CTAB 提取DNA配方[指南]

CTAB 提取DNA配方[指南]CTAB 提取DNA配方[指南] CTAB 十六烷基三甲基溴化铵别称:西曲溴铵、溴棕三甲基铵、溴烷铵，鲸熔三甲基溴化铵;CTAB;CTMAB;HTAB;CTABr;阳性皂英文名 Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide;Cetrimonium Bromide 分类季铵盐熔点:250-237? 溶解性:13 g/L (20?C) 密度:1.3220 g/ml 分子式 C16H33(CH3)3NBr 分子量 364.446 CTAB 提取缓冲液:100 mmo...

CTAB 提取DNA配方[指南] CTAB 十六烷基三甲基溴化铵别称:西曲溴铵、溴棕三甲基铵、溴烷铵，鲸熔三甲基溴化铵;CTAB;CTMAB;HTAB;CTABr;阳性皂英文名 Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide;Cetrimonium Bromide 分类季铵盐熔点:250-237? 溶解性:13 g/L (20?C) 密度:1.3220 g/ml 分子式 C16H33(CH3)3NBr 分子量 364.446 CTAB 提取缓冲液:100 mmol/L Tris-HCl (pH8.0)，20 mmol/L EDTA-Na2，1.4mol/LNaCl(如表 1)，2% CTAB，使用前加入0.1%(V/V)的β-巯基乙醇。提取DNA配方 CTAB为十六烷基三甲基溴化铵， CTAB提取缓冲液的经典配方 Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏; EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性; NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中; Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。 CTAB 4g NaCl 16.364 g 1M Tris-HCl 20ml( PH8.0) 0.5M EDTA 8ml，先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇(400ul)氯仿-异戊醇(24:1):先加96ml氯仿，再加4ml异戊醇，摇匀即可。提取RNA配方 2% CTAB(W/V) 2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP(W/V) 100 mM Tris-HCl(pH8.0,DEPC处理的水配置) 25mM EDTA 0.5g/L 亚精胺Spermidine 2.0M NaCl，2%巯基乙醇(V/V，使用前加入) 由于在高温灭菌条件下，Tris-HCl要和DEPC发生反应，所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC 处理的水配制即可。 CTAB法提取植物DNA CTAB提取缓冲液配方:1mM Tris-HCl ( PH8.0);20mM EDTA( PH8.0);1.4 M NaCl;2% CTAB(W/V);2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP(W/V)。 (1)取材料(3片叶)移入1.5 ml Eppendorf管中，迅速加液氮研磨成粉末状; (2)加入600 μl的CTAB提取缓冲液(CTAB在65?水浴预热)，加3 μl β-巯基乙醇 (0.2-1%)，混匀，60-65?水浴30min-1h。每5min轻轻摇动几次，开始可以颠倒，后期轻缓; (3)30min后，加入1/3V的5M KAc 混匀冰浴30min，4?，12000 r/min，离心15 min; (4)小心吸取上清液，移入新的1.5 ml Eppendorf管中，加入等体积的冷冻氯仿-异戊醇 (24:1)，混匀，4?，12000 r/min，离心10 min。 (5)重复步骤(4)1-2次，以蛋白层不出现为止; (6)取上清，加等体积冷冻异丙醇，混匀，-20?沉淀40min，4?，12000 r/min，离心10 min; (7)弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀1-2次，12000 r/min，离心10 min; (8)室温下干燥后(一般干燥5-15 min)，溶于20-30 μl去离子水中，加1μl RNase (10 μg /μl，终浓度10μg /ml)，37?水浴保温30 min，于-20?或者-70?下保存备用。若要纯化DNA，可做下列操作 (9)加入等体积冷氯仿-异戊醇(24:1)，混匀，4?，12000 r/min，离心10 min。 (10)取上清，加1/10V 3M NaAc(pH5.2)和2V冷冻无水乙醇，混匀，-20?沉淀40min，4?，12000 r/min，离心10 min; (11)弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀1-2次，12000 r/min，离心10 min;

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