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粗蛋白、能量、钙磷的测定方法.doc

粗蛋白、能量、钙磷的测定方法

麦格丹
2017-10-06 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《粗蛋白、能量、钙磷的测定方法doc》,可适用于高等教育领域

粗蛋白、能量、钙磷的测定方法饲料粗蛋白的测定一、实验目的通过饲料样品中粗蛋白质的测定让学生了解了解凯氏定氮法测定的基本原理掌握半微量凯氏定氮法测定饲料粗蛋白质的方法掌握粗蛋白质含量的计算方法。二、实验原理各种饲料的有机物质在还原性催化剂(如CuSOKSO或NaSO或Se粉)的帮助下用浓硫酸进行消化作用使蛋白质和其它有机态氮(在一定处理NH)SO而非下也包括硝酸态氨)都转变成NH并与HSO化合成(含氮物质则以COHOSO状态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏释放出的铵态氮用硼酸溶液吸收之并与之结合成为四硼酸铵然后以甲基红溴甲酚绿作指示剂用HCl标准溶液(molL)滴定求出氮的含量根据不同的饲料再乘以一定的系数(通常用系数计算)即为粗蛋白质的含量。其主要化学反应如下:、NH(CH)COOHHSO(NH)SOCOSOH(丙氨酸)NHHONaSO、(NH)SONaOH、HBONHNHHBOHO、NHHBOHClHONHCHBO本法不能区别蛋白氮和非蛋白氮只能部分回收硝酸盐和亚硝酸盐等含氮化合物。在测定结果中除蛋白质外还有氨基酸、酰胺铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等故以粗蛋白质表示之。三、实验设备、实验室用样品粉碎机或研钵、分析筛:孔径mm(目)、分析天平:感量g、消煮炉或电炉、滴定管:酸式或ml、凯式烧瓶:或m、凯氏蔗馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式、锥形瓶或m、容量瓶:ml。三、实验内容、称取,g试样(含氮量,mg)准确至g无损失地放入凯氏烧瓶中加入硫酸铜g无水硫酸钾(或硫酸钠)g与试样混合均匀再加硫酸ml和粒玻璃珠在消煮炉士小心加热待样品焦化泡沫消失再加强火力(,)直至溶液澄清后再加热消化min。、氨的蒸馏()常量直接茂馏法将上述的试样消煮液冷却加蒸馏水ml摇匀冷却。沿瓶壁小心加入,氢氧化钠溶液ml立即与蒸馏装置相连(蒸馏装置冷凝管的末端应浸入ml硼酸吸收液lcm。加混合指示剂滴轻摇凯氏烧瓶使溶液混匀加热蒸馏直至馏出液体积约ml。先将吸收液取下再停止加热。()半微量水蒸汽蒸馏法上述试样的消煮液冷却加蒸馏水m转入ml容量瓶冷却后用水稀释至刻度摇匀为试样分解液。取,硼酸溶液ml加混合指示剂滴使半微量蕉馏装置的冷凝管末端浸入此溶液蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴硫酸数滴且保持此液为橙红色否则应补加少许硫酸。准确移取试样分解液,ml注入蒸馏装置的反应室中用少量蒸馏水冲洗进样入口塞好入口玻璃塞再加ml,氢氧化钠溶液小心提起玻璃塞使之流入反应室将玻璃塞塞好并在入口处加水封密好防止漏气蒸馏min使冷凝管末端离开吸收液面用蒸馏水洗冷凝管末端洗液均流入吸收液。、滴定用硼酸吸收氨后立即用molL的HCI标准溶液滴定仍以甲基红或混合甲基红为指示剂。在测定饲料样本中含氮量的同时应做一空白对照测定即各种试剂的用量及操作步骤完全相同但不加样本这样可以校正因药品不纯所发生的误差吸收氨后的吸收液立即用molL盐酸标准溶液滴定溶液由蓝绿色变为灰红色为终点。、空白测定称取蔗糖lg以代替试样按上述测定步骤进行空白测定消耗molL盐酸标准溶液的体积应不得超过ml。、计算每m的lmolL盐酸标准溶液相当于g的N。因此式中:v试样滴定时所需酸标准溶液的体积(m)v空白滴定时所需酸标准溶液的体积(m)c盐酸标准溶液的浓度(molL)m一试样的质量(g)v试样的分解液总体积(ml)v’试样分解液蒸馏用体积(m)每mlHCl标准溶液相当于N的克数一氮换算成蛋白质的平均系数。每个试样取两个平行样进行测定以其算术平均值为结果。当粗蛋质含量在,以。上允许相对偏差为,当粗蛋白质含量在l,,,时允许相对偏差为,当粗蛋白质含量在,以下时允许相对偏差为,。测定步骤的检验精确称取g硫酸铵代替试样按测定步骤文字中的各步骤操作并按公式计算(但不乘系数)测得硫酸铵含氮量为,否则应检查加碱蒸馏和滴定各步骤是否正确。试样消煮时加入硫酸铜g无水硫酸钠g与试样混合均匀再加硫酸ml仍可使饲料试样分解完全,只是试样焦化再变为澄清所需时间要略长些。饲料钙的测定一、实验目的通过饲料样品中钙的测定使学生掌握钙的测定原理和方法。二、实验原理将试样中有机物破坏钙变成溶于水的离子用草酸铵定量沉淀用高锰酸钾法间接测定钙的含量。三、实验材料、实验室用样品粉碎机或研钵、分样筛:孔径mm(目)、分析天平:感量g、高温炉电加热可控制温度在土、坩埚:瓷质、容量瓶:ml、滴定管:酸式或ml、玻璃漏斗:cm直径、定量滤纸:中速Φ,cm、移液管:ml、烧杯:ml、凯氏烧瓶:或ml。四、实验内容、试样的分解()干法称取试样,g于坩埚中准确至g在电炉上小心炭化再放入高温炉于灼烧h(或测定粗灰分后接续进行)。在盛灰坩埚中加入盐酸溶液m和浓硝酸数滴小心煮沸。将此溶液转入lml容量瓶冷却至室温用蒸馏水稀释至刻度摇匀为试样分解液。()湿法(用于无机物或液体饲料)称取试样,g于凯氏烧瓶中准确至g。加入硝酸(GB化学纯)m加热煮沸至二氧化氮黄烟逸尽冷却后加入,,高氯酸(GB分析纯)ml小心煮沸至溶液无色。不得蒸干(危险~)。冷却后加蒸馏水ml并煮沸驱逐二氧化氮冷却后转入ml容量瓶用蒸馏水稀释至刻度摇匀为试样分解液。、试样的测定准确移取试样分解液,ml(含钙量mg左右)于烧杯中加蒸馏水ml甲基红指示剂滴。滴加氨水氨水溶液至溶液至橙色。再加盐酸溶液使溶液变红色(pH,)。小心煮沸慢慢滴加热草酸铵溶液lml并不断搅拌。如溶液变橙色应补滴盐酸溶液至红色。煮沸数分钟放置过夜使沉淀陈化(或在水浴上加热h)。用滤纸过滤用:的氨水溶液洗沉淀,次至无草酸根离子(接滤液数ml加!加硫酸数滴加热至再加高锰酸钾滴呈微红色应min不褪色)。将沉淀和滤纸转入原烧杯加硫酸ml蒸馏水ml加热至,用molL高锰酸钾滴定溶液呈粉红色应半分钟不褪色为终点同时进行空白溶液的测定。式中:VmolL高锰酸钾标准溶液滴定用体积(ml)V测定空白时molL高锰酸钾标准溶液滴定用体积(ml)C高锰酸钾标准溶液浓度(molL)m试样质量(g)V’滴定时移取试养分解液体积(ml)钙的mol数。每个试样取两个平行样进行测定以其算术平均值为结果。含钙量以下时允许相对偏差含钙量,时允许相对偏差含钙量以下时允许相对偏差。饲料总磷的测定一、实验目的通过饲料样品中磷的测定使学生掌握用钼黄比色法测定饲料样品中总磷含量的原理和方法。二、实验原理先将试样中有机物破坏使磷游离出来在酸性溶液中用钒钼酸铵处理生成黄色(NH)PONHVOMoO在波长nm下进行比色测定。此法测得为总含磷量其中包括动物难以吸收的植酸磷。三、实验设备、实验室用样品粉碎机或研钵、分样筛:孔径mm(目)、分析天平:感量g、分光光度计:有mm比色池可在nm下测吸光度、高温炉:电加热可控制温度在、坩埚:瓷质、容量瓶:ml或ml、容量瓶或具塞比色管:ml、刻度移液管:ml、凯氏烧瓶:ml或m。四、实验内容、试样的分解()干法称取试样,g于坩埚中准确至g在电炉上小心炭化再放入高温炉于灼烧h(或测定粗灰分后接续进行)。在盛灰坩埚中加入盐酸溶液m和浓硝酸数滴小心煮沸。将此溶液转入lml容量瓶冷却至室温用蒸馏水稀释至刻度摇匀为试样分解液。()湿法(用于无机物或液体饲料)称取试样,g于凯氏烧瓶中准确至g。加入硝酸(GB化学纯)m加热煮沸至二氧化氮黄烟逸尽冷却后加入,,高氯酸(GB分析纯)ml小心煮沸至溶液无色。不得蒸干(危险~)。冷却后加蒸馏水ml并煮沸驱逐二氧化氮冷却后转入ml容量瓶用蒸馏水稀释至刻度摇匀为试样分解液。、标准曲线的绘制准确移取磷标准溶液(μgm)ml于ml容量瓶中各加入钒钼铵辊邑试剂ml。用蒸馏水稀释至刻度摇匀放置min以上。以ml溶液为参比用mm比色池在m波长下用分光光度计测各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标吸光度为纵坐标绘制标准曲线。、样的测定准确移取试样分解液,ml(含磷量μg)于ml容量瓶中加入钒钼酸铵显色试剂ml按上述的方法显色和比色测定测得试样分解液的吸光度。用标准曲线查得试样分解液的含磷量。式中:m试样质量(g)V比色测定时所移取试样分解液的体积(ml)X由标准曲线查得试样分解液含磷量(μg)。每个试样取两个平行样进行测定以其算术平均值为结果。含磷量在以上时允许相对偏差含钙量以下时允许相对偏差。能量的测定一、实验目的使学生了解了解氧弹式热量计测热的基本原理及方法。二、实验原理有机物的燃烧热系单位质量有机化合物完全氧化时所能释放出的热量称为该物质的燃烧热也称总能。根据热力学第一定律一个热化学反应只要其开始与终末状态一定则反应的热效应就一定。这一原理使我们测定各种物质的燃烧热变为有意义。有机物差不多均能氧化完全并且反应进行很快因此准确地测定燃烧热就有了可能。由所测得的燃烧热还可以计算反应的热效应和化合物的生成热。将由消化代谢试验所用的饲料或日粮以及所收集的粪、尿样品制备成一定质量的测定试样装于充有()kgcm纯氧氧弹中进行燃烧。燃烧所产生之热量为氧弹周围已知质量的蒸馏水及热量计整个体系所吸收并由贝克曼温度计读出水温上升的度数。该上升的温度乘以热量计体系和水的热容量之和即可得出试样的燃烧热。在测定过程中一些因素会影响测定结果的准确性须加以校正才可得出真实的热价。例如由于辐射的影响水温上升的度数与由燃烧产热所致的实际升温之间有偏差引火丝本身燃烧的发热量以及含有氮、硫等元素的样品在氧化后生成硝酸、硫酸其发热量应予以扣除等。三、实验设备、氧弹式热量计、氧气钢瓶(附氧气表)及支架、容量瓶:mL、量筒mL、滴定管mL、吸管mL、烧杯mL。四、实验内容、准备工作测定前应擦净氧弹各部污物及油渍以防试验时发生危险氧气钢瓶应置于阴凉安全处并应注意避免滑倒。()称量样品及引火丝的准备。取,g风干饲料样品(经粉碎过目筛)用压样机压成饼状然后置于干燥洁净的坩埚中称重(准确至lg)。样品的多少依测定时温度上升不高于,为准最好以左右为宜。如温差大时热量计因辐射而损失的热也多引起的误差也较大。此外在称量样品的同时应测定样品的含水量以便换算成绝干基础的热价。量取及称重cm的引火丝将盛有样品的坩埚置于弹头的坩埚支架上将引火丝固定在两个电极之上其中一端应距样品表面,mm。引火丝切勿接触坩埚。()加水及充氧。在弹头与弹体装配前取,mL水注入氧弹底部以吸收燃烧过程中产生的五氧化二氮与三氧化硫气体。加入的水量不要求很精确但应与测定热量计水当量相一致。然后用螺帽将弹头与弹体扭紧取下进气阀的螺母拧上连接氧气瓶的气管接头充氧之前应先打开针形阀。先充氧约kgcm使氧弹中空气排尽。然后充氧压力应逐渐增至,kgcm。但充氧不可过快否则会使坩埚中的试样为气流所冲散而损失。这一点必须注意。()内外水筒的准备及热量计的安装。从外筒的注水口加入水至离上缘cm处止为防止水中杂质的沉淀应用蒸馏水。外筒灌水后可用搅拌器搅拌(外筒水不须经常更换)待水温与室温一致时才能使用。如热量计长期不用应将水套中的水全部放出干燥保存。热量计内筒的蒸馏水应盖过氧弹进气阀螺母高度。各套仪器的水量不同,g。国产GR型热量计的加水量为g每次称量应相等准确至,g(如不具备称量条件可用容量瓶量取,mL蒸馏水)。为减少辐射测定前应调节内筒水温使低于外筒水温GR型以,为宜其他型号在,之间(试样发热量少时可相差)。内筒灌水应在内筒放入外筒并将氧弹放入内筒后才可进行。灌注时注意勿使水溅出以免影响数值的准确性。氧弹在内筒中应放置适当的位置勿使搅拌器的叶片与内筒或氧弹接触然后将贝克曼温度计固定于支架上使其水银球中心位于氧弹一半高度的位置最后盖上盖子。整个热量计准备就绪后才可开动搅拌器为保证测定时搅拌所生的热大导相等。搅拌器的速度变化不得超过,。搅拌速度可由控制箱上的旋钮加以调节。、测定工作全部测定工作分为期:燃烧前期(即初期)、燃烧期(即主期)及燃烧后期(即末期)。()燃烧前期(初期)是燃烧之前的阶段用以了解热由外筒传入内筒的速度。搅拌器开动,min后开始记录温度每分钟次。当每分钟温度上升几乎恒定时可定为初期的起点也即试验的开始点(定为d点)。然后每隔min读记次温度如此连续,min。读温度应精确至。()燃烧前期之末按电钮点火(此时定为点)燃烧前期最后次读温也就是燃烧期(主期)的第一次读温。燃烧期(主期)内每min记录次直至温度不再上升为止(此时为c点)燃烧即行结束。使用的点火电压约为V由于点火而进入热量计体系的电热通常可忽略。但通电流的时间每次都应相同不应超过s。如通电时间过久则因点火而产生的热会影响测定结果的精确度。()燃烧后期(末期)。燃烧期结束即为燃烧后期(末期)的开始。其目的在测定热由内筒传向外筒的速度亦须每分钟读记温度次至每分钟温度变化不大时为止需,min。燃烧后期的终点即为全部试验期的结束(定为d点)。结束工作测定温度后停止搅拌器。首先取下温度计然后从内筒取出搅拌器及氧弹氧弹应静置min使能溶解的气体完全溶解。然后将排气口打开使氧弹中剩的氧气和二氧化碳在,min徐徐排出。拧开螺帽取出弹头如氧弹内有黑烟或未燃尽的试样则这个试验应作废。如燃烧成功则小心取出烧剩余的引火丝精确测量其长度或质量。用热蒸馏水仔细冲洗氧弹内壁、坩埚及进气阀、导气管等各部分洗液及燃烧后的灰分移入洁净的烧杯中供测定酸与硫的含量以校正酸的生成热。在一般情况下由于酸的生成热很小约为J因此常忽略不计。氧弹、内筒、搅拌器在使用后应用纱布擦干净。各塞门应保持不关闭状态并用热风将其接触部分吹干防止塞门生锈而不能密闭而漏气。每次燃烧结束后应清除坩埚中的残余物。普通坩埚可置于高温电炉中加热至维持,min燃去可能存在的污物及水分。白金坩埚可在稀盐酸中煮沸也可用氟氢酸稍加热以去污石英坩埚只能擦拭因加热与用氟氢酸处理都对石英有损。饲料燃烧热(总能)的计算式中Q为饲料或粪、尿样品的燃烧热kJgK为热量计的水当量T为主期阶段最终温度T为主期阶段最初温度R为在T温度计刻度的校正值R为在T时温度计刻度的校正值H为用贝克曼温度计时温度计上海一刻度相当于实际温度值m为试样的质量gT为热量计与周围空气的热交换校正值b为点火丝的质量gq为点火丝的热值kJg。样品两次平行测定结果允许相差不超过kJg。点火丝热值:铁丝kJg镍丝kJg铜丝kJg铅丝kJg。

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