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首页 拉莫三嗪对青霉素诱发大鼠痫性放电和海马区相关递质含量的影响

拉莫三嗪对青霉素诱发大鼠痫性放电和海马区相关递质含量的影响.doc

拉莫三嗪对青霉素诱发大鼠痫性放电和海马区相关递质含量的影响

张明心
2017-11-14 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《拉莫三嗪对青霉素诱发大鼠痫性放电和海马区相关递质含量的影响doc》,可适用于综合领域

拉莫三嗪对青霉素诱发大鼠痫性放电和海马区相关递质含量的影响拉莫三嗪对青霉素诱发大鼠痫性放电和海马区相关递质含量的影响ChineseModernMedicalClinical,October,'V,!拉莫三嗪对青霉素诱发大鼠痫性放电和海马区相关递质含量的影响何欣嘏王明正何巧燕梁月琴【摘要】目的观察拉莫三嗪对大鼠皮层定位注射青霉素诱发惊厥模型的对抗作用,并探讨其作用机制方法建立大鼠皮层定位注射青霉素诱发惊厥模型,观察两种剂量拉莫三嗪ig给药对青霉索诱发痈样发作的程度,海马区痫性放电的潜伏期,痫波发放频率以及痫波最高波幅的影响采用HPLC法测定惊厥大鼠海马区Glu,Asp,Gly,GABA含量的变化结果两种剂量拉莫三嗪(,mgk,ig)均可减轻大鼠惊厥发作的程度,延长痫样放电的潜伏期,减少痫波发放频率,减小放电最高波幅与模型组比较,差异均具有显着性(p,或po)而且,均能够降低大鼠海马区Glu含量,GABA含量也有所升高,与模型组比较差异均具有显着性(p,或p叭)结论拉莫i嗪可明显抑制皮层定位注射青霉素诱发的痫样发作和痫性放电产生抗惊厥作用其作用机制可能与凋节突触前膜电压依赖性钠通道,稳定神经元膜,抑制谷氨酸盐的释放及阻滞电压门控性Ca通道降低钙调性细胞毒性有关【关键词】拉莫三嗪青霉素诱发痫性放电脑内癫痫相关递质HPLCTheeffectsofLamotrigineontheepileptiformdischargeandrelatedneurotransmittersinhippocampusinseizureratsinducedbypenicillinHEXingu,WangMingzheng,HEQiaoyan,LiangYueqin(Deptofpharmacology,ShanxiMedicalUniversity,Taiyuan,China)【Abstract】bjectiveToinvestigatetheeffectsoflamotrigine(LTG)onthemodelofseizureratsinducedbypenicillinandexDloreitsmechanismofanficonvulsantactionMethodsUsingthemodelofseizureratsinducedbypenicillinlocalizedinjectedincortex,weinvestigatedtheeffectofLTGonthechangesofseizureextentandrecordedthelatencyofepileptiformdischarge,frequencyofepileptiformwave,highestwaveofhippocampusEEGThelevelsofGlu,Asp,GlyandGABAinhippocampusweredeterminedbyhighperformanceliquidchromatography(HPLC)ResultsComparedwiththemodelgroup,LTG(,mgkg',ig)couldsignificantlylightenedtheextentofseizure,prolongedthelatencyofepileptiformdischarge,redt,cedthefrequencyofepileptiformwaveandminishedthehighestwaveofhippocampusEEG(P,或P)Moreover,thelevelofGludecreasedandthatofGABAincreasedtosomedegreeinthetwogroupsofLTG(PO,或PO)ConclusionLTGcallsignificantlyinhibittheseizureextentandepileptlformdischargeinseizureratsinducedbypenicillinlocalizedinjectedincortexandinduceanticonvulsantactionTtsmechanismofanticonvt,lsantactionmightduetodecreasethereleasingofGluthroughregulatingvolageactivatedsodiumchannelanddeema~calcium,'egulatedcytotoxieitythroughinhibitir,gvolageactivatedcalciumcurrents,【Keywords】LamouiginePenicillininducedEpileptiformDischargeNeurotransmittersrelatedtoepilepsyHPLC中图分类号:R文献标识码:B文章编号:()拉莫三嗪(LamotrigineLTG)是一种二氢叶酸还原酶抑制剂衍生物,其化学本质为苯基三嗪类化合物,由Wellcome公司开发,年首次在爱尔兰上市据报道,LTG可以对抗MES和戊四氮发作,抑制由黎芦碱诱导的谷氨酸和天冬氨酸的释放…,为进一步证实LTG对化学物质诱发的癫痫发作是否有对抗作用,本文选用皮层定位注射青霉素诱发大鼠惊厥模型观察LG对痈性放电的影响,时州高效液相色谱技术(HPLC法)测定脑内Glu,GABA等癫痫相关递质的变化,从而探讨其作用机制,为合理应用该药防治癫痫提供药理学依据材料基金项目:山西省自然科学基金资助课题(N)作者单位:山西医科大学药理学教研室(山西太原)作者简介:何欣嘏女岁,硕士研究生王明正男,岁教授,硕士生导师研究方向:中枢神经药理学动物健康清沽级Wistar大鼠,体重,g,合格证号为:第号,辛皆用,单笼喂养,由山西医科大学实验动物中心提供自然光照射,换气扇通风,标准饲料喂养,自由进食和饮水实验前禁食h,实验时保持室内安静药品及试剂拉莫三嗪(Lamotrigine),英国Glaxo公司生产,批号ZJo,用生理盐水配制青霉索(Penicillin,PNC)华北制药股份有限公司生产,翼卫药准字()第号,批号U曲拉通X,(TritonX一),上海生工生物工程有限公司生产,批号A:一AMINOErHYLLISOTHIOURONIUMBROMIDE(AET),Sigilia公司生产,批号H乙腈,北京箍利精细化学品有限公司生产,批号:Pyridoxal一一Phosphate(PLP),高丝氪酸,OPA衍生试剂:均购于Sigma公司仪江弯I型一C脑立体定向仪(上海川沙花木农机厂制造)RMC型多道生理信号采集处理系统(成都仪厂制造)L色谱数据工作站(美国BeckMan仪器公中华现代医学与临床年O月第卷第期司制造)LDZ,自动平衡微量离心机(北京医用离心机厂制造)TGL一高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂制造)方法大鼠皮层定位注射青霉索诱发海马痫性放电实验实验动物分组及给药方法取Wistar大鼠只随机分为组,每组只,各组给药剂量如下:(D正常对照组(假手术组)ig等体积生理盐水模型对照组(NSPNC)ig等体积生理盐水(拉奠三嗪小剂量组ragkg(大鼠抗MES的ED),ig,(托莫嗪大剂量组ragkg(大鼠抗MES的E)),igig容量lmlg青霉索诱发惊厥模型的建立取Wistar大鼠称重并ig受试药物后腹腔注射(ip)~拉坦g,k麻醉,固定于江弯I型一C脑立体定向仪上,剪毛沿脑谁中切开头皮cm,按照包新民定位陶谱,在大鼠海马处(前囟后mm,中线旁ram,硬脑膜下mm)颅骨钻孔,将直径为mm的不锈钢电极插人相应部位并与RMOC多道生理信号采集处理系统相连ig受试药物h(LTG作用高峰期)后用微量注射器硬膜下(感觉运动皮层)定位注射青霉素U(假手术组大鼠硬膜下定能注射等体积生理盐水),当脑电图出现尖波棘波或尖(棘)慢波综合波时造模成功脑电罔记录方法将电极插入海马后,按下列脑电图参数记录采集频率:lKHz,扫描速度:msdiv,灵敏度:lmv,时间常数:,s,滤波频率:Hz,低通滤波:Hz描记正常脑电rain,并记录,rain(以排除手术创伤对大鼠脑电造成l,l勺影响)硬膜下微量注射青霉索后,连续记录脑电图rain,以每间隔rain记录一次每次记录min,共描记lh,同时舰察大鼠的行为变化观察指标行为观察指标:惊厥指标参照Racine标准将动物,厥发作的行为表现分为级级:无反应或抽搐停止I级:节律性嘴或面部捕动级:点头或甩尾级:单肢抽功级:多肢抽动或强直:V级:全面性强直一阵挛发作硬膜下注射PNC后,连续观察大鼠行为h并记录惊厥发作的潜伏期(注射PNC到首次出现动所需的时间)和发作程度以出现一V级发作为雨度发作,仪出现级或级以下为轻度发作脑电观察指标:出现尖波,棘波或尖(棘)慢波综合波时判定为痈性活动观察并统计痫性放电的潜伏期(注射PNC到首次出现痫性放电波的时间,min),放电最高波幅(my),痫波发放频率(取个lminEEG中的尖波或棘波数『j的均数作为每分钟平均痫波发放频率,次nfin)j海jAsp,Glu,Gty和GABA的测定采集及保存青霉素诱发大鼠海马痫样放电样,实验结束后(巳『】硬膜下微量注射青霉素h后)快速断头取脑冰甜上分离两侧海马组织:电子天平称取脑组织g,按:(WV)加人预冷的脑组织处理液fAETmg,加人lTIilotlX一,mlPLP(nlnlolL)toolL磷酸缓冲液(pH)配至ml】置于玻璃匀浆器中手动匀浆高效液相色谱(Highperformanceliquidchromatography,HPLC)测定色谱条件:色谱柱DiamonsiITMODS,xmm,percolunmCI~mm,柱温,流速mlmin,监测器RIF样品测定匀浆液在~C低温离心机中rmin一离心rain取上清液l加内标物高丝安酸(ItoolL)Op,,乙腈,旋涡混匀器混匀后,低温离心机中rrain离心min,取上清l加lOPA衍生min进样,测定Asp,Glu,Gly和GABA含量统计方法结果均以Is表示,组问均数比较采用t检验,率的比较采用x:检验全部数据均使用SPSS统计软件处理结果拉奠三嗪对青霉索诱发大鼠惊厥发作及脑电变化的影响行为学变化正常对照组大鼠未出现痫性发作模型对照组大鼠(只)在注入PNC后开始发作即表现为节律性四肢同时抽动(级),持续至实验结束(h)两剂量拉莫三嚎组均可以减轻青霉索诱发大鼠痫样发作的程度小剂量组(ragkg)有只(,P)大鼠出现级以下的轻型发作平均持续min恢复正常:其余只大鼠未见惊厥发作大剂量组(mgkg)有只大鼠(O,OO)出现轻型发作,均未发展为重型发作(P),发作平均持续rain后转为正常,其余只大鼠未见惊厥发作(Tab)TabEffectsofLTGontheextentofconvulsioninpenicillininducedratsKs=,POPOOvsNSPNC脑电图变化正常对照组大鼠海马脑电图以tmin或ltrain的,B波为主要表现,无明显节律性,波幅mV模型对照组大鼠硬膜下注入PNC()s后开始出现痫波多为棘波和尖波痫波发放频率为()train,,波幅最高可达()mV两剂量拉莫三嗪组大鼠海马EEG与模型对照组相比,痫样放电潜伏期延长痫波发放频率减少,放电最高波幅减小(Or,Tab,Fig,,)TabEffectsofLTGonepileptiformdischargelatency(EDL),frequencyofepUeptiformwave(FEW)andhighestwnve(HW)ofhippocampusEEGofseizureratsX~s,n:,PPVSNSPNCChineseModernMedicalClinical,October,Oo,Vo…NoFigHippocampus(Hipp)electroencephalography(EEG)ofnormdratslIlIl童FigTypicalEEGofconvulsioninpenicillininducedratsI'herearemanyspikewavesandsharpwavesafterPNCgivenbysubduralFigThefrequencyofepileptiformwaveisdecreasedandthehighestwaveisloweredwhenLTG(,mgkg一)WeregivenigbeforeLTGwasinjectedbysubdura拉莫三嗪对海马区GIu,Asp,Gly,GABA含量变化的影响Tab显示模型对照组较正常对照组Ght含量升高(PO),GABA含量降低(P),Asp,Gly含量无明显变化(PO)与模型对照组相比,两剂量拉莫三嗪组大鼠海马区Glu含量均明显降低(mgkg组,Pmgkg组,PO)GABA含量均降低(P),但Asp,Gly含量无明显变化(P)与正常对照组比较,两剂量拉莫i嗪组种神经递质含量的变化均无统计学意义(P)TabEfrectsofLTGontheneurotransmitterslevelofhippoeampusinseizureratsXjn=P,P们VSNSPNCPO,#P(OVSNS讨论中枢神经递质大部分为氨基酸类,分为兴奋性氨基酸和抑制性氨基酸Glu和Asp是中枢神经系统中主要的兴奋性氨基酸而GABA和Gly则是主要的抑制性氨基酸肖兴奋性氨基酸释放异常增多和,或抑制性氨基酸释放异常减少均可改变神经网络的兴奋一抑制平衡,成为痫样电活动的分子学基础MeldrurdZ~k为Gh,和Asp可能与癫痫发作的启动和传播有荧本研究发现拉莫三嗪可明显降低青霉素诱发惊厥大鼠海马区Glu的含量,有学者认为,L'rG的抗痫作用机制主要是阋节突触前膜电压依赖性钠通道,稳定神经尤膜,抑制谷氨酸盐的释放本研究还发现Glu含量明显降低的同时GABA的含量也有不同程度地增加机制目前尚不十分清楚,可能与其不抑制GABA的释放有关ll有学者认为l拉莫三嗪可能存在更复杂的作用机制青雹索诱发大鼠惊厥发作模型与人类癫痫小发作相似青霉索是GABA受体拮抗剂,它引起的发作可能是由于它与GABA受体结合阻断了与受体偶联的氯离子通道,从而阻断了GABA引起的突触后抑制的结果青霉索诱发惊厥模型癫痫灶的特征是:自发性发作期间放电在这期间,放电灶神经元显示巨大的,阵发性去极化漂移(paroxymaldepolarization,PDS),PDS的发生与青霉索致痫灶同步,它的产生可能是由于癫痫灶内神经元产生反复的去极化引起的持续时间较长的高波幅和高频率棘波放电PDS是癫痫电生理学的主要特征之一,脑电图记录到的棘波就是PDS有关动作电位的反映在PDS发生过程中,Ca起着关键作用【olCa细胞内流是癫痫发病的摹本条件电生理现象中见到PDS往往提示细胞膜Ca:通道活性增高和细胞内Ca沉积『lI细胞外Ca减少对痫样放电的同步扩散及发作时放电的保持起重要作用:细胞内Ca浓度升高一方面町引起细胞的去极化产生异常放电而导致癫痫的产生及迅速传播,另一方面细胞内聚集的大量Ca可以增加突触前膜释放Glu的敏感性从而加剧发作的恶性循环旧近年研究表明,LTG可以作用于电压门控性Ca通道,减少突触前膜Ca:内流以浓度依赖方式抑制一AP诱导的皮质纹状体Glu的释放,还能减少因膜去极化产生的细胞内游离Ca浓度增高『本试验研究发现,LTG可以明显抑制青霉素诱发的惊厥发作和痫性放电,由此推测,阻滞电压门控性Ca:通道降低钙调性细胞毒性从而减少痫样放电的同步化扩散可能为其抗瘢痫的又一重要作用机制之,综上,拉奠三嗪可以显着抑制青霉索诱发的惊厥发作但是否能对抗其它化学物质诱发的痫样发作有待于进一步研究【参考文献】【Dichte,MA,BrodieMJNewantiepilepticdrugsNEnglJMed,,():【】包新民,舒斯云大鼠腔定位图谱M北京:人民卫生出版社【RacineRJModifieationofseizureactivitybyelectricalstimulation:lI,MotorSeizuremElectrencephalgrClinNeurophysiol,,:,【MorleyP,HoganMJ,HakinAMCalciummediatedmechanistnsofischemicinjuryandprotectionfJBrainPathol,:,】MedrumBSTheroleofglutamateinepilepsyandotherCNSdisordersJNeurology,,:SfWangSJ,TsaiJJ,GeanPWLamotrigineinhibitstetraethyammoniuminducedsynaptlcplasticityintheratamygdalaNewosclence,,():【】Ketter,TerenceAMDManji,HusseiniKPotentialmechanismsofactionofLamotrigineinthetreatmentofbipolardiso,'dersJournalofClinicalPsychopharmacology,,():,主垡垫堕堂鱼盛旦釜鲞箜塑PisaniF,PedaleS,MacaioneVNeuroprotectiveeffectfLamot,igineandremacemideonexcitotoxicityinducedbyglutamateagonistsinisolatedchickretinaExpNeurol,,():~Adams,VictorAdamsand"VictorsPrinciplesofNeurologythedition北京:科学出版社,,(AntoniadisA,mailerWE,WollertUInhibitionofGABAandbenzodiazepinereceptorbindingbypenieillins【JNeurosei,Lett,,:】解学孔癫痫病学,第版北京:人民卫生出版社,~Cong,Shen,GuoGuangZhang,YongQuan,Zhou,Yuanbeta卜AgkjstrodotxjninhibitionofCa:dependentreleaseofglutamate,aspartate,glycineandgammaaminobutyricacidfromcerebrocorticalsynaptosomesfollowingitsbindingtosynapticmembrance,():~】WangSJ,SihraTS,GeanPWLamotrigineinhibitionofutamatereleasefromisolatedcerebrocoticalnerveterminals(synaptosomes)bysuppressionofvoltageactivtedcalciumchannelactivityNeuroreport,,():原发性女性尿道黑色素瘤(附例报告)金辛良叶敏徐丹枫谭剑敏朱晓明'张涛亮周伟民,许嘉骏【摘要】目的探讨女性尿道原发性恶性黑色素瘤的临床特征及治疗方法方法对例女性原发性恶性黑色素瘤进行临床病理分析及随访观察结粜例患者均为尿道外口肿物就诊例因术前诊断不清,仅作局部切除其中例术后个月死于肿瘤复发l例仍在随访中另例行仝尿道切除,双侧腹股沟淋巴结清扫及永久性膀胱造瘘结论女性尿道原发性黑色素瘤恶性度高,临床易误诊,早期诊断的主要依据是病理学探查及时规范手术是提高患者生存率的主要方法【关键词】黑色索瘤尿道肿瘤原发性女性Primarymelanomaofthefemaleurethra(Reportofcases)JinXinliang,YeMin,XuDanfengl,eta(DepartmentofUrology,ShanghaiChangZhengZhabeiHospitaShanghai,,China)【Abstract】ObjectiveTostudytheclinicafeaturesandtreatmentoftheprimarymelanomaofthefemaleurethraMethodsFourcasesofprimarymelanomaofthefemaleurethrawetinvestigatedbyclinicpa【hlcalanalysisandsurveillanceResultsFourcaseseiderfemalepatientspresentedgraduallyenlaringurethralmasses,OnewasmisdiagnozedasurethralcaruncleTotalurethretomyandbilateralinguinallymphnodedissectionandcystostomywasdoneintwocasesOnepatientdiedoftherecurrenceofthediseasemonthsaftelinitialdiagnosisandlaoealresectionConclusionPrimarymelanomaofthefemaleurethraishighlymalignantandeasilymisdiagnosedflsotherdiseasesPathologicalexanfinationisthemostimpoutantamthodforearlydiagnosisTimelyandproperoperationsshouldbecarriedooi'improvingthepatiectsqualityofllfe【Keywords】MelanomaUrethralneoplasmsPrimaryFemale中图分类号:R文献标识码:A文章编号:(l原发性女性尿道黑色素瘤临床罕见患者常表现为尿道口有肿块,初诊时常易误诊为尿道肉阜目前对本病病因及发病机制尚未清楚我院从年月一年l月共收治例原发性女性尿道黑色索瘤现报告立下:临床资料例岁冈内裤上有血迹个月后来院就诊于年月人院患者无尿频,尿急,尿痛,肉眼血尿及排尿不畅,尢畏寒,发热入院体检发现尿道口有一约cmxcm黑褐色新生物,质地脆,易出血,周边僵硬,双侧腹股沟淋巴结未肿大误诊为尿道肉阜,在局部阻滞麻醉下行尿道肉阜切除术术后病理检查报告:尿道恶性黑色索瘤周后再行全尿道切除,双侧腹股沟淋巴结消扫,淋巴结未作者单位:上海市长征医院闸北分院泌尿外科()上海第二医科大学附属新华医院泌尿外科作者简介:金辛良,男岁,主任医师见转移,永久性膀胱造瘘术术后给予化疗,术后个月死于脑血管意外例岁尿道口发现肿物月余,伴有间歇性出血在外院门诊未作体检,给予止血及抗炎治疗,症状无好转于年O月入院患者无尿频,尿急,尿痛症状,无疼痛不适人院体检见尿道外口有一约cmx,cm大小的新生物,大部分呈黑褐色,表面欠光滑,质地僵硬,双侧腹股沟淋巴结无肿大在硬脊膜外阻滞麻醉下行全尿道,阴道前壁和小阴唇切除术,双侧淋巴结清扫术术中见肿物位于尿道外口与阴道之间,偏右约cmxcm大小,蒂较宽,质地脆,与周围组织无明显分界淋巴结阴性,永久性膀胱造瘘术术后病理报告:尿道恶性黑色瘤术后给化疗和放疗,术后I个月死于肿瘤复发例,岁因排尿有分叉个月,排尿时有刺痛症状,并有血尿约周于年月日人院患者无尿频,尿急,排尿困难无畏寒,无发热人院检查:腹股沟淋巴结未

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