绍了近年来由CO制取甲醇,二甲醚,合成气,胺类等化学品的研究新进展并对CO研究发展方向进行初步探讨关键词:二氧化碳催化合成应用中图分类号:TQ文献标识码:A文章编号:()目前全世界产生的二氧化碳超过xlgt,除x~被植物吸收外,x~排放到大气中,如何有效地利用二氧化碳已成为广大科技工作者的奋斗目标人们利用CO主要有()co:与H反应生成高附加值的化学品()CO与CH反应生成合成气等()CO与HO反应生成烃,醇类燃料前两种已工业化,后一种技术上已取得突破性进展二氧化碳催化加氢CO在催化剂作用下与H反应可生成甲醇,二甲醚,低碳烯烃,低碳醇等小分子物质催化剂,反应温度,压力,空速,原料气配比等参数都会影响产物种类,收率合成甲醇CO加氢合成甲醇催化剂是在CO加氢制甲醇催化剂的基础上研发的目前选用的催化剂主要有铜基催化剂和贵金属催化剂,MoC,SnC等类型催化剂也有人研究Pruduikoyat】深入研究了铜基催化剂的催化原理,认为铜基催化剂表面的活性物种数目比决定着催化剂合成甲醇的活性Fierro等田用钯作助剂制备铜锌催化剂,钯和铜协同作用大大提高了甲醇产量丛昱等用共蒸馏法制备的超细CuZnOZrO:催化剂和工业甲醇催化剂CuZnOA,作对比实验超细CuZnOZrO催化剂在P=MPa,T=K,SV=h,,V(H):v(co)=条件下,甲醇的最大收率达到g(kgh),高于工业甲醇催化剂CuZnOA,姜忠义等采用Sigma公司提供的原料:甲酸氢酶(FDH),甲醛脱氢酶(FADH),乙醇脱氢酶(ADH)和点子供体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)制备酶催化剂,催化CO和H反应在条件T=K,P=KPa,pH=,甲醇的收率达到李桂英等研究Fe助剂对CuOA,甲醇催化剂的影响时发现,Fe助剂能改变CuOA,催化剂中Cu的分布,分散度和价态,增加铜物种的含量,提高催化剂的低温活性合成二甲醚二甲醚是一种绿色环保的气雾剂,致冷剂,重收稿日期:ResearchadvancesofpurifyproteinXUYanpin,LINJllIlyue(DepartmentofChemistry,JinggangshanCollege,~ang'xi~China)Abstract:Inthisarticle,themethodsandconditionsofproteinpreparationalediscussed,andthemethodsofpickuparediscussedthemethodsandinfluencefactorsoffractionationandextractionofproteinswereintroducedItmaygiveomehelptostudyonthepreparationandapplicationofproteinKeywords:proteinisolationpurification

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