【doc】甜（辣）椒导入CMV卫星RNA互补DNA
甜(辣)椒导入CMV卫星RNA互补DNA
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周艺1992,19(2)184--18~
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甜(辣)椒导入CMV卫星RNA互~bDNA
的植株再生
董誊枝妻春晓冯兰香郭家珍
(中国农业科学院蘸寨花卉研究所,北京10~081)
关-一苎曼垄燃,墨里皇鲤鱼!葶基植株6J.;;
TRANSGENICPEPPERPLANTS(CAPSICUMANNUUML.) CONTAININGCMVSAT-RNAcDNA
DongChunzM,JiangChunx~aoJFengLanxiang,andGuoJiazhen
(Insfifuteo/VegetablesandFlowers,ChineseAcademyo/
AgriculturalSciences,Beijing100081) KeywordsCMV)SatelliteRNA)Capsicum口?l"mL.ITransgenic plant
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甜(辣)椒(Capslc~m0MHmL.)是我国主要蔬菜之一,黄瓜花叶病毒(简称 CMV)和烟草花叶病毒(筒称TMY)常造成甜(辣)椒的严重危害.经过多年的育种 实践,人们已经有了较好的抗TMV育种材料.面对CMV,目前还没有可利用的自然抗
源和有效的防治措施.国内外在利用农杆菌(Agrobacteriumtume/acien*)进行甜(辣)
椒的转化研究B有报道.W.Liu等(1990)获得了抗卡那霉素的芽组织并有GUS基因
表
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达l王玉文等(1991)检测刘GUS基因在甜椒子叶上的瞬问表达.奉试验试图利用
农杆菌导入抗CMV基因(CMV卫星RNAESFDNA),以提高甜(辣)椒的抗CMV 能力.
1.无菌苗的获得甜(辣)椒品种89—1与83—3种子(由本所青椒组提供), 7o%酒精畏约4Os后,用1%敬氯馥钠溶液表面灭篙2Omin,最后用灭菌水冲洗3欢,播
于1/2Ms基本培养基上,在25?2?,每日光照l6h,光强为20001x条件下,生长1o一
12天,待用.
2.基因导八与植辣再生率试验所用质粒及农杆茸由中国科学院微生物研究所提 供,如图所示,含35s启动予,CMVSat-RNAeDNA,NOS终止予和卡那霉紊标记基 因将台CMV卫星RNA互~I,DNA农杆菌的离心抗淀,用MSO稀释至ODm=o?3一o?6
溶液符用.切取带叶柄的子叶,在上述农杆菌液中浸约5s,转入MBZG培养基 ?奉试所用表秆一由中胃科学嚏擞生钾研究所巍曼?车所暂持梅,强皇玺商恚参加T部丹工作,特此一并幕
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2期董春技等;甜(辣)椒导3,.CMV'0星RNA:~,DNA的植株再生185 '—'———.'''—————
—————,___一———————————____———?,______一 (MS(元机盐)+B5(有机街)4-ZT2mg/L4-GAa2mg/L),不加滤纸,将浸菌后的子叶 插入培养基o-3era左右,培养3天,转A.MBzG培养基,附加羧苄青霉素500mg/L与
卡那霉素50mg/L,每培养皿放8—9个外植体.培养3—4周后再转入同种培养基,
只
将羧苄青霉素浓度降至200mg/L.当分化的芽长到1—1.5era,切下转入生根培养基 (1/2MS(无机盐)4-B5(有机曲)4-IAA0.5mg/L+2%活性炭],培养一个月左右, 多数芽均可生根移栽.
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186研究简报】9卷
星RNA互~bDNA的表达产物,从而证实己获得了89—1甜(辣)椒品种的转基因植 株.转化频率(获得的转基因植株数/浸菌总外植体数×100%)在1左右.从总体情况 看,转化的频率较低且不稳定,这可能一方面是农杆菌本身对甜(辣)椒的侵染能力较
差,另一方面与植物材料的生长状况有关.在植物材料的最佳受苗态等方面尚需进一步
深入研究.前,秩得的89—1甜(辣)椒转基因植株,在温室中生长正常,并已开花 结实(图2,4'.由于R.代抹数有限,本试验未进行抗CMV试验比较,但从Ro代植 株用不含CMV卫星核酸的强毒株接种后的发病情况看,症状有所减轻.今后将继续对
RI代植株进行抗CMV试验比较.
囤2甜(辣)椒导入CMV卫星RNA互补DNA的植株再生
1一寨丙烯酰胺怯植转基因甜(薄)擞植株中的卫星RNA,其中:1阳性对照一古卫星RNA
8阴性对黑.无卫星RNA4株再生植抹.不音卫星RNA2,5古有卫星RNA的转基因檀株?
所指为卫星RNA莆2,莆叶柄子叶在选择培养基上分化8.再生植株移替八土4.转基因
植株培实.
F.2Traasgenlcpper~laats(CapsicumumL,)eontalningCMVsat—RNAeDNA 1.PAGEf0rdefectionofsatelliteRNAintraasgeaie~~pperplants1Posltlvecon— trolwithsat-RNABNegativecoatrolwithoutsat—RNA4Regenerated91ant
wlthtmtsat-RNA2,5Traasgeaicplaatswith~-at-RNA?sat—RNA?DiHeren-
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