猪胰脏中胰酶的制备新工艺技术研究

猪胰脏中胰酶的制备新工艺技术研究 猪胰脏中胰酶的制备新工艺技术研究 第23卷 2011年 第1期 2月 黑龙江八一农垦大学!!!!!ian里AgriculturalUniversity23(1):7278 Feb.2011 文章编号:1002—2090(2011)Ol一0072—07 猪胰脏中胰酶的制备新工艺技术研究 魏文毅,张丽萍,王琴,张清荣,李靖元 (黑龙江八一农垦大学食品学院,大庆163319) 摘要:以猪胰脏为原料,采用单因素试验研究胰酶制备的不同工艺路线,不同提取溶剂,提取激活温度,时间,pH和沉淀剂种 类对三酶活力和收率及其他品质的影响,并通过正交试验优化得胰酶制备的工艺条件为:提取溶剂为25%乙醇(原料量的2 倍,v'm),保护剂为1.0%氯化钠和1.0%甘油,激活剂为O.2%CaC1:和1.0%胰酶原粉;提取激活温度为20~1oC,pH5.5,时间 6h;沉淀剂为O.2%壳聚糖,温度4?或常温,预冷丙酮脱脂,40c下真空干燥后,粉碎即得产品.在该工艺条件下制备的胰酶制 品,其胰蛋白酶,胰淀粉酶,胰脂肪酶的酶活力分别达3892,45551,27239u?g,,为中国药典所规定的三酶最低酶活力的6倍 以上,平均收率12.63%,同时胰酶制品的其它指标也符合药典要求. 关键词:猪胰脏;胰酶;制备工艺;酶活力;收率 中图分类号:$482文献标识码:A StudiesontheNewPreparationTechnologyofTrypsinfromPorcinePancreas WeiWenyi,ZhangLiping,WangQin,ZhangQingrong,LiJingyuan (CollegeofFoodstuff,HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity,Daqing163319) Abstract:Usingthepigpancreasasrawmaterial,single— factortestofpancreaticenzymepreparationwasusedtoresearchtheef-- fectsofdifferentprocessroutes,differentextractionsolvent,extractionandactivationtemperature,time,pH,precipitanttypeon thethreekindsofenzymeactivity.Yieldandotherqualityofpancreatin,andpancreatinpreparationconditionsoptimizedbyorthogo— naltestwereasfollows:extractionsolventwas25%ethanol(theamountofitwas2timesofrawmaterials,v/m),enzymeprotectants were1.0%sodiumchlorideand1.0%glycero1.enzymeactivatorwere0.2%CaClzand1.O%originaltrypsinpowder;extractingor activatingtemperaturewas20+1oC,pHwas5.5,timewas6h;precipitatingagentwas0.2%chitosan,precipitatingtemperaturewas 4oCorroomtemperature,adegreasingagentwaspre-coolingacetone,vacuumdryingtemperaturewas40oC,andtheproductob— tainedwascomminuted.Thepancreatinproductspreparedundertheconditionsofprocessoptimization,whereactivityoftrypsin, pancreaticamylase,pancreaticlipasewereupto3892,45551,27239u'g,,respectively.Furt hermore,theaverageyieldofpan— creatinwas12.63%,it'Senzymeactivitywasmorethan6timesthatoftheminimumenzymeactivitytoberequiredbytheChinese Pharmacopoeia,whileotherindicatorsofpancreatinproductswereinaccordancewiththerequirementsoftheChinesePharma— copoeia. Keywords:porcinepancreas;pancreatin;preparationprocess;enzymeactivity;yield 胰酶是从动物胰脏中提取的一种酶的混合物, 含有胰蛋白酶,糜蛋白酶,多种肽酶,脂肪酶和淀粉 酶等.呈白色或淡黄色无定形粉末,有特殊的肉臭 味,有吸湿性,部分溶于水及低浓度的乙醇液中,不 溶于高浓度乙醇,丙酮,异丙醇和乙醚等有机溶剂 中.水溶液pH2—3时稳定,pH6以上时不稳定,Ca可 增加其稳定性.遇酸,热及重金属,鞣酸等蛋白质沉 淀剂产生沉淀【l,21.在医药上,胰酶主要作为助消化 药,用于治疗消化不良,食欲不振及肝胰疾患引起的 消化障碍[31.工业上,胰酶主要用在皮革加工过程中, 它优于其它微生物来源的蛋白酶,对皮革的软化,脱 脂,松紧度起较好的调节作用,也用于丝绸,纺织,印 收稿日期:2010—08—29 基金项目:黑龙江省"十一五"重点科技攻关项目(GBO6B403—3). 作者简介:魏文毅(1975一),男,讲师,西北农林科技大学硕士研究生毕业,现主要从 事农产品贮藏与加工方面的教学与科研工作. 通讯作者:张丽萍,女,教授,硕士研究生导师,E—mail:zlp57@yahoo.corn.cn. 第1期魏文毅等:猪胰脏中胰酶的制备新工艺技术研究73 染等工业部门【41.此外,由于胰酶中含有多种活性物 质,可作为原料从中提取所需物质l5l. 我国对畜禽胰脏中胰酶的制备研究多集中在20 世纪80至90年代l3,一ol.目前,有关胰酶制备的研 究多是对原有工艺的部分改进…2],但大多采用的低 浓度有机溶剂(如25%乙醇,10%丙酮,7.5%异丙醇 等)提取,然后用高浓度有机溶剂沉淀分离,工艺条 件差异大,其中有在酸性条件下提取的,也有的在碱 性条件下提取I81,有提取激活同步进行的,也有的提 取激活分步进行且有先有后,提取时间有的3-6ht"], 有的10,20hI2_,更长的可达3,7.三酶活力的高低 差异也很大,就以胰酶中胰蛋白酶活来看,现有工艺 中最高的可达20万II?g一以上l2.I,最低只有 100014000ll?g.,多数在1万u?g以下,胰淀 粉酶和胰脂肪酶活力同样如此l,,没有胰酶三酶 活力都相对较高的工艺. 因此,有必要对胰酶制备过程中的影响因素做 一 较为系统的研究,同时对工艺中胰酶沉淀剂种类 筛选,尤其是研究用安全无毒的高分子有机絮凝剂 来代替高浓度的有机溶剂也显得非常重要-.目 前,有机絮凝剂在该方面的应用中,有少数研究者用 壳聚糖做过部分尝试,奠定了一些基础Il5'】. 1材料与方法 1.1材料与试剂 新鲜或冷冻的猪胰脏南大庆金锣肉制品有限公 司提供.氯化钙,氯化钠,甘油,阿拉伯胶,壳聚糖,药 用PEG4000和PEG6000.95%乙醇,30%盐酸,5%三 氯醋酸溶液,8%牛胆盐溶液,0.1moL?L氢氧化钠 滴定液,0.1moL?L盐酸溶液,1.2%氯化钠溶液, 0.1moL?L碘滴定液,1moL?L盐酸溶液,2moL?L 硫酸溶液,0.1moL?L硫代硫酸钠滴定液,硼酸盐 缓冲液:(pH7.5?O.1),酪蛋白溶液:(pH8.0)(临用 现配),三羟甲基氨基甲烷一盐酸缓冲液(pH7.1),磷 酸盐缓冲液(pH6.8),l%马铃薯淀粉溶液,橄榄油 等.以上所用试剂为分析纯或化学纯. 1.2主要仪器与设备 紫外分光光度计,电子分析天平,高速组织捣碎 机,电动搅拌器,真空干燥箱,酸度计,水浴锅,冰箱, 冰柜,布氏漏斗,索氏提取器以及相关玻璃仪器等. 1.3试验方法 1.3.1不同工艺技术的比较 以稀醇法为基本的提取方法[17J.每次将100g新 鲜猪胰或冻猪胰(去除脂肪J绞碎成胰浆后,分别按 以下工艺进行操作.每处理同时做3次平行实验,各 指标取均值. 1.3.1.1工艺流程一 新鲜猪胰/冷冻猪胰脏一胰浆一激活一提取一沉 淀一脱脂一干燥一胰酶原粉 操作要点:?激活:加入激活剂(原料量0.2% CaC12,1.0%胰酶原粉)和保护剂(分别加1.O%的氯化 钠,甘油)搅拌均匀,置于4,5clC下放置激活10h.? 提取:加入预冷至4cI=的200mL25%乙醇(或者是胰 脏重量1.5倍),用30%盐酸调节为pH5.6,置于 20clC下搅拌提取2h(60,70r?min).过滤,滤饼同 法再提取1次,合并2次提取液.?沉淀:将预冷至 0,5c(=的95%乙醇加人上述提取液中,使乙醇浓度达 到70%(可依据提取液的取用量,通过稀释公式计算 应加95%的乙醇量),置冰箱4?(一5?以下更好)中 使其沉淀完全沉淀(随时观察沉淀效果, 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 沉淀完 全的时间,大约需要10,15h),过滤,收集沉淀,压干 即得粗制胰酶.?脱脂,干燥:取粗制品置于循环脱 脂器中,加人丙酮脱脂,直至无脂肪为止.在40?以 下鼓风或真空干燥,称重计算总收率,测定酶活. 1.3.1_2工艺流程二 新鲜猪胰/冷冻猪胰脏一胰浆一提取一激活一沉 淀一脱脂一干燥一胰酶原粉 操作要点:?提取:加入预冷至4?的200mL 25%乙醇(或者是胰脏重量1.5倍)和保护剂(分别加 1.0%的氯化钠,甘油)用30%盐酸调节为pH5.6,置于 20qC下搅拌提取2h(60,70r?rain).过滤,滤饼同 法再提取1次,合并2次提取液.?激活:在上述提 取液中加入激活剂(原料量0.2%CaC1,1.0%胰酶原 粉)搅拌均匀,置于4,5?下放置激活10h.?沉淀: 操作同1.3.1.1.?脱脂,干燥:操作同1.3.1.1. 1.3.1.3工艺流程三 新鲜猪胰/冷冻猪胰脏一胰浆一(激活+提取)一 沉淀一脱脂一干燥一胰酶原粉 操作要点:?提取,激活:在胰浆中搅拌加入预 冷至4?的200mL25%乙醇作为提取剂,同时加入 保护剂(分别加原料量1.0%的氯化钠,甘油)和激活 剂(原料量0.2%CaC1,1.O%胰酶原粉),然后用30% 盐酸调节pH5.5.于200C保温搅拌提取激活4h(60 70r?rain.),过滤,滤饼同法再提取1次,合并2次提 取液.?沉淀:操作同1.3.1.1.?脱脂,干燥:操作同 13.1.1 74黑龙江八一农垦大学第23卷 1.3.2提取,激活条件的单因素试验 以上三种工艺中,提取与激活技术是关键因素, 无论哪种工艺,都需要提取与激活工序,只是先后顺 序或同步进行的 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 不同,因此本实验以工艺三为 例,研究包括溶剂(水,稀乙醇,稀丙酮和稀异丙醇), 提取/激活温度,pH值,提取时间,沉淀剂种类. (1)提取溶剂种类?将100g冻猪胰绞碎成胰 浆,在搅拌情况下分别加入200mL蒸馏水,25%乙 醇,10%丙酮,7.5%异丙醇(预冷至4?),并加入保护 剂(分别加1.0%的氯化钠,甘油)和激活剂(原料量 0.2%CaC12,1.0%胰酶原粉),然后用30%盐酸调节 pH5.5,于20?保温提取激活4h,过滤,滤饼同法再 提取1次,合并2次提取液.?将预冷至0,5?的 95%乙醇加入提取液,使乙醇浓度达到75%,放置冷 冻使其沉淀完全,过滤,收集沉淀,压干即得粗制胰 酶.?脱脂,干燥:取粗制品置于循环脱脂器中,加入 丙酮脱脂,直至无脂肪为止.在40?以下鼓风干燥, 称重计算总收率,测定酶活. (2)提取与激活温度以25%乙醇为提取剂,其 它条件同(1),将提取/激活温度设置为10,15,20, 25,30,35clC等6个梯度. (3)提取与激活时间以25%乙醇为提取剂, 20?保温提取激活,其它条件同(1),将提取/激活时 间设置为2,4,6,8,10h等五个梯度. (4)提取与激活pH值以25%乙醇为提取剂, 20?保温提取激活,时间4h,其它条件同(1),将提 取/激活pH值设置为2.5,3.5,4.5,5.5,6.5,7.5等6 个梯度. (5)沉淀剂种类筛选以25%乙醇为提取剂, 20?保温提取激活,时间4h,pH5.5,其它条件同 (1),将预冷至4?的95%乙醇,丙酮,异丙醇,壳聚 糖,PEG4000,PEG6000(后三者为配置好的浓溶液) 分别加入到活化提取液中,使其相应分别达到70%, 60%,60%,0.2%,15%,15%的浓度(按提取液体积 计).白加人沉淀剂后,应注意观察沉淀效果,并记录 完全沉淀的时间. 1.3.3胰酶制备工艺条件的优化 根据上述实验的结果,采用工艺流程三,对提取 和激活时间,pH,温度,沉淀剂种类四因素,每个因素 设置三个水平,选用正交表(3)进行实验,以选出 最佳水平组合,使三酶活力和收率达到较理想的效 果,因素水平设置见表1. 表1正交实验L(3)因素水平 Table1Thefactorsthelevelsoforthogonaltestk(3) 1.4胰酶的活力及品质测定与方法 胰酶活力及相关品质(脂肪残留,干燥失重),测 定参照中国药典【",灰分测定参照《食品分析与感官 评定》灰分的测定方法进阍.收率的计算公式为:收 率(%)=干燥胰酶粉重量/所用猪胰脏重量MOO. 1.5数据处理 采用Excel进行数据处理(方差分析)后,运用最 短显着极差法(SSR法)进行处理问的多重比较,以 标注字母法表示最终分析结果. 2结果与分析 2.1不同工艺路线的对胰酶活力和收率的影响 三种不同的工艺的差别在于酶激活和提取是 否同时进行,以及分步进行的先后顺序.从表2可 知三种工艺所得产品三酶活力均明显高于我国药 典规定的最低限值(胰蛋白酶,600U?g,,胰淀粉 酶,7000U?g,,胰脂肪酶,4000u?g),在实践中均 可应用,但工艺一(先激活后提取)所得胰酶粉的三 酶活力和收率整体上较工艺二(先提取后激活)和工 艺三(提取激活同时)的明显低,另外工艺一和工艺 二的生产周期超过30h,而工艺3的在20h左右. 2.2提取溶剂种类胰酶活力和收率的影响 不同提取剂对猪胰酶的提取都能达到较好的效 果(表3),酶活均能达到国内商用胰酶的要求,但蒸 馏水自溶提取的三酶活力和收率较低浓度有机溶剂 (乙醇,丙酮和异丙醇)的明显要低,且收率最低.在 第1期魏文毅等:猪胰脏中胰酶的制备新工艺技术研究75 实验所用的3种有机溶剂中,它们对胰淀粉酶和胰 脂肪酶的活力无显着影响,但对胰蛋白酶的活力的 影响具有极显着性的差异,其中7.5%的异丙醇提取 的产品胰蛋白酶活最高.从收率来看,不同提取剂之 间也具有不同的差异,10%的丙酮收率最大,25%的 乙醇与7.5%的异丙醇相当. 表2不同工艺路线对胰酶的三酶活力,收率及其它品质的影响 Table2Effectsofdifferentprocessroutesonthethreeenzymeactivity,yieldandotherindicato rsofpancreatin 注:表中每列数据旁的上标字母表示在处理组内的差异性,其中大写字母表示在a=0.01水平的极显着差异,小写字母表示在 a=0.05水平的显着差异;凡具相同字母表示差异不显着,不同表示差异极显着或显 . 着;下表类同 表3不同提取剂对胰酶的三酶活力,收率及其它品质的影响 Table3Effectsofdifferentextractionsolventonthethreeenzymeactivity,yieldandotherindi catorsofpancreatin 2.3提取激活温度的影响 在提取时间不变的情况下,温度的变化对三酶 活力和收率的影响较大影响(表4).当温度超过 20ocH~,三酶活力都随温度升高而呈降低趋势;当温 度低于20?时,随着温度降低,三酶活力也降低,其 中蛋白酶和脂肪酶活力变化幅度不大,而淀粉酶活 力变化较大.另外,提取激活的温度越高,收率越低. 因此,单从温度来讲,要同时保持较高的酶活和提高 收率,在提取激活过程中应维持相对较低的温度 (20+5) 表4不同提取激活温度对胰酶的三酶活力,收率及其它品质的影晌 Table4Effectsofdifferenttemperatureofextractingandactivatingonthethreeenzymeactivit y, yieldandotherindicatorsofpancreatin 2.4提取激活时间的影响 提取激活时间对胰酶粉的三酶活力和收率的影 响结果见表5.从整体水平来看,时问过短,胰蛋白酶 未被充分激活,胰淀粉酶和脂肪酶为完全溶出,活力 较低,但收率高;时间过长,酶自身降解,不但酶活降 低,收率也降低.因此,单从时间来考虑,要同时保持 较高的酶活和提高收率,时间应在4-6h之间比较适 宜. 76黑龙江八一农垦大学第23卷 表5不同提取激活时间对胰酶的三酶活力,收率及其它品质的影响 Table5EffectsofdifferenttimeofextractingandactiVating0nthethreeenymeactivity. yieldandotherindicatorsofpanereatin 2.5提取激活pH的影响 提取/激活pH对胰酶粉的三酶活力和收率的影 响结果见表6.从实验结果来看,pH过高或过低都会 降低酶活,但对收率的影响不大.当pH从2.5到5.5 时,三酶活力大幅度升高,但酶活力最高时,收率最 低,酶活力较低时则收率较高.因此,单从pH来考 虑,要同时保持较高的酶活和提高收率,pH在 4.5,5.5之间比较适宜. 表6不同提取激活pit值对胰酶的三酶活力,收率及其它品质的影响 Table6EffectsofdifferentpHofextractingandactivatingonthethreeenzymeactivity,yielda ndotherindicatorsofpancreatin 2.6沉淀剂种类的影响 从表7可知,实验所用沉淀剂中,70%乙醇的三 酶活力最高.高浓度有机溶剂作为沉淀剂所得产品 的三酶活力和收率在整体上高于有机高分子的.其 中,0.2%壳聚糖和15%PEG4000沉淀时的蛋白酶活 力与60%异丙醇的相当,0.2%壳聚糖沉淀时的脂肪 酶和淀粉酶活力在所有处理中最低,略微高于我国 药典的规定,15%PEG4000沉淀时的脂肪酶活力与 60%异丙醇和60%丙酮的相当;15%PEG6000沉淀时 的蛋白酶和脂肪酶活力除比70%乙醇的分别低 803u?g,,667U?g,,比其它的都高,但淀粉酶活力最 低,只比药典规定的高438u?g,. 表7不同沉淀剂对胰酶的三酶活力,收率及其它品质的影响 Table7Effectsofdifferenttypesofprecipitatingagentonthethreeenzymeactivity,yieldando therindicatorsofpancreatin 第1期魏文毅等:猪胰脏中胰酶的制备新工艺技术研究77 在实验中发现,有机溶剂在4?下完全沉淀,大 约需要10,15h,而有机高分子物质一旦加人,立即 产生沉淀,在常温下1-2h就能完全沉淀. 通过单因素实验结果表明,三种工艺路线都可 用于胰酶的制备,但从酶活力和收率以及生产周期 来考虑,工艺三最适宜.从单个因素来看,提取剂种 类中低浓度有机溶剂提取蒸馏水自溶提取要好,提 取激活温度以20(?左右,时间4,6h,pH4.5,5.5为 宜;沉淀剂以70%乙醇为最好,高分子有机絮凝剂沉 淀的胰酶活力较高浓度有机溶剂的相对较低,但亦 能达到我国药典的规定标准. 2.7正交实验结果与分析 从表8,表9可知,影响胰蛋白酶和淀粉酶活力 的因素的主次顺序是一样的,即温度(A),pH(B),时 间(c)和沉淀剂种类(D),其中B,c的水平还是一致 的,但最主要的因素和最次要因素的水平有差异;影 响胰脂肪酶活力和胰酶收率的主要因素pH和提取 激活时间.综合考虑影响各指标的因素主次关系和 因素水平的最佳组合,选出最佳因素水平组合为 AB2C,D,即提取激活温度20?,时间6h,pH5.5,沉 淀剂0.2%的壳聚糖. 表8正交试验L,f3)结果 Table8Resultsoforthogonaltestk(3) 采用相同的工艺路线,在实验得出的最佳因素水 平条件下,做了三批实验加以验证,结果(见表10)说 明因素水平的条件是可行的,胰蛋白酶,胰淀粉酶和 胰脂肪酶的活力分别是我国药典规定的6倍以上. 表1O验证实验所得胰酶的三酶活力,收率和其他指标 Table10Thethreerenzymeactivity,yieldandotherindicatorsofpancreatincomefromverific ationexperiments 3结论责篓 通过对从猪胰中提取胰酶的工艺进行探讨,确保护剂(分别加原料量1.0%的氯化 钠,甘油)和激活 78黑龙江八一农垦大学第23卷 剂(原料量0.2%CaC1:,1.0%胰酶原粉),在温度为20? 1?,pH为5.5的条件下提取激活6h后过滤,向滤 液中加人0.2%壳聚糖于4?或常温条件下沉淀胰酶 (约2h),过滤取沉淀,用丙酮(预冷至4?)脱脂, 4O?下真空干燥,粉碎即得胰酶粉.胰酶制品的胰蛋 白酶,胰淀粉酶,胰脂肪酶的酶活力分别达3892, 45551,27239U?g,,为中国药典所规定的最低酶活 的6倍以上,平均收率12.63%,同时胰酶制品的其他 指标也符合要求. 研究的制备胰酶的优化工艺具有工艺简单,提 取效率高,产品的酶活力和其他指标满足要求,成本 低,安全性高,生产周期短的特点,有良好的实践推 广应用价值.从实验效果来看,聚乙二醇对胰酶的沉 淀具有一定的效果,关于该物质对酶活的影响有待 进一步研究. 参考文献: [1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药 典(二部)[S].2000:735—737. [2]赵小兰.胰酶制备工艺研究[Jj.青海医药杂志,2000,30 (4):56—57. [3]何执中,何执静.高活力胰酶的生产[J].中国生化药物杂 志,1994,15(6):190—192. [4]罗虹,周听.工业胰酶生产工艺的研究[J].中国生化药物 杂志,1994,15(4):283. [5]范丽.关于工业用胰酶标准的建议[n皮革化工, 1997,15(2):38. [6]何新霞,冯高德,张旭.胰酶生产工艺的研究[J]_现代应 用药学,1994,11(3):35. [7]傅渝滨,母昭德,景淑华,等.从猪胰脏中提取胰酶的优 化工艺探索[J].重庆医科大学,1995,20(4):305. [8]马罩娥,郑昌学.高活力胰酶的制备工艺的研究[J].中国 生化药物杂志,1993,65(3):11-13. [9]刘军.胰酶工艺研究[J].中国生化药物杂志,1993,64 (2):40—41. [10]林国平,何兆雄.胰脏激活提取对胰酶收率和活力的 影响[J].中国医药工业杂志,1990,21(10):433-434. [11]吴晓英,张聚宝,林影,等.胰酶制备新工艺的研究[J]. 广东药学院,2005,21(1):64—67. [12]许浩鸿.制备高活力胰酶的安全低污染新工艺[J].华西 药学杂志,2005,20(3):245—246. 113JAbboudi,MouhsineE1,Beaulieu,etal,Mothedfor producingpancreatinwhichcontainslowamountsof residualorganicsolventandproductthereoflPJ.uS 5861291. 【14jSchultze,Hans,Isolationofpancreatin【PJ.US4623624. [15]唐爱星.胰酶的絮凝沉淀分离研究[D].成都:四川大学 硕士学位论文,2005. [16]张廷红,万海清.壳聚糖提取动物胰脏中胰酶的工艺研 究[J].西南科技大学,2005(1):72—75. [17]李良铸,李明哗.最新生化药物制备技术[M].北京:中 国医药科技出版社,2000. [18]吴谋成.食品分析与感官评定[M].北京:中国农业出 版社,2002. (上接第71页) 参考文献: [1]JaimeR,LuciaN,SolangeP,eta1.Isolationandsynthesis ofthefirstnatural6一hydroximino-4-en-3-onesteroids fromthespongescinachyrellaspp[Jj.TetrahedronLett, 1997,38:1833—1836. [2]FaulknerDJ.Highlightsofmarinenaturalproductsof chemistry(1972—1999)[J].NatProdRep,2000,17:1-16. [3]肖定军,彭学东,邓松之,等.中国南海海绵Cinachyrella australiensis中(3E)一胆甾一4一烯一3,6一二酮一3一肟的结构 鉴定[J].有机化学,2005,25(12):1606—1609. [4]KrsticNM,BjelakovicMS,ZizakZ,eta1.Synthesisof somesteroidaloximes,lactams,thiolactamsandtheiranti— tumoractivities[J].Steroids,2007,72:406-414. [5]JindalDP,ChattopadhayaR,Gulers,eta1.Synthesisand antineoplasticactivityof2一alkylaminoethylderivativesof varioussteroidaloximes[J].EurJMedChem,2003,38: 1025-1034. [6]CuiJG,FanL,HuangLL,eta1.Synthesisandevaluation ofsomesteroidaloximesascytotoxicagents:Structure/ac- tivitystudies(I)[J].Steroids,2009,74:62-72. [7]CuiJG,FanL,HuangLL,eta1.Synthesisandevaluation ofsomesteroidaloximesascytotoxicagents:Structure/ae- tivitystudies(II)[J].Steroids,2009,74:989—995.