加藤卵子（胚胎）解冻简介
卵子(胚胎)的解冻
一、 试剂和耗材
1. 试剂:
@1.1 TS(KITAZATO Vitrofaction KIT Code.VT102-01)
@1.2 DS(KITAZATO Vitrofaction KIT Code.VT102-02)
@1.3 WS1(KITAZATO Vitrofaction KIT Code.VT102-03)
@1.4 WS2(KITAZATO Vitrofaction KIT Code.VT102-04) 2. 耗材
2.1 Falcon 353037培养皿
2.2 四孔板
2.3 巴斯德吸管
2.4 Falcon 357521 1ml移液管
3. 器材:
3.1 计时器
3.2 微量加样枪
3.3 移液器
二、 实验准备:
1. 准备好解冻用的四种试剂TS(37?培养箱预热)、DS、WS1、
WS2，Falcon 353037皿(37?培养箱预热)、计时器。 2. TS和放TS的培养皿需在37?培养箱预热，DS、WS1、WS2
在室温下使用。
3. 按DS液、WS1液、WS2液的顺序各取500微升分别加入多
孔板的三个孔内，同时作好明确的标记。
4. 预先把需解冻的胚胎从液氮罐中找出，放入盛有液氮的小容器
内准备好。液氮容器尽可能靠进体视显微镜，以方便操作。
三、 操作程序:
1. 在一个已预热的Falcon 353001皿中加入TS液1ml，并放在热
台上，然后把装有卵子(或胚胎)的Cryotop上的盖子在液氮
中用镊子取掉，立即把Cryotop的前端立即全部插入37?的
TS液中，并开始计时，反复洗涤1分钟。
2. 迅速将卵子(或胚胎)转移到DS液的表面，让其自然下落，
转移的液体量尽可能少，马上开始计时，DS液中停留3分钟。
用DS液快速冲洗巴斯德吸管3-4次，不用洗涤卵子(或胚胎)。
关闭恒温板的温度控制设施。
3. 迅速将卵子(或胚胎)转移到WS1液的表面，让其自然下落，
转移的液体量尽可能少，马上开始计时，WS1液中停留5分
钟。用WS1液快速冲洗巴斯德吸管3-4次，不用洗涤卵子(或
胚胎)。
4. 迅速将卵子(或胚胎)转移到WS2液的表面，让其自然下落，
转移的液体量尽可能少，打开恒温板的温度控制设施，马上开
始计时，WS2液中停留5分钟。用WS2液快速冲洗巴斯德吸
管3-4次，反复洗涤卵子(或胚胎)数次。
5. 迅速将卵子(或胚胎)转移到IM或GM(BM)培养皿中，转
移的液体量尽可能少，用培养液快速冲洗巴斯德吸管3-4次，
适当冲洗卵子(或胚胎)数次，最后转移到相应培养液的微滴
中培养准备受精或移植。
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