2010版gmp实施指南(无菌)

2010版gmp实施指南(无菌) 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 14.6过滤除菌 本节旨在提供系统的方法对除菌过滤工艺进行选择和验证。 除菌过滤过程中的关键设备为除菌(级)过滤器，对其进行的具体确认和验证项目的相关原理和要求等，将在以下14.6.1~14.6.3中详细阐述。按照不同药品分类，需要、推荐、可选和评估后确定是否进行的确认和验证项目，总结为下表。 项目 应用于非最终灭菌产应用于可最终灭菌产品 品的除菌过滤 的过滤 每种型号除菌每种型号除菌级过推荐 推荐 级过滤器选型滤器的标准细菌截 的确认 留试验数据与完整 (由过滤器生性检测数值的关联 产商完成) 每种型号除菌级过推荐 推荐 滤器的溶出物 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 构成过滤器的各种推荐 推荐 材料的生物安全性 每批除菌级过每批除菌级过滤器推荐 推荐 滤器的确认 抽样进行细菌截留 (由过滤器生标准试验，并确认与 产商完成) 完整性检测数值关 联的持续有效 出厂前每支完整性推荐 推荐 检测 抽样进行滤出液质 量确认，例如:pH、 内毒素、总TOC和洁 净度 抽样进行湿热灭菌推荐 推荐 耐受测试 工艺验证 细菌截留 需要 可选 溶出物 需要 需要 化学兼容性 需要 可选 产品润湿的完整性 可选 可选 吸附 评估 评估 很多生产最终灭菌产品的企业，在最终灭菌前，为控制微生物污染水平，使用过滤器对最终灭菌前的产品进行过滤。此时，不论该企业采用了何种过滤器，包括精度(标称)为0.45μm的过滤器、0.2μm的微生物污染控制过滤器，甚至0.2μm除菌级过滤器，因为这些过滤器的使用目的都是在最终灭菌之前对微生物污染水平进行控制，而不是作为产品生产过程中最后一步的灭菌手段，对这些过滤器的工艺验证要求，低于非最终灭菌产品除菌过滤过程中所使用的除菌级过滤器。 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 14.6.1除菌级过滤器的验证/细菌截留 【法规要求】 《药品生产质量管理 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 》2010修订版: 附录1 无菌药品 第九十条 对可最终灭菌的产品不得以除菌过滤工艺替代最终灭菌工艺。如果药品不能在其最终包装容器中灭菌，可用0.22,m(更小或相同过滤效力)的除菌过滤器将药液滤入预先灭菌的容器内。由于除菌过滤器不能将病毒或支原体全部滤除，可采用热处理方法来弥补除菌过滤的不足。 第九十一条 与其它灭菌方法相比，除菌过滤的风险最大，因此，宜安装第二只已灭菌的除菌过滤器再过滤一次药液。最终的除菌过滤滤器应尽可能接近灌装点。 第九十三条 除菌过滤器使用后，必须采用适当的方法立即对其完整性进行检查并记录。常用的方法有起泡点试验、扩散流试验或压力保持试验。 过滤工艺应经过验证，验证中应确定过滤一定量药液所需时间及过滤器二侧的压力;任何明显偏离正常时间或压力的情况应有记录并进行调查，调查结果应归入批记录。 第九十四条 同一规格和型号的过滤器，应经过验证确定其使用时限。 编者理解:在这里法规要求的第一个要点是在采用除菌过滤方法时，首先确认采用的过滤器为“除菌级”的，即“除菌过滤器”。达到此要求后，除菌过滤法中的其它无菌保障措施才有意义。定义过滤器是否为除菌级，需要依据过滤器的微生物截留能力，并完成相关的标准方法确认和工艺验证。 而过滤药液所用的时间、流速、温度、滤出总量、过滤器二侧压力(压差)、药液对微生物的生存性的影响和过滤器的重复使用等情况，都是可能影响过滤器细菌截留能力的重要因素，需要在验证过程中考虑并确证。 【背景介绍】 除菌过滤是指除去流体中微生物的工艺过程，该过程不应对产品质量产生不良影响。包括液体和气体除菌过滤。药品生产中采用的除菌过滤膜的孔径一般不超过0.22um(或者0.2um，这两种标称没有区别)。 当膜过滤器在1960年代出现在市场上时，0.45um孔径的膜被认为是“除菌级”的液体过滤器，并被成功应用于注射剂的除菌过滤。这些过滤器采用黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)进行挑战确认。在1960年发布的论文中，美国FDA的Frances Bowman博士 462观察到经0.45um过滤器“除菌”过滤后的培养基被某种可以在10,10/cm挑战水平下穿透该孔径滤膜的微生物反复污染。这导致ASTM F-838标准的出台，该挑战水平成为验证液体 1除菌级过滤器的标准方法。 1 Committee D19. F838-05 Standand test Method for Determining Bacterial Retention of Membrane Filters Utilized for Liquid Filtration. American Society for Testing and Materials International (ASTM): 2005 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 因为缺乏工业界内的统一标准来衡量孔径，孔径的标称对预测微生物截留和比较不同生产商生产的过滤器产品没有实际的意义。因而，需要用微生物截留能力来定义除菌级过滤器。 27 通常，除菌级液体过滤器指在工艺条件下每cm有效过滤面积可以截留10CFU(colony forming unit, 集落/菌落形成单位)的缺陷假单胞菌(Brevundimonas diminuta, ATCC 19146)的过滤器。 【技术要求】 A. 除菌级过滤器的细菌截留验证 细菌挑战实验验证过滤器滤膜的级别并采用有代表性的挑战微生物证明其从某产品或该产品家族中完全去除微生物。除菌级过滤器的验证需要考虑两个主要因素: , 滤膜级别，使用可适用的标准化试验或类似的方法以细菌挑战的方式进行。 , 工艺验证，由过滤器的使用者或指派的实验设施(例如，过滤器的生产者或合同实 验室)，使用有代表性的微生物进行挑战，证明过滤器在生产条件下，可以完全去 除每个产品或产品家族中的微生物。应建立针对每个产品组的科学解释并可能需要 在实施验证前经合适的监管机构审查。 这两种过滤器测试理念是不能互换的，并应当被独立验证。这些测试的目的是为了证明过滤生产过程产生无菌的滤出液。 B. 影响细菌截留的因素 应对可能影响细菌截留的因素进行风险评估，包括但不限于: (1)过滤器源的因素，包括过滤器类型、结构、基础聚合物、表面改性化学、孔径分布和过滤膜的厚度等。 (2)工艺源的因素 生产工艺、产品或者料液对挑战微生物的生存性、理化形态的影响;实际微生物污染水平决定缺陷假单胞菌是否可以作为相关微生物;产品或者料液中的实际微生物污染水平(是否低于10CFU/100ml)影响过滤除菌工艺的 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 和效能;还应考虑潜在的因产品配方或工艺条件，影响微生物的细胞大小或其它生理和形态学特性，从而造成微生物穿透的情况。应考虑评估的工艺源因素: , 流体组分(配方、表面活性剂、添加剂) , 流体性质(pH值、粘度、渗透压，离子强度) , 工艺条件(时间、温度、压差、流速、灭菌方法和重复使用) , 产品、料液和生产环境中实际微生物污染的特点和水平 C. 气体除菌过滤器 对于气体除菌过滤器的细菌截留要求，尚没有统一的标准。但是，液体细菌挑战被认为是气体除菌过滤器的“最差条件”，因而，参照液体除菌级过滤器执行的细菌截留验证是被 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 广泛接受的。其它可以选择的方法，包括细菌(孢子)气溶胶挑战和噬菌体/病毒气溶胶挑战试验。 【实施指导】 本部分实施指导，均为针对液体过滤器的。下文的实例分析部分会介绍一个气体除菌过滤器参照执行的例子。 A. 细菌截留验证研究 细菌截留验证研究的目的是获得文件证据，证明在模拟工艺条件下，过滤过程可以持续去除悬浮于产品或替代流体中的高水平的标准细菌或相关微生物污染分离物。 研究的目的决定是使用膜片还是全尺寸工艺过滤器。如果研究的目的是验证特定膜材的细菌截留效能，那么使用小的测试膜片通常被认为是可以满足条件的。被用来确定工艺过滤器物理完整性的检测方法应当与细菌截留测试结果关联。 工艺时间和压差会影响细菌截留实验的结果。在完整的工艺时间进行细菌挑战实验可以对那些与时间有关的因素进行评估，这些因素包括过滤器兼容性，完整性的维持和发生时间依赖的穿透等。 细菌挑战实验验证过程中的压差应达到或超过工艺过程的最大压差和/或最大的工艺流速(在过滤器制造商的设计规范内)。在验证过程中同时模拟压差和流速可能是不可能的。在设计模型挑战条件时过滤器的使用者应该确认哪个参数与特定工艺的相关性更高，并形成基本解释以支持相关决定。 对膜过滤器进行产品细菌截留验证时需要考虑以下事项: , 应对过滤工艺进行一次彻底评估，包括溶剂性质(例如水基的、酸、碱、有机的)、 过滤时间、工艺压差、工艺流速、工艺温度和过滤器设计规范。 , 产品细菌截留验证研究应包括多个过滤膜批次(通常三个批次)。有些情况下，产 品性质被认为对过滤膜有攻击性，过滤器的确切数目和实验设计视工艺而定。 , 在用于细菌截留验证研究的三个批次中至少应有一个批次是进行预研究时或使用 前物理完整性测试时的数值通过但是接近(例如，10,之内)过滤器生产商提供的 合格规范限值的。 , 细菌截留验证研究中使用的过滤膜的物理完整性检测数值应包括在 实验报告 化学实验报告单总流体力学实验报告观察种子结构实验报告观察种子结构实验报告单观察种子的结构实验报告单 中。物 理完整性检测应使用已有规范值的水、产品或其它润湿流体来进行测试，并在进行 微生物挑战前完成。 , 如果细菌挑战实验后测试用微生物在任何过滤器的下游被回收到，那么就需要对此 进行调查。如果调查确认测试用微生物穿透完整性检测达标的过滤器，那么就应重 新考虑此种过滤器在这些工作条件下的适用性。 , 具有相同组分而只有浓度不同的同一族产品，可以用挑战极限浓度的方法进行验 证，替代性地接受中间的浓度。如果某一产品被确定为最差情况的代表，对此的解 释和数据需要和模型一起提供。 , 过滤器的重复使用对于制药过程来说通常是不实际的或者不被推荐的。然而，如果 除菌级过滤器被重复使用了，需要说明理由，重复使用的参数也需要经过验证。 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 B. 细菌截留验证研究——风险评估 不同等级的风险与过滤工艺参数是相联系的，有些与过滤前产品中的微生物繁殖有关，而另外一些与较高的细菌穿透过滤器的风险相关。见表2。 表 14-7 工艺风险评估因素 较高风险 因素 较低风险 较高水平、小的生物体 微生物污染水平 较低水平、大的生物体 较高 压差 较低 较高 流速 较低 促进生长的 产品 杀菌的，或含防腐剂的 室温或更高 温度 冷藏 较长 时间 较短 C. 挑战微生物选择标准 TM缺陷假单胞菌(B.diminuta)ATCC ?19146(历史上为P. diminuta)，被选择作为细菌挑战实验的微生物。如果使用了其它细菌，这些细菌必须小至可以挑战除菌级过滤器的截留能力，并可以模拟在产品中发现的最小微生物。相应地，替代挑战微生物可被用于验证研究，只要原有的过滤前微生物污染水平被发现是更相关的。如果可能，自有微生物污染水平应该被描述、计数和鉴别，因为这些微生物有穿透除菌级过滤器的潜在可能性。被分离的微生物形态也要考虑。 挑战微生物的尺寸需要通过穿透0.45微米孔径的膜来确认，这是每个挑战实验的阳性对照。在标准培养基条件下生长的缺陷假单胞菌(见下“培养基维护和挑战微生物制备”)在 7高挑战水平下(通常?10)会少量透过0.45微米滤膜。有些情况下，缺陷假单胞菌不一定是代表最差条件的模型。如果选用了不同的挑战微生物，需要提供文件解释。 D. 培养基维护和挑战微生物制备 ?TM缺陷假单胞菌ATCC19146可以冻干的形式从美国典型培养物中心(ATCC)或者本国的同等机构获得。在按照ATCC的规程复壮微生物后，可以按照微生物操作规范在适宜的培养基中冷藏或冷冻保存。需要建立用于挑战研究的工艺分离物的储存条件。 两种标准技术被公认适宜用于细菌挑战实验用缺陷假单胞菌的制备和维护。它们是SLB法和 FCP法(冷冻细胞浆法)。两种方法都被发现可有效生产适宜的缺陷假单胞菌悬液，缺陷假单胞菌的尺寸大约为直径0.3-0.4微米，长度0.6-1.0微米。 替代的培养基和培养方法也可能同样有效制备缺陷假单胞菌，只要这些方法可以生产出单一的，分散的细胞，尺寸适宜穿过0.45微米孔径的膜过滤器。替代培养法需要被验证。库存的细菌挑战培养物的聚集情况可用光学显微镜检查。如果观察到聚集现象，将保存培养物置于超生波清洗槽的冷水中10分钟是可将团聚物分散的一个方法。水浴的气穴作用可将细菌细胞分散，不影响细胞活性。应使用光学显微镜、活性计数和0.45微米孔径对照过滤器的下游回收来确认分散效果。 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 细菌挑战实验浓度应保证在目标工艺时间里提供始终如一的挑战，挑战的水平达到基于 7 过滤器表面积至少10CFU/cm?。当计算细菌挑战浓度时，应综合考虑诸如流速、时间和压差等操作参数。 7大于等于10/cm?的细菌挑战水平就是对除菌级过滤器的要求(历史上用0.2微米孔径来标称的过滤器)。这一水平来源于Bowman的观察和她的建议，即缺陷假单胞菌在大于46 7 210,10CFU/ cm? 细菌挑战水平时可穿透0.45微米标称的膜，应当用10CFU/cm缺陷假单胞菌来证明0.2微米标称的膜为“除菌级”，以确保有足够的灵敏度发现超尺寸孔。细菌挑 2战浓度(CFU/ml)不应与细菌挑战水平(CFU/cm)相混淆。 缺陷假单胞菌悬液的生存力和滴度应使用合适的回收培养基来确认，例如大豆酪蛋白消化肉汤或者米勒辛顿琼脂。当进行过滤器挑战时，细菌挑战菌悬液的活力滴度应当在挑战前和挑战后立刻被确定。上游细菌滴度应使用被认可的微生物学测试方法确认。应使用同样的培养基确认任何在下游回收的缺陷假单胞菌。 E. 测试程序和 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 形成 应使用标准方法确证膜过滤器的微生物截留能力。然而，对于某种产品来说，仅证明缺陷假单胞菌在水溶液中被截留，而不是在特定产品中，不足以验证此产品的除菌过滤工艺。 为了确定正确的挑战测试方法，应将测试微生物直接接种在承载流体(产品或替代品)中以证明其生存性。微生物应以与挑战实验中使用的同等方式培养，以保留其生物形态特征和生理特征。用于生存性研究的测试暴露时间应该等于或超过实际工艺过滤时间。 当测试微生物在产品中的生存性已经完成测试，就应该形成挑战方法和方案了。细菌挑战实验的条件应模拟实际生产工艺。既然细菌挑战实验通常都在实验室里进行，那么方法的规模也应相应调整。通量应调整到每单位面积的流速，表示为基于滤芯表面积的形式 2(ml/min)/cm。如果过滤过程按压差控制，则挑战实验压差至少等同于最大工艺压差。如果制订方案过程中遇到关于测试方法可接受性的问题，则建议联系相关管理机构以获取指导。图1列出了在为特定过滤器和产品/工艺组合选择合适的验证策略时需要考虑的关键步骤。 (1)非杀菌性的工艺和流体 直接在产品中接种测试微生物是测试除菌级过滤器微生物截留能力的首选方法。当产品和工艺流体被证明在产品和工艺条件下没有杀菌效力的时候，这样是可行的。在这些工艺中，应使用足够浓度的挑战微生物在产品中接种，而且要在实际工艺条件下，包括时间、压差、流速和其它关键变量(例如温度)，应尽量减少稀释，以避免不必要的产品改变。 (2)抑菌的/杀菌的/非分散的挑战流体 在杀菌性的产品中进行细菌截留测试，使得与验证相关的一些问题更难回答，例如:产品对过滤器有什么影响，产品对其中的生物菌落有什么影响。在杀菌性产品中或是在不利于微生物活性的条件(例如，温度上升)下进行的细菌截留测试不一定能得到正确的结果。 为了评估产品/工艺对过滤器的潜在影响，可以使用产品和实际的工艺条件，包括流速、压差、温度和时间，对过滤器进行预处理。这种预处理可在一个闭路系统中将产品循环通过测试过滤器或者单路通过测试过滤器，接着对滤芯进行细菌挑战。(具体方法见下文实例分析部分测试方法修改的例子，这些修改被用于适应这种细菌挑战测试。) 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 F. 滤出液分析 对全部挑战滤出液的分析对确认除菌级过滤器截留细菌挑战的能力是必要的。可以从安装在测试过滤器下游的合适的分析过滤器或膜片上直接通过，或者先收集滤出液在无菌容器中然后再用分析膜片过滤，两种方法均可。通常，使用0.45微米或除菌级膜片来收集缺陷假单胞菌菌或其它微生物污染挑战细菌。安装分析过滤器不应影响测试过滤器的预定压差。对滤出液部分取样的作法不足以验证除菌过滤，因为一小部分细菌可能已经穿过过滤器，存在于未取样和分析的滤出液中。 G. 结果判读 在阳性对照有效的情况下，三支测试过滤器都没有检测到挑战细菌的透过，则达到除菌级过滤器的接受标准。如果有一支被发现细菌穿过，但没有确认是什么原因引起的，那么在调查和风险评估后，可重新测试(例如，从失败膜所属批次中选三支过滤器)。如果可以找到导致测试失败的确定原因，那么疑问批次的过滤器应被重新检测。 H. 连续过滤 两个或多个过滤器在一起使用，以达到: , 确保滤出液是无菌的。 , 至少一个过滤器通过完整性测试。 , 到达最后一级过滤器的细菌浓度小于10 CFU/100ml。 这样的组合中，最后的最接近滤出液的过滤器，称为首要过滤器，另外一个或多个，为冗余过滤器，是对除菌过滤工艺的再次保障。 当怀疑发生细菌穿过除菌级过滤器的情况时，可以使用串联在一起的两个或多个过滤器滤器，实际为两个或者多个过滤器是作为一个除菌过滤单元在使用。在这样的工艺条件下，所有过滤器均要达到完整性测试接受标准。这种情况下的两个或多个过滤器的总称为组合过滤器。 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 图 14-20 除菌过滤工艺验证策略决策树 确定生产工艺建立过滤要求 挑选过滤器 过滤器溶出物验证微生物截留验证物理参数验证 制成与产品特性相同的无杀菌性的替确认和记录在工艺条件代液，因为高毒性和有限制的产品的下挑战微生物的生存性使用受到限制。 挑战微生物在产品和工在工艺条件下挑战微生物性受艺条件下存活到影响或不能存活 直接方法修改用产品预处理过滤器后在工艺条件下直接在产方法进行微生物挑战，品中接种挑战微生物采用以下方法中的一种或几种的组合测试 修改配方，更换挑战调整pH值，在挑战微生物微生物使用修改工艺去除杀菌成分存活的时间段从制剂或者调整温度或使用产品的内使用产品环境中分离替代液出来的细菌 I. 再验证 经过验证被用于特定除菌过滤工艺的除菌过滤器，在工艺条件发生改变或者过滤器制造方面发生改变是，需要进行再验证。包括但不限于下列情况，需要考虑进行再验证: , 单位面积的流速高于已验证的参数 , 过滤压差超过被验证参数 , 暴露时间超过被验证的时间 , 过滤面积不变的情况下提高过滤量 , 过滤温度改变 , 产品配方改变，包括浓度、pH或电导率 , 过滤器的灭菌程序改变 , 改变过滤器的制造商，或者过滤器的生产者改变了过滤膜的配方以及过滤器的其它 材料 结构性 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 【实例分析】 A. 修改的方法 如前述，如果在工艺条件下挑战微生物不能存活或者生存力受到影响，在用产品预处理过滤器后，采用修改的方法进行测试。下面给出一些方法修改的例子，实际应用时，可采用一种或几种进行组合测试。 应当认识到，如果有良好的科学解释，其它方式的方法修改也可能是适合的。 (1)减少暴露时间 有些情况下，挑战微生物不一定在整个工艺时间下都能在产品中存活。在挑战实验预处理阶段接近尾声的时候直接用足够浓度(见前文实施指导“D. 培养基维护和挑战微生物制备”)的挑战微生物接种产品。有一点是很重要的，将一个0.45微米阳性对照过滤器与测试过滤器平行运行，以确证微生物的尺寸和存活。 另一个办法是将挑战微生物在静态状态下置于挑战流体中。将挑战微生物以工艺温度暴露在产品中，并在模拟工艺条件下用产品循环对过滤器进行预处理后，就可在最差条件(压差和流速)下挑战过滤器了。挑战时间应被缩减，以确保在实际暴露、挑战和回收期间挑战微生物存活。0.45微米阳性对照过滤器与测试过滤器平行运行，以确认微生物的存活。 (2)修改测试方法的参数 在挑战有杀菌能力的产品时，测试方法参数修改是有用的，因为这种方法可以只改变一个工艺变量，例如温度。使用这种方式以维持产品和细菌的相互反应。这种方法不能解决所有可能的工艺/产品/挑战微生物的交互反应，但是可以实现标准挑战微生物的运用。在实际工艺条件下使用产品对过滤器进行预处理后，工艺中的杀菌部分如温度被修改了，细菌挑战可以进行了。应使用足够浓度的细菌挑战微生物直接接种产品。(见前文实施指导“D. 培养基维护和挑战微生物制备”) (3)修改测试产品配方 另一种修改的方法在用产品预处理滤芯后，将产品的杀菌成分移除。这也许很容易，调节pH值至产品非杀菌的范围，去除或者稀释杀菌成分或使用替代流体。 经修改的配方应在实际产品工艺条件下使用足够浓度的挑战微生物直接接种(见前文实施指导“D.培养基维护和挑战微生物制备”)杀菌成分应被去除到不干扰挑战微生物的水平。 (4)使用有耐受性的自身微生物污染分离物 尽管可能在正常工艺条件下，某种产品对缺陷假单胞菌有杀灭能力，但其它微生物可能在相同条件下可以生存。另外一种对杀菌性产品进行细菌挑战的方法是使用“自身污染微生物”。自身污染微生物由分离自制造环境或产品制剂的细菌组成，被证实可在实际生产工艺条件下在产品制剂中存活。 自有的细菌在产品中应繁殖或保持均衡，以确保他们的生物形态和生理学特性在工艺分离物中有代表性。应使用最小的或最坏情况下的自身微生物。关于挑战微生物制备与使用的更多讨论请见前文实施指导 “D.培养基维护和挑战微生物制备”。 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 如果较小的微生物确认在产品中存在，那么这些微生物或某一合适的模式微生物可被用来挑战测试过滤器。例如使用在恶劣条件下生长的皮氏罗尔斯顿氏菌(Ralstonia pickettii)。通常，这些挑战是在缺陷假单胞菌挑战之外进行的。 B. 气体过滤器的液体微生物挑战试验 挑战微生物和挑战水平，与液体除菌级过滤器相同。但是，针对气体过滤器进行液体细菌挑战实验，需要注意以下几点: , 挑战前完整性检测。可以使用的方法包括起泡点、扩散/前进流(压力保持/衰减) 和水侵入。方法参见14.6.2完整性检测。 , 因为气体过滤器的疏水特性，在进行水基的微生物挑战前，需要用低表面张力的液 体进行引导润湿(例如，25,体积比的叔丁醇水溶液或者60,异丙醇水溶液)。 , 挑战之前，去除醇溶液，以防止影响挑战试验。 , 挑战实验，同液体过滤器。参照前文实施指导。 , 挑战后完整性检测。 确证过滤器没有在挑战过程中损坏。此时，与挑战前不同， 不再可以选用水侵入方法，或者直接用水进行其它检测。因为仍然存活或者不再存 活的污染微生物都对过滤器的疏水性有影响，另外，任何仍然润湿的过滤器材质都 可能影响实验结果。可以选择挑战前完整性实验所使用的溶液，进行起泡点或者扩 散/前进流测试。 , 滤出液分析，同液体过滤器。参照前文实施指导。 , 结果判读。对除菌级的气体过滤器，尚没有统一的标准。但是，现在市场上获得的72除菌级气体过滤器，有的已经可以达到液体除菌级过滤器的标准。即大于10/cm 有效过滤面积的挑战微生物截留(通常为B. diminuta)。 14.6.2完整性检测 【法规要求】 《药品生产质量管理规范》2010修订版: 附录1 无菌药品 第四十三条 进入无菌生产区的生产用气体(不包括可燃性气体)均应经过除菌过滤。用于无菌生产的公用介质(如压缩空气、氮气)的除菌过滤器和呼吸过滤器的完整性应定期检查。 第九十三条 除菌过滤器使用后，必须采用适当的方法立即对其完整性进行检查并记录。常用的方法有起泡点试验、扩散流试验或压力保持试验。 过滤工艺应经过验证，验证中应确定过滤一定量药液所需时间及过滤器二侧的压力;任何明显偏离正常时间或压力的情况应有记录并进行调查，调查结果应归入批记录。 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 编者理解:细菌截留测试是一种破坏性试验，会对过滤器和生产环境造成污染，不能用来确证用于生产的过滤器的性能。法规要求在这里指出了日常生产中用来确证过滤器性能的常规方法和注意事项。 【背景介绍】 细菌截留测试是一种破坏性试验，不能用来证明将用于生产的过滤器的完整性。非破坏性物理性完整性测试的主要目的，是在不破坏过滤器的前提下确定是否存在可能危及过滤器截留能力的缺陷。除此之外，完整性测试在相关工艺条件下建立测试过滤器与已被验证的细菌挑战过的过滤器的同一性。该同一性的建立，是通过完整性试验结果与细菌截留测试相关联来达成的。 过滤器制造商通过对一系列具有不同完整性测试值的过滤器进行细菌挑战实验，直至观察到某些过滤器发生细菌透过，据此来为该类型的过滤器设定物理完整性检测的限值。 在完整性测试中，要在一定的压力范围内评估润湿的滤膜的气体流动特性。在整个过滤器的滤膜被充分润湿后，在膜的上游侧引入低压气体，毛细管作用力会阻止水从小孔中被排出。当在过滤器上游加压时，气体会溶解入润湿液体，扩散穿过润湿的膜，在膜的下游，即大气压下，被释放。当施加于上游侧的压力升高时，扩散也加剧。测量透过膜的气体量，就得到了此种膜过滤器的膜特性曲线。 显示在图14,21中的是在润湿膜下游测量到的空气流，为对类似孔隙率和孔径分布但是不同面积的膜进行的比较。这些曲线的三个特征部分将作为膜过滤器完整性测试的基础: , 压力轴低端的线性部分表示扩散气流通过膜上有液体保持的孔。 , 随压力升高，出现一个特征的弯曲并随后出现另外一段线性部分。这个弯曲表示从 扩散流到大量气流或粘性流的转变。 Flow (ml/min), 当超过最大的那些孔的起泡点时发生大量气流。在此点之上，气流大部分由通过开 20放孔的自由气流形成;小部分由通过仍然被润湿的膜孔的扩散流形成。 18图 14-21 膜特征曲线 1610”滤芯(5000 142 mm 膜片 cm?EFA)(100 cm?EFA)14 12 10增 大量气流加 8的 流起泡点区 6(mil/min)量 4 扩散流2 0 2500300035004000 增加的压力Pressure (mbar) 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 【技术要求】 物理完整性测试只有当其与特定过滤器的截留特性相关时才有意义。验证过滤器的截留能力需要用细菌挑战实验来检测微生物的透过。因为这些测试不能在拟用于生产的过滤器上进行，所以在实验室中将其与非破坏性的物理完整性检测关联。 通过在标准测试条件下挑战某种滤膜逐步―接近合格限值‖的样品并分析细菌透过结果，可以评估其截留能力。通常观察到的截留模式将用来界定物理完整性测试值，即以某个完整性测试限为限值，对合格范围内过滤器将不会观察到细菌穿过。通过这个测试建立的完整性测试值就联系到了滤出液的无菌性。 通常用于确认除菌级过滤器完整性的非破坏性实验包括:起泡点，扩散/前进流和压力保持/衰减(一种扩散/前进流的变化形式)。这些检测方法对亲水和疏水膜过滤器均适用，并可以手动进行或使用自动完整性测试仪。每一种完整性测试方法都有其优点和局限。 起泡点实验与膜中存在的那些最大孔的有效直径有关，这些孔，与膜的厚度和孔的迂曲度一起直接影响膜的截留特性。起泡点的分辨力随膜面积的增大而降低，因为低于起泡点的扩散流气流趋向于使其不明显。 然而扩散与孔径没有显示出直接的关系，扩散/前进流测试提供了一个量化的测试方法，其中最大流量限制值是由过滤器制造商在一个低于最小起泡点值的指定测试压力下建立的。小面积膜过滤器的扩散流较小，限制了扩散/前进流测试的应用。 但通常，由于扩散流检测为定量检测方法，对较大过滤膜面积仍然适用，使用范围更广。 对于多个点的测试使得气流曲线的绘制从低压下的扩散延伸到升压后的起泡点区。这些测试在表征孔径分布方面结合了起泡点和单点扩散/前进流完整性测试的优点。 对于气体除菌级过滤器，除可以采用低表面张力溶液润湿后的起泡点和扩散/前进流检测外，还可以通过水侵入实验来进行完整性检测。水侵入，是在一定压力下，测量干燥疏水性滤膜对水润湿的抵抗力。水侵入方法的优点是不需要引入醇等低张溶液和过滤膜始终保持干燥。某些应用中，也可以采用气溶胶方法对气体除菌过滤器进行完整性检测。 【实施指导】 A. 验证测试 验证研究建立了完整性测试结果与细菌截留之间的联系，并作为建立成品过滤器用前和用后完整性测试适合参数的基础。液体过滤器的多点扩散/前进流测量在这方面是有作用的，因为它们揭示了扩散/前进流曲线的斜率、起泡点和其它任何可能由于不同的润湿流体的影响(例如水、产品 、替代液)而引起的偏移。在建立产品润湿完整性测试参数时经常用到这种方法。一旦为这种过滤器类型建立了这种关系，单一成品过滤器的可靠的单点完整性测试就成为可能。 B. 滤过流体无菌性保证 在使用前和使用后对除菌级成品过滤器进行完整性测试是无菌保证的一个至关重要的因素。然而，完整性测试本身并不足以确保滤过流体的无菌性。其它因素也应满足: , 过滤器的生产商具备质量控制和质量保证系统以确保过滤膜和成品过滤器的质量 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 和一致性。 , 过滤器使用者应进行验证研究以确证产品、工艺条件和除菌级过滤器达到细菌挑战 测试的要求。 , 过滤器使用者应确保产品/过程控制(如，操作参数，微生物污染水平控制)到位。 一旦满足这些要素，完整性测试的局限性就会被降至最低，只要是适合的，任何上述完整性测试方法都可以被采用。确保所有要素被满足，而且是持续满足是过滤器使用者的责任。 C. 产品润湿完整性测试 对于液体除菌过滤器，有些情况下，产品是最合适的润湿流体。使用产品润湿的完整性测试结果应与在同一种膜上使用滤芯制造商推荐的参考润湿流体得到的测试数据相对比，来确定使用产品润湿的规范。这个规范然后非直接地关联到滤膜的细菌截留能力。 产品润湿完整性数值和参考流体润湿完整性数值之间的不同是由两者在测试气体的溶解性、扩散常数和表面张力上的不同引起的。 按比例缩小的研究只是验证的第一部分;第二部分验证由获取另外的正在进行的产品特征数据组成。这一部分可能包括定期测量产品表面张力，并将其与现有标准相比较，或是定期测量起泡点比。在有些应用中，应避免工艺流体与润湿流体的混合，因为产品的残留物或是两种液体的相互反应可能会阻碍滤膜完全和稳定的润湿。 产品润湿的完整性检测方法和计算公式见下文实例分析部分的讨论。 D. 自动完整性测试仪器 有些手动完整性测试方法需要下游操作，可能危害系统的无菌性。自动完整性测试仪器从滤芯的上游非无菌侧进行完整性测试，回避了下游污染的风险。使用这些仪器可保证在完整性测试过程中无菌性不受影响，相对手动测试可能有几点优势，包括: , 通过压力传感器和流量计的使用使灵敏度提高 , 最小化操作者可变性 , 结果的一致性 , 自动记录结果 , 软件安全性 , 确保系统无菌性(仅上游连接) 自动完整性测试仪，其硬件和软件，都需要经过验证，见下文―F. 完整性测试装置的验证‖的描述。 E. 大型、多芯滤壳中过滤器的完整性测试 扩散/前进流或起泡点测试可用来测试大型或小的过滤器组合件。然而发生在较大的组合件(如，,30英寸过滤器或多芯的)上的累积扩散流增加的数量会降低这些完整性测试的实际可应用性。有多种完整性测试方法(例如，工程测试系统或扩散检测)可用来验证特定工艺。 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 一种方法是得到一个组合件特异的值来测试多个滤芯，该值低于线性累加的极限值。需要进行风险评估证明此方法有效。如果组合件的扩散气流超过正确的限值，这些过滤器可被分开测试确证其完整性。 以下是起泡点和扩散/前进流测试需要考虑的要点: , 在对多芯组件测试最小泡点时，总扩散流可能会掩饰了其中某支处于临界的不完整 性的滤芯组件的泡点拐点。观察到的/测量到的此组件的起泡点也许会高于具有最 低起泡点滤芯的起泡点，这可能会导致错误的通过判定，不能发现不完整的过滤器。 , 多芯组件的在指定的测试压力下，总气体流量也可能掩盖了其中某一支不完整过滤 芯的偏高的气体流量。总扩散流量仍可能低于以组件中滤芯数目乘以单支滤芯的最 大扩散流得到的该组件的最大扩散流限值(线性叠加极限值)。这可能导致错误的 通过判定，不能发现不完整的过滤器。 F. 完整性测试装置的确认 完整性测试装置的确认与确认其它工艺测试设备类似。完整性测试装置的确认从该装置的研发开始，通常由其制造商进行。设计确认和装置研发文件由制造商准备。这些文件可能包括在过滤器使用者验证文件包中。运行确认应该包括装置的主要功能;然而，运行确认不一定能涵盖功能和设置的所有可能的组合。因此风险评估应该包括主要功能，例如: , 作为装置主要功能的试验程序 , 错误条件的探查及出错信息 , 数据处理，正确的数据输入和输出以及避免错误的选项 , 测试方法本身的验证(准确度和限度) 典型的验证工作可能包括: , 软件评估-测试参数、测试方法、仪器编程和测试 , 仪器灵敏度评估 , 仪器启动 , 仪器校准 , 进行测试 , 完整性测试性能评定(起泡点、扩散/前进流、压力保持) , 其它功能的测试(体积测定、错误模式、无效输入拒绝) , 测试打印输出评估 , 计算机软件评估 , 密码保护 , 外围功能评定日期/时钟/记忆存储/清洁 G. 什么时候需要对除菌级过滤器进行完整性测试 只要过滤器被用于除菌，完整性测试就应进行(见图14,22)。在线测试还是离线测试过滤器由实际工艺需要决定。过滤前还是过滤后进行完整性测试的目的不同。 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 图 14-22 完整性测试可选项 完整性测试 使用前使用后 灭菌前灭菌后 滤前完整性测试模拟细菌截留研究的测试状况，得到的测试值与那些于研究中得到的完整性数据相关联。滤前完整性测试可在过滤器灭菌前进行，在灭菌后进行更好。灭菌前的测试会确认正确精度的完整过滤器已经被正确安装在滤壳中了。灭菌后完整性测试提供与灭菌前测试相同的信息，而且更能说明滤芯是否在灭菌过程中被损坏。当进行灭菌后完整性测试时，需要采取措施确保系统的下游保持无菌。 滤后完整性测试可以发现过滤器在过滤过程中已发生的渗漏或穿孔。滤芯完整性测试值受两方面变化影响，一方面是在过滤过程中由于大量颗粒被捕捉而导致的孔隙率变化，另一方面是由于大孔被堵塞后的明显的起泡点变化。这些改变会在工艺过程中出现严重堵塞和流量衰减时发生。完整性测试值也可能受到过滤器润湿特性变化的影响。如果发生大量孔被堵塞或大孔被阻塞的情况时，了解滤前完整性测试值是十分重要的，以确定这种现象可能产生的影响，如果有任何影响的话。显著的通量衰减或为了维持流量造成的压力上升都能证明这些变化。因为滤芯孔隙率的显著变化，或者大孔的堵塞可能会对使用后完整性检测产生“正向”影响，而掩饰膜的缺陷。并且，如果该缺陷在过滤前就存在，可能会导致滤出液非无菌。孔隙率降低和大孔堵塞的迹象会分别被扩散流的降低和起泡点的上升所证实。 过滤前后进行完整性检测需要注意的事项，见下文实例分析部分的讨论。 H. 连续过滤 如果某种过滤器对特定产品的除菌性能已经被验证过，那么这个单独的除菌过滤器必须令人满意地通过使用后完整性测试。在那些工艺中，如果组合过滤器是工艺要求并且它们对特定产品的除菌性能已经被验证过，那么这个过滤器列被看作为一个除菌单元并且其中所有除菌级过滤器均必须令人满意地通过使用后完整性测试。确定系列中任何过滤器的使用前灭菌后完整性可能会有困难，因为可能会危及第一个过滤器的无菌下游侧。过滤器制造商已经开发出不同的方法以处理这个情况，能提供相应建议。 在过滤器列中增加一个除菌级过滤器以再次确保不会因第一位的除菌级过滤器可能失效而导致产品损失，除非首要过滤器不能通过测试，否则增加的过滤器不需要进行过滤后完整性测试。如果发生首要过滤器不能通过测试的情况，第二个过滤器或冗余的过滤器必须令人满意地通过使用后完整性测试。(注:过滤器列中的首要过滤器应该是系列中的最后一个。) 出于工艺要求，需要对组合在一起的过滤器进行完整性测试(如:两个过滤器被连接在一起进行灭菌)的，每一个过滤器均需要单独进行测试。需要特别注意维持两个过滤器间通路的无菌性。包括对通过第一个过滤器的气体进行除菌过滤后再导气到第二个过滤器进行完 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 整性检测。为了测试第二个过滤器，需要在第一个和第二个过滤器间装一个阀门。关上阀门可将第一个过滤器与第二个过滤器隔开。将完整性测试主机接到第二个滤壳的完整性测试口上(将测试第一个滤壳时打开的排气阀关闭)，按常规方法测试第二个过滤器。如果使用这种方法，所有步骤都应当为无菌操作，用于测试的气体应被过滤除菌以避免污染两个滤芯间的连接段。在灭菌过程中所有阀门应完全打开以允许蒸汽气穿过。 I. 风险评估注意事项与再验证 经过验证被用于特定除菌过滤工艺的除菌过滤器，在产品、工艺条件发生改变或者过滤器制造方面发生改变时，需要对过滤器的完整性进行风险评估，必要时应进行再验证。风险评估考虑要点包括但不限于: , 同一产品或者同一产品家族的产品，表面张力数值可能发生的变化(如，活性成分 的浓度为一个范围而不是固定数值的情况，表面活性剂浓度变化，有机溶剂含量改 变等)。 , 工艺过程中，是否经常对照完整性检测数值与工艺下游的无菌检测结果，如果发现 有无菌检测的阳性结果，应当重新评估工艺验证的有效性。 , 过滤压差超过被验证参数 , 过滤面积不变的情况下提高过滤量 , 单位面积的流速超过验证参数 , 产品配方改变，包括浓度、pH或电导率 , 过滤器的灭菌程序改变 , 改变过滤器的制造商，或者过滤器的生产者改变了过滤膜的配方 【实例分析】 A. 液体过滤器产品润湿完整性测试方案 目的:在指定的温度下，测定经特定产品润湿的过滤器的前进流、压力保持或起泡点限值。 方法:通过产品润湿的试验数据和参比溶液润湿的相应参数来计算产品润湿过滤器的完整性检测参数，包括前进流限值、检测压力以及最小起泡点。 步骤: , 通过前进流图谱，测定参比溶液和产品润湿的过滤器的气体扩散特性。前进流图谱 由在逐步增加的压力下测定完全润湿滤膜的一系列气流速度组成。计算出各图谱中 从扩散气流向大量气流转变的压力值(称为“KL压力”)。 , 产品润湿过滤器的KL压力与参比溶液润湿过滤器的KL压力之比值，为“测试压 力因子”。产品润湿完整性的检测压力，由参比溶液润湿过滤器的检测压力与“测 试压力因子”的乘积获得。(在产品含有表面活性剂成分的情况下，测试压力可能 需要通过产品与参比溶液表面张力的比值来获得。) , 通过类似于计算前进流检测压力的方法用参比值来计算试验溶液润湿过滤器的最 小起泡点。 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 , 通过前进流图谱计算得到的产品与参比溶液扩散流的比值，即“前进流因子”。产 品润湿前进流的限值是由参比溶液润湿过滤器的前进流限值与测试压力因子以及 前进流因子三者的乘积获得。 结论:参比溶液润湿的完整性测试值已经与参比溶液为载体流体的过滤器的微生物截留能力结果进行了关联。所以通过上述实验过程得到的产品润湿完整性检测参数，与参比溶液的细菌截留测试结果进行了间接关联。在工艺验证即实际产品和工艺条件下的微生物截留试验的基础上，过滤器使用者可以使用本实验结果作为实际生产中日常单点完整性检测的参数。 B. 完整性检测注意事项 (1)使用前完整性测试注意事项 在使用后进行完整性测试外，可进行使用前完整性测试，在灭菌前或灭菌后，如图14,22所描述。当滤芯装在它的工艺滤壳中(在线)时对其进行测试是第一选择。然而，也有因工艺要求而需要离线测试的情况。灭菌前完整性测试可证明滤芯已被正确安装了，使用前是完整的。也许需要进行风险评估以确认它的效用。 如果在灭菌后进行完整性测试，需要特别留意不要危及无菌性。测试前，应使用流体冲洗过滤器以将其润湿。穿过过滤器的润湿流体应在无菌条件下被收集。在滤芯上游侧加压和测量，被测试的滤芯作为无菌的屏障。 对于系列过滤器按照方式而言，第一个过滤器应在第一步被润湿(润湿流体在透过第一个过滤器后被收集)和测试。如果这个滤芯没有通过测试，就不得不测试第二个过滤器。这将变得更加复杂，因为两个过滤器之间的空间需要保持无菌(测试气体必须是无菌的)。如果通过第一个过滤器测试第二个过滤器，第一个过滤器需要允许自由气流通过以避免影响测试(需要超过起泡点以将水从大孔中排出去)。 完整性测试是基于过膜压差的;因此，下游应通向大气。如果不能，下游侧空间应足够大以避免压力上升，或者下游侧的压力应受控制，如果压力显著上升就导致测试中途失败。 (2)过滤后完整性测试注意事项 滤后完整性测试应在过滤后立即进行。液体产品的残留物不应在膜表面干置，如果可能，应将其去除(使用适当的流体进行使用后冲洗)。如果做不到这一点，过滤器应当在诸如冷藏的条件下储存，以避免微生物生长。如果过滤器在完整性测试前冷藏过，应让其回复到室温状态，然后应尽快进行测试。过滤器不应被丢弃直到完成完整性测试，直到测试结果被评估。储存条件和期限应被验证以确保不会对过滤器的完整性有负面影响。 C. 气体过滤器的水侵入测试 水侵入实验背后的原理为:在低压下，疏水性过滤膜会阻止水的通过。在低于水突破(水被压通过)压力下，少量但是可以测量的水的流量会发生，类似于过滤膜被润湿后的扩散流。 在实际操作中，水侵入检测是在低于水突破压力下进行的。因为水的流量低和需要在下游进行检测，手动的操作方法是非常不实际的。通常用自动检测装置，通过监测实验用气体流量而间接换算为通过的水的流量而进行，在完成检测后，试验用水被从滤壳中导出。如果需要，过滤装置也可以被通气吹干。 D. 液体过滤器完整性检测失败分析/故障查找 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 如果一个除菌过滤器通不过完整性测试，有可能是损坏了，但还有其他可能导致失败的原因，这包括组装的不正确(密封不严)和润湿不完全。过滤器失败调查和再次测试步骤应被记录下来。 为了区分过滤器损坏和可能的测试问题，或是人为因素，应采取以下核实步骤: , 选择了合适的完整性测试方法 , 使用了正确的测试参数 , 使用了正确的润湿流体和润湿程序 , 测试系统无泄漏 *, 过滤组件的温度在测试过程中保持稳定并处于规范内(例如:绝热效应) , 设备已被正确校准 , 测试装置已被正确组装并运行正常 , 安装了正确的滤芯 为了证明纠正措施是有作用的，应采取以下重复测试步骤。 , 根据规范要求重新润湿滤芯，并重复测试(见图14,23第一步) 如果滤芯完整性测试再次失败，可使用以下步骤: , 应用更强力的润湿条件，增加冲洗的体积/时间，增加压差和/或应用背压(见图14 ,23第二步) 如果滤芯完整性测试再次失败，可使用以下步骤: , 使用低表面张力的参考流体中进行完整性测试，以确定滤芯可润湿性变化与滤芯完 整性无关(见图14,23第三步) , 如果使用参考流体过滤器不能通过测试，则过滤器不能通过测试。 如果过滤器在上述失败分析中任何一点通过完整性测试的话，那么该滤芯可被视为完整的，能够生产无菌的流出液。图14,23提供了一个决策树的例子，可用于评估完整性测试失败。 (1)对润湿不充分导致的失败的分析 过滤器完整性测试失败通常是由于滤芯的润湿不充分引起的。润湿不充分可能是由过滤器冲洗不充分，没有浸湿所有的孔，或是过滤器吸附了疏水性的污染物，或是其它配方组分改变了滤膜的表面润湿特性。润湿特性的改变可能会影响完整性测试表现。例如:管道材料可能会进入产品流中，被滤膜吸附，影响了膜的润湿性质，从而导致完整性测试失败。 为了获得合适的完整性测试结果，过滤器的多孔结构应被完全润湿，因为完整性测试方法的物理本质依靠的是气体流穿过润湿液体层。滤膜的润湿会受以下因素影响: , 膜聚合物:有些聚合物比其它种类容易润湿，依赖于膜材的临界表面张力。 *绝热效应，是指测试气体当其进入滤壳时快速扩张，可能导致冷却效应，造成滤壳内气体的压缩。这个绝热效应可能因为扩散/前进流在扩张期内持续下降，超过测试时间，导致假性完整性测试失败。为了克服这个问题，可能需要为这样的系统延长稳定时间和检测时间。 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 , 孔的大小:孔越小越难润湿。 , 润湿流体:某些润湿流体可能与聚合物矩阵有相斥的相互作用。 , 产品残留或污染物:产品残留物或污染物会改变膜聚合物的亲水性，排斥润湿流体 或降低表面引力。 , 压力条件:应该遵循制造商的压力推荐值以使膜完全润湿。 , 温度条件:温度影响润湿流体的表面张力。 (2)除了上述这些，还可能有与工艺或应用相关、而制造商的使用描述没有涉及的因素影响完整性测试。上述―D. 完整性检测失败分析/故障查找‖部分描述的疑难解答和图14,23中提供的决策树在评估完整性测试失败方面可能会有用。 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 图 14-23 完整性测试失败分析决策树 检验系统装置校验系统参数? 确保测试装置组装和运行正确? 确定选了合适的完整性测试? 确保测试设备已被正确校准? 确实使用了真确的测试参数? 确保测试系统无泄漏? 确保使用了正确的湿润流体和润? 确保安装了正确的过滤器湿步骤 ? 确保测试过程中温度维持在特定 范围内 步骤一 重新湿润并重复完整性测试 字看不到 失败通过/失败 通过滤芯润湿(阶段1) ? 提高冲洗体积/时间 ? 提高压差步骤二? 应用背差字看不到 通过/失败 通过失败 滤芯润湿(阶段2) ? 按照制造商的建议，适用低表面 引力的参考润湿液体来增强润湿 ? 使用与低表面引力的参考润湿液 步骤三体对应的合适的参数和极限值重 复完整性测试 通过记录通过结果通过/失败滤芯是完整的 失败 记录失败结果，过滤器测试失败 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 14.6.3过滤器的选择和特性描述 【法规要求】 《药品生产质量管理规范》2010修订版: 正文 第五章 设备 第六节 制药用水 第九十七条 纯化水、注射用水储罐和输送管道所用材料应无毒、耐腐蚀;储罐的通气口应安装不脱落纤维的疏水性除菌滤器;管道的设计和安装应避免死角、盲管。 附录1 无菌药品 第九十三条 过滤器应尽可能不脱落纤维。严禁使用含石棉的过滤器。过滤器不得因与产品发生反应、释放物质或吸附作用而对产品质量造成不利影响。 第九十四条 除菌过滤器使用后，必须采用适当的方法立即对其完整性进行检查并记录。常用的方法有起泡点试验、扩散流试验或压力保持试验。 过滤工艺验证中应确定过滤一定量药液所需时间及过滤器二侧的压力;任何明显偏离正常时间或压力的情况应有记录并进行调查。调查结果应归入批记录。 第九十五条 同一规格和型号的过滤器，应经过验证确定其使用时限。 编者理解:除菌过滤器作为无菌药物生产的重要环节，除前述的细菌截留和完整性测试之外，其它由于过滤器本身、操作参数和过滤器与过滤流体之间的相互作用等造成的影响，也是可能影响药品质量的重要因素。法规在这里的规定，就是规范过滤器的使用和验证，确保药品质量的措施。 【背景介绍】 除菌级过滤器可以有不同的大小、形式(例如，平板式，囊式，滤芯)和膜材，过滤器的使用者应当根据使用需要选择不同的过滤器。 通常，液体除菌级过滤器的膜材包括聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride, PVDF)，聚砜(polysulfone)，聚醚砜(polyethersulfone，PES)，尼龙(nylon)，纤维素酯(cellulose ester)，聚四氟乙烯(polytetrafluoroethylene, PTFE)，聚酯(polyester)和聚丙烯(polypropylene，PP)。 疏水性气体除菌级过滤器的膜材包括聚四氟乙烯(PTFE)，聚偏二氟乙烯(PVDF)，聚丙烯(PP)和聚乙烯(Polyethylene，PE)。严格工艺条件下，应使用绝对疏水材质的气体过滤器(如聚四氟乙烯)。 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 不同的膜材不仅影响过滤器的表现，同时也影响过滤器的溶出物和析出物水平、物理和热特性以及与被过滤流体的相互反应。一旦过滤膜被生产为最终的产品形式，就需要使用最终被过滤流体对其有效过滤面积、操作温度和压差限值、溶出物和兼容性进行评估。 因除菌级过滤器是任何无菌操作的重要组成部分，过滤器的使用者应当要求生产商对该类过滤器提供相当数量的测试数据和文件以支持其过滤器产品。过滤器的支持文件中可以包括验证指南、序号、批生产质控报告、产品文献、产品规范清单、技术公告和应用注意事项。 【技术要求】 A. 液体过滤器的确认和验证 推荐过滤器的使用者从过滤器的生产商处获取证明文件，证明其使用的过滤器适于在制药过程中应用。该类文件一般为采用法定的方法检测过滤器后的数据证明。这些证明文件支持但是不能代替过滤器的性能验证。下表列出了推荐的针对过滤器整体装置和过滤膜的确认、批放行检测和验证，一般由生产商完成并由过滤器使用者进行验证。 表 14-8 推荐进行的鉴定和确认 使用者 生产商 标准 装置 膜片 装置 水或乳糖肉汤(saline lactose broth, SLB)的- Q, L Q, L 细菌截留与水或溶剂完整性的关联 产品细菌截留 V* - - 化学兼容，对过滤器完整性的影响 V Q Q 溶出物 V Q Q 析出物 E - - 灭菌方法，对过滤器完整性的影响 V Q Q 完整性检测(水或溶剂) V Q, L Q, L 完整性检测方法选择(产品) V - - 毒性检测 - Q Q 细菌内毒素 V - Q, L 颗粒物 E - Q 无纤维释放 E - Q 总有机碳(TOC)和电导率 E - Q L = 批放行标准 Q = 确认 V = 特定工艺验证 V*= 可以用膜片或过滤器进行验证 E = 评估是否需要进行测试 上表中项目的具体说明: , 细菌截留实验由过滤器生产商用乳糖肉汤(saline lactose broth, SLB)，水或其它合 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 适的载体流体进行，然后由使用者在工艺条件下进行验证。 , 过滤器和产品之间的化学兼容性可以由过滤器生产商进行确认。通常也需要过滤器 的使用者在生产操作条件下用工艺流体对兼容性进行验证。例如，以产品为基础的 完整性测试可以用来评估化学兼容性。 , 溶出物可以由过滤器的生产商用标准溶剂在特定实验条件下进行确认，也可以由过 滤器的使用者用特定工艺流体来进行验证。 , 过滤器的生物安全性(如，生物反应性)由过滤器的生产者来完成，使用者不需要 再进行重复验证。 , 潜在的析出物应由过滤器的使用者来进行验证和评估，以确保其不危害到被过滤的 产品。 , 过滤器是否可以被灭菌以及灭菌的条件由过滤器的生产商进行确认。过滤器的使用 者需要对过滤器的实际灭菌工艺进行验证。 , 颗粒物、无纤维释放、易氧化物、总有机碳、电导率和流速应由过滤器的生产商进 行确认。过滤器的使用者应当根据实际使用情况判断是否需要进行其它测试。 B. 液体过滤器的再验证 经过验证被用于特定除菌过滤工艺的除菌过滤器，在工艺条件发生改变或者过滤器制造 方面发生改变是，需要进行再验证。包括但不限于下列情况，需要考虑进行再验证: , 单位面积的流速高于已验证的参数 , 过滤压差超过被验证参数 , 暴露时间超过被验证的时间 , 过滤面积不变的情况下提高过滤量 , 过滤温度改变 , 产品配方改变，包括浓度、pH或电导率 , 过滤器的灭菌程序改变 , 改变过滤器的制造商，或者过滤器的生产者改变了过滤膜的配方以及过滤器的其它 结构性材料 应对上述改变的潜在影响进行风险评估。质量部门应对所有可能对GMP符合性产生影 响的改变进行批准。 C. 气体除菌过滤器的选择 通常在选择气体除菌过滤器的时候，需要考虑以下这些要点和因素: , 截留能力 , 完整性检测 , 过滤流速和通量 , 材料和构造 , 水阻塞的清除(气体过滤器在应用中会因各种原因发生与水或者水基溶液直接接触 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 的情况，从而影响过滤器的表现。疏水性越强，所需要的吹干时间越短) , 是否有控制冷凝水的设计 其中，对“截留能力”和“材料和构造”的分类要求和典型应用实例参见下文实例分析。 D. 过滤器的重复使用 (1)气体过滤器 在很多应用中，疏水性气体除菌级过滤器是被重复使用或者称为被长期使用的。过滤器的使用者首先需要参考生产商提供的使用手册，重点考虑过滤器可以耐受的累积灭菌周期和正确的灭菌操作过程，防止因过滤器超限度使用而危害无菌生产过程。另外，使用者不能只根据生产商提供的实验室模式条件下的数据确定过滤器的实际使用期限，需要考虑实际工艺条件的影响。 可选择的重复/长期使用的方法如下，特别注意下列方法的风险是逐步增加的，使用者应当根据具体的使用工艺要求进行风险评估和选择: , 平行安装过滤器，当其中一个在使用时，另外一个可进行完整性检测和使用前准备。 , 使用冗余过滤器，如，两个过滤器串联连接，并采用定期完整性检测和定期更换相 结合的方法。 , 定期完整性检测和定期更换，结合使用。 , 只在第一次灭菌后进行完整性检测。 , 只在安装完成后进行完整性检测。 , 不检测完整性，只依靠历史数据确定更换周期。 如果过滤后的气体与除菌药品直接接触，而且在无菌药品生产过程中，后续没有进一步的灭菌步骤的情况下，推荐每次使用后对气体除菌过滤器进行完整性检测。其它使用情况下，推荐使用者按照实际工艺和使用情况，确定完整性检测的频次，一般每个月检测一次。 (2)液体过滤器 每批使用之后，除菌级过滤器通常应当被丢弃。但是，如果可以证明重复使用是有理由的，那么需要进行可以体现最多处理批次的验证。 如果使用者选择重复使用液体除菌级过滤器进行药品生产，需要进行验证。该验证需要评估和考虑的因素相当复杂，包括但不限于下列要点: , 重复使用的工艺和方式。 , 需要模拟实际重复使用的最差条件建立验证参数，包括多次灭菌、单次流量和总流 量、多次清洗、压差、流速、温度、工艺流体的物理化学特性和总微生物污染水平。 , 在上述参数条件下，进行完整性检测，并按照同14.6.1中实施指导要求，选择过滤 器批次和数量进行细菌截留测试，还需要进行溶出物检测，并评估是否需要进行析 出物检测。 , 需要证明重复使用时，不同批次间对过滤器进行清洗的方法和清洁效果，不会影响 药品质量。 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 【实施指导】 A. 液体过滤器的清洁度 应考虑从过滤器、过滤器硬件、过滤器安装和过程中引入的颗粒物污染，因为每个来源都可能增加产品的颗粒物负荷。 颗粒物之外，液体过滤器还可能是其它污染的来源，如内毒素、有机碳或易氧化物。可能的来源包括表面活性剂、润湿剂、塑料元件生产中的添加剂、生产过程碎片残留和结构材料。预冲洗过滤器可以降低颗粒物和污染物的水平，可以作为完整性检测之前的润湿过程的一部分来完成。 B. 液体过滤器安全性 为无菌药品除菌过滤选择过滤器的重要一点是评估滤材和过滤装置的安全性。过滤器生产商应当提供过滤器元件来源和毒性资料，包括动物源的元件的来源。 , 过滤器不应对过滤流体释放有毒物质。过滤器生产商应按照法定方法对过滤器的安 全进行鉴定。检测结果通常应成为过滤器验证指南的一部分。 , 动物来源材料。过滤器的生产商因申明其采用的动物来源材料的信息。 C. 液体过滤器的操作范围 生产商通常为过滤器指定最高操作温度、压差和灭菌限值，并提供水的流速。在结合了充足的安全边际后，过滤器的生产商提供最大的正向和反向的压差限值。在同时参考温度变化的限值后，过滤器的使用者利用这些信息选择适合的工艺流速、温度和灭菌条件。 D. 液体过滤器与工艺流体的交互反应 因除菌过滤往往是药品生产的最终工序之一。应评估过滤器对最终产品的影响。调查范围为溶出物和析出物、化学兼容性和吸附作用。这些测试应当用真实的产品或者替代流体来进行。检测可以由过滤器的生产商和使用者合作完成。 (1)评估过滤器的溶出物和析出物 “溶出物”指在人为或者逾常的外力(如，溶剂、温度或时间)下可以从材料中迁移的任何化学物质。“析出物”指在正常工艺条件下或存储期间可以从接触面移动到药品溶液中的化学物质。 潜在的溶出物和析出物的来源包括但不限于滤膜(如，增塑剂、表面活性剂、抗氧化剂、溶剂残留、装置支撑层)和塑料元件(如端盖、滤壳、网罩、密封圈)。可以影响析出物的因素包括工艺流体的化学性质、灭菌过程、接触时间、温度和体积/面积比。过滤有机溶剂相比于水基溶液，可能有较高的析出物水平。 溶出物的数据可以从过滤器生产商处获得，或者由过滤器的使用者进行实验。如果除菌过滤是灌装前的最后一步，应考虑在可能的情况下进行析出物的评估。 应模拟实际工艺关键参数的最差条件进行实验，如温度、时间、pH和前处理(例如，冲洗和灭菌)。获得抽提液后，分离、检测、鉴别和定量的方法包括不挥发物残留(NVR) 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 和总有机碳(TOC)检测等，其它可采用的方法包括紫外,可见光谱(UV-Vis)，傅立叶转换红外光谱(FTIR)和核磁共振(NMR)等。安全性可以使用标准的生物反应检测方法。 (2)化学兼容性 化学兼容性应当包括整个过滤器装置，并由流体、过滤温度和接触时间决定。因而应当选择实际工艺中采用的成品过滤器进行测试，而不能只用膜片代替。因为可能存在多种过滤器和工艺流体之间的交互反应，所以过滤器生产商提供的数据只能作为使用者研究的起点。工艺验证以考察工艺条件下除菌过滤器的截留效能是否发生改变为重点。 (3)吸附作用 吸附作用是指产品吸附于膜表面从而可能影响产品组成或浓度的机制。可进行吸附的过滤器材料包括滤膜、硬件和支撑材料。流速、产品浓度、接触时间、防腐剂浓度、温度和pH是有些可以影响吸附作用的因素。 在工艺开发过程中，吸附实验一般在小规模进行，然后在大规模上确认。这些实验也可用于建立预处理选择、操作参数或滤膜的选择。 【实例分析】 A. 液体过滤器溶出物检测实例 (1)目的 选用最差条件，对工艺接触过程中可能从滤器溶入产品的溶出物定性分析和定量估算。 (2)原理和方法选择 溶出物来源包括:过滤器硬件、支撑层、过滤膜、润湿剂和制造过程中可能使用的添加剂等。 本例选择将过滤器在挥发性模型溶剂中抽提，定量检测不挥发性残留物(“NVR”)，再用紫外,可见光谱(UV-Vis)和红外光谱法(FTIR)进行定性分析，必要时，增加对溶出物的分析方法。 该方法的优势: , NVR 为溶出物的总质量和所有存在的非挥发性物质的直接测定。NVR 检测无需 先行鉴定溶出物，无需获得各个化学组分的参照标准，也无需繁琐的操作和处理， 因此当考虑可能的不明物质时，该方法比许多其它方法优越。检测响应的波动或各 步分析方法收率波动对某些方法具有显著的影响，但对 NVR 称重法影响甚微。 , 模型溶剂法的使用避免了产品组分的干扰。因为通常即使用最小的体积进行抽提以 获得最高的溶出物浓度，产品组分的浓度通常也比过滤器溶出物的浓度高很多，从 而影响溶出物分析。 , 红外光谱法表征了功能基团、化合物种类以及特定的图谱匹配。它具有两大优点: 第一，通过与相似化合物进行比较可以推断溶出物种类的信息。方便了未知物的定 性分析。第二，化学结构相似的化合物，比如仅链长不同的齐聚物，其信号叠加产 生更高强度的单一信号。这大大简化了对典型过滤器溶出物即多分散齐聚物的分 析。紫外检测溶出物中有否发色基团，跟红外的结果相互印证。 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 , 使用“最差条件”模型。如果模型溶出条件明显为最差条件，则无需选择精确模拟 工艺料液和工艺条件的溶出试验溶剂和条件。最差条件需要至少考虑工艺中的灭菌 方法、温度和时间。 B. 液体过滤器兼容性验证实例 (1)目的:确认过滤器与工艺流体的化学兼容性，以确认工艺过程不会改变过滤器执行其特定功能的效能。 (2)原理和方法选择:过滤器与工艺流体在设定条件下接触特定时间，通过接触前、后过滤器完整性检测结果判断化学兼容性。因为完整性测试值，是与细菌截留能力进行关联的，采用此测试手段对除菌级过滤器的化学兼容性进行判断是适当的。 同时，考虑化学兼容性时，应包含过滤器的全部组成部件，因而应当选择实际工艺中采用的成品过滤器进行测试，而不能只用膜片代替。 (3)步骤: , 在待测过滤器组件接触产品之前，用参比溶液润湿后对成品过滤器进行完整性检 测。该参比溶液的完整性检测数值已经与微生物截留能力进行了关联。 , 待测过滤器组件以静态浸泡的或循环冲洗方式与产品接触，温度不低于最高工艺温 度，接触时间超过最长工艺时间。 , 当接触完成后，检查过滤器是否有损坏或物理变化。并立即进行产品润湿的完整性 检测。 , 用参比溶液冲洗过滤器后，再用参比溶液润湿进行完整性检测。 (4)结论: , 在上述实验中，与产品接触后，如果过滤器通过了完整性测试，并且未观察到物理 特征的变化，则表明单次使用后，过滤器与产品完全兼容。 , 如果过滤器的物理特征发生了明显变化，但是接触后过滤器通过了完整性检测，则 需进一步评估其变化程度。如果这些变化很可能影响过滤器的性能，则认为过滤器 可能与测试溶液或测试条件“部分兼容”，并对“部分兼容”作定义，说明相应的 接触限制。 , 不属于上述2种情况的测试结果，则认为过滤器与产品不兼容。 C. 气体过滤器的不同应用要求 药品生产过程中，疏水性气体过滤器的应用广泛，根据不同的工艺要求，对截留能力的要求分为下面3个等级: (1) 滤过气体与最终无菌产品或者相关设备的重要表面相接触的，需要最严格的截留要 求。如，无菌灌装机的压缩空气过滤，无菌原液储罐的通气过滤器和冻干设备或灭 菌锅的真空破除过滤器。针对此类应用的气体过滤器应通过液体微生物挑战实验， 其物理完整性检测需要与液体微生物挑战实验关联。(详见14.6.1中实例分析B) (2) 中等要求为滤过气体不直接与无菌药品的暴露表面接触的，包括很多中间步骤的处 理和发酵过程的通气。此类应用的气体过滤器应当通过气溶胶微生物挑战实验，其 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 物理完整性需要与气溶胶微生物挑战实验关联。 (3) 对于只要求降低微生物污染水平的应用，是相对要求最低的。因为通常都与对高效 空气过滤器(High Efficiency Particulate Air filter, HEPA)的要求类似，所以这类 过滤器一般用分散的油气溶胶进行挑战，建立截留能力，即被接受。 D. 气体过滤器的材料和结构 过滤器的元件，应当能够经受住拟应用的条件。过滤器的生产者通常会提供结构材料的信息和压差限值。过滤器的使用者应当根据这些信息，选择符合特定工艺要求的过滤器，并在限值内进行操作。 另外，对于过滤器可以耐受的灭菌次数，过滤器的使用者也应当采用同上类似的方法进行考虑。 (1) 毒性 确保过滤器不释放有毒成分到工艺流体中，当然是非常重要的。使用者在选择气体过滤器时，相对于液体过滤器，容易不关注这个问题。但是，过滤器的元件应当采用被标准毒性检测方法证明无毒的材料(如，美国药典，生物反应性实验，针对级别6塑料的体内检测)。 (2) 颗粒释放 对于某些应用，如灌装机的压缩空气过滤和冻干机的真空破除过滤器，颗粒释放应当被重点关注。可以使用液体进行颗粒释放验证，液体的粘度越高，验证条件被认为越严格。 (3) 过滤器和被过滤气体的相容性 通常与温度、压差、氧化性和这些因素的组合有关。 例如，纯氧条件下，考虑易燃性问题，应当使用聚丙烯(polypropylene)作为过滤器的硬件;全部采用氟化物作为结构材料的聚四氟乙烯(PTFE)膜过滤器适合在该条件下使用。 无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌 下面是赠送的经典语录和搞笑语录，不需要的朋友可以下载后不急删除～～～谢谢～～ ? 【感人的话】 要学会感恩、同情、宽容、忍耐、积极与真诚。希望是心灵的一种 支持力量.逆境的回馈，使生命将更加精彩而富足. ? 【感人的话】 每个人的好运跟坏运都是分配好的，虽然我的好运没有别人多，所 以只要是一点点好事，我就非常感恩了。 ? 【祝福的话】 这里有一本你当年用过的笔记，它有点儿泛黄了，书页里夹着的 话也早已没了香气，却还是谢谢你把它借给了我。今天的我们已经分开，却依然是朋 友。还是要跟以前一样，我听着你的述说，看着你笑，看着你难过委屈去安慰你。我 会把祝福写在这本笔记里，在那多枯黄的花的旁边，我会写下我的祝福:祝福你过得 好～祝福你过得比我好～然后，将它寄给你。不要哭泣，你。 ? 【表白的话】 爱你是一个念头，爱你是一种冲动，爱你是一种宿命，只属于我 的宿命。爱你是一段旅程，爱你是一场幸福的长跑，爱你是一路沐浴阳光，爱你是一 径的花香。爱你，是睡觉呼吸一般的自然～请，给我你的爱。 ? 【有哲理的话】 世上有三种人:一是良心被狗吃了的人，二是良心没被狗吃的 人，三是良心连狗都不吃的人. ? 【激励人的话】 如果你看到面前的阴影，别怕，那是因为你的背后有阳光。 ? 【感人的话】 一身白衣为你洗尽铅华，白衣白发白胜雪，捧一卷古墨，盈袭暗 香，我踏着平平仄仄的长长短短，款款步入风情万种的宋词里。溪边桃红青染，流水 潺潺，柳丝随风絮，我在桃花下写着红笺小字，一抹嫣然回眸，惊落了桃花，也惊落 了你的心。佛说千年一轮回，今生，你在哪里, 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 ? 【有哲理的话】 母爱是一滴甘露，亲吻干涸的泥土，它用细雨的温情，用钻石的 坚毅，期待着闪着碎光的泥土的肥沃;母爱不是人生中的一个凝固点，而是一条流动 的河，这条河造就了我们生命中美丽的情感之景。 ? 【表白的话】 我深深地恳求你;不要把我逐出你的爱门之外，我一分一秒也不能 缺少你的爱。只有赢得你的爱，我的生命才有光彩。 ? 【表白的话】 爱你，却要无欲无求，好难～爱你，却要偷偷摸摸，好累～爱你， 却让自己心碎，好惨～但竟然心甘情愿，好傻～但是我能肯定的是:我是真的很爱你～ ? 【表白的话】 我扬一把散沙粒粒想念漫天纷飞带给我对你的祝福，我洒下一瓢涟 水滴滴飘洋流到你的心海，爱你，今生无悔，牵了你的情，爱了你的人，我会努力呵 护你，一生一世～ ? 【表白的话】 你的热情，温暖了我冰冻的心;你的大胆，鼓起了我爱的热忱;你 的关怀，激起了我感激之情。新年伊始，愿我们透过那爱湖的波光水雾，一起憧憬美 好的未来。情人节快乐～ ? 【表白的话】 也许我的笑容不够灿烂，但足够为你扫清冬日里的阴霾;也许我的 双手不够温柔，但还能为你拂去俗世尘埃～如果命运安排我们在一起，我会好好珍惜 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面对别人的反对意见，如果你针锋相对地进行争执和批驳，对方 很难从内心真正接受，在表达方式上委婉一些，效果就好多了。 ? 【有哲理的话】 当我们放眼这个世界的时候，如果以自我为中心，很可能会以为 自己了不起，可一旦我们把心歇下来，用赤子之心来观察，就会发现我们是多么渺小。 我们什么时候都能看清自己不如人的地方，那就是对生命有真正信心的时候。 ? 【有哲理的话】 胸有平常心，幸福自然来。人的心态如同琴上的弦，太紧则易断， 太松则无音，只有松紧适度，才能弹出美妙之音。保持一颗平常心，才是人生的真谛。 怀一颗平常心，看淡得失，超越成败，不为物欲所迷，不被烦恼所扰，明心见性，随 缘自适。平常心，是一种人生态度，也是一种生活智慧。 ? 【有哲理的话】 绝大多数人都喜欢嘲笑别人，而不愿意被别人嘲笑。在别人处于 尴尬境遇时，你如果能通过自己出丑来减少他的难堪，他一定对你非常感激。 ? 【有哲理的话】 对于胸怀大志的有志之士和勤奋努力的人来说，障碍是不会起什 么作用的。他们会说:不会再有什么困难能拦得住我了。只要有百折不挠的信念，就 会战胜许多强大的阻力。 ? 【有哲理的话】 成功地推销自己是迈向成功的第一步。在推销自己的过程中，多 动脑筋，设计一些小花样，就容易引起别人的兴趣和关注。 搞笑语录 ? 一次，同事几个去美国，到超市买东西，用济南话讨论，有个美国人过来用标准 的济南话说:―你们是济南的,～‖暴汗，原来这老外是以前战争时期留在中国的美国 人后代，同事问他:―那你英文怎么样啊,‖老外一拍大腿道:―英语太他妈难学了～～‖ 哈哈，有木有笑趴啊。 错误～文档中没有指定样式的文字。 无菌制剂GMP实施指南 ? 公司加班到半夜，所有人都眼皮打架，一姑娘哀叹:―我现在真想变成一个?因‘ 字。‖众问其故，姑娘说:―就是一个人四肢平摊躺在大床上。‖话音刚落，旁边一男同 事嘟囔:―困。‖ ? 一先生感冒去医院挂吊针，护士小姐很麻利的给这位先生插上针挂好盐水，一个 多小时过去了，盐水瓶的水打完了，护士过来马上又换上一瓶。这先生不解，问护士 小姐说:―小姐，处方单上不是只开了一瓶吗,‖护士小姐指着打完盐水的空瓶盖说，―先 生，您运气真好，这瓶中奖了，再来一瓶～‖ ? 一退休老头，闲来无事就教鹦鹉说话，每天早上必教:―早上好～‖可惜～几个月 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男人们敬佩得目瞪口呆。男人挂了电话，问:―这是谁的手机,‖ ? 深夜，老公未归。女儿心急给妈打电话:―妈～他还没回来，一定有别的女人了～‖ 妈妈轻声安慰:―傻孩子，乖，别净往坏处想，兴许是出车祸了～‖ ? 一男子在闹市骑摩托撞昏了一个陌生的老汉～男子惊吓得不知所措～围观群众越 来越多～突然，该男抱住老汉，声泪俱下的喊道:―爹，你等着我，我这就去给你找医 生～‖说后，就跑掉了。老汉挣扎着愤怒的喊道:―给老子回来～‖众人纷纷感慨:―这 儿子当的真孝顺～‖