胶束增敏荧光法测定银杏叶片剂中总黄酮醇苷

胶束增敏荧光法测定银杏叶片剂中总黄酮醇苷 胶束增敏荧光法测定银杏叶片剂中总黄酮 醇苷 rf=I卫生检验杂志2008年2月第18卷第2期 ChineseJournal(,fHealthLaborat,ryTechnology,Feb2008;Vol18No2285 胶束增敏荧光法测定银杏叶片剂中总黄酮醇苷 孙雪花,马红燕,柴红梅,田锐,花蓓 (延安大学化学与化工学院,陕西延安716000) 【化学测定方法】 [摘要]以槲皮素为对照品用荧光法测定药物银杏叶片制剂中总黄酮醇苷的含量. 实验 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明:Al(?)与槲皮素作用可 产生强的荧光,加入十二烷基硫酸钠(SDS)后,荧光强度进一步增强.槲皮素在 0.068,6.76ml范围内与其荧光强 度呈良好的线性关系,其线性叫归方程为l,=5.8658X+5.3925,相关系数r=0.9936, 检出限为0.036ml.本方法用 于银杏叶片制剂中总黄酮醇苷含量的测定,其叫收率为99.2%,100.8%,结果较 为理想. [关键词]银杏叶片;银杏总黄酮醇苷;荧光光度法 号]1004—8685(2008)02—0285—02 [中图分类号]0657.32[文献标识码]A[文章编 Determinationoftotalflavonolglycosidesinginkgoleaftabletsbymicellarenhancedfluo— rimetry SunXue—hua,MaHong—yah,ChaiHong—mei,Tian,Rui,HuaBei (CollegeofChemistryandChemicalEngineering,YananUniversity,Yanan716000,China) [Abstract]ThefluorimetrywasappliedtodeterminethetotalflavonolglycosidesquantityofGinkgoleaftabletsandquercetin wasusedasthecomparison.Theexperimentalconditionswereoptimizedasfollows:onthebasisofreactionofquercetinwithalu— mimniumiontoformhyperfluorescentmaterial,andsurfaceactiveagentSDScouldimprovethefluorescenceofquercetin—alu— minium(m)system.Tilelinearrelationshipoffluorescenceintensityandquercetinconcentrationwasintherangeof0.068, 6.76m1.rhedetectionlimitwas0.036m1.Therecoverywasintherange99.2%, 100.8%.Thissimplemethodcanbe appliedtotheanalysisofthetotalflavonolglycosidesquantityinGinkgoleaftabletswithsatisfactoryresults. [Keywords]Ginkgoleaftablets;Totalflavonolglycosides;Fluorimetry 银杏叶片为银杏叶提取物制剂,主要成分为黄酮醇苷和 萜类内酯,具有抗氧化,清除体内过剩自由基,扩张脑膜动脉, 改善脑血循环功能,改善心肌缺血,提高人体免疫力等功效. 银杏叶制剂在精神专科医院广泛用于治疗老年痴呆,脑缺血 和记忆力减退等疾病.现有的银杏叶制剂的质量 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 方法有 紫外分光光度法0.-J,高效液相色谱法等.而荧光光度分析 法尚不多见,本文发现在表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)的 存在下,于pH=3.50的HAc—NaAc缓冲溶液中,槲皮素分别 与AI(IlI)络合具有强荧光性,因此,以槲皮素为对照品,用此 法测定药物银杏叶片中的黄酮苷元含量并换算成总黄酮醇苷 的含量(总黄酮醇苷=槲皮素含量×2.51),结果较为理想. 1材料与方法 1.1仪器与试剂 960型荧光分光光度计(上海第三分析仪器厂);pHS一3C );KQ一100DB型数控超 数字多功能酸度计(上海雷磁仪器厂 声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司). 槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所):精密称取经 [基金项目]陕西省延安大学校内簟项基金(YDK2006—25) 孙雪花(1975一),女,住职研究牛,讲师,主要从事 [作者简介] 分析化学教学和科研r作. P0干燥过夜的对照品0.0302g,溶入少量95%乙醇,转移定 ,配成槲皮素浓度为1.0× 容至100ml容量瓶中,摇匀 10.mol/L贮备液,使用时用乙醇稀释成1.0×10mol/L槲 皮素的工作液. Al(?) 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 溶液:准确称取0.8785g硫酸铝钾(KA1 (S0)?12HO)于小烧杯中,用蒸馏水溶解,转移到250ml 容量瓶中,用蒸馏水稀释到刻度,即配成Al(?)浓度为 100ml贮备液;使用时稀释成10ml. 十二烷基硫酸钠(SDS):10g/L水溶液;所用其余试剂均 为分析纯,水为二次蒸馏水. 1.2实验方法 在10ml比色管中,依次加入10g/ml的Al(?)标准溶 液1.00ml,适量的槲皮素标准溶液,pH=3.50的HAc—NaAc 缓冲液2.00ml,1%的SDS溶液2.00ml,蒸馏水定容至刻度, 振摇均匀后放置10min,用1cm比色皿,在960型荧光光度 计上于激发波长365nm,发射波长500nm处,测定其荧光强 度F值,同时做空白实验. 2结果与讨论 2.1荧光光谱 按实验方法测定槲皮素,槲皮素一铝,槲皮素一铝一SDS 的荧光强度,由图1知,槲皮素单独存在时基本无荧光,当加 286中国卫生检验杂志2008年2月第18卷第2期 ChineseJournalofHeahhLaboratoryTechnology,Feb2008;Vol18No2 入Al(?)后槲皮素与铝形成络合物产生荧光,最大发射波长 在500nm,当有适量的SDS存在时,发现槲皮素一铝的络合物 体系的荧光强度大大增强,但峰位置无明显变化. 图1发射光谱图 1一槲皮素(3.02g/m1)+AI”(对Al”+缓冲液); 2一槲皮素(3.02g/m1)+Al”+SDS(对Al”+SDS+缓冲液) 2.2酸度的影响 实验了HC1;NaAc—HAc;NaOH;NaH2PO4一Na2HPO4; NHC1一NH-HO对体系的影响.结果表明:当加入pH= 3.50的NaAc—HAc缓冲溶液1.50,3.00ml时,体系较稳定 且荧光强度值最大,选用加入2.00ml. 2.3铝用量的影响 实验发现铝标准用量在0.50,2.00ml时荧光比较恒定, 本文选用10ml的铝标准溶液为1.00ml. 2.4表面活性剂的影响 分别实验了十二烷基硫酸钠(SDS),溴化十六烷基三甲基 铵(CTMAB),乳化剂(OP),B一环糊精(p—CD),氯代十六烷 基吡啶(CPC),溴代十六烷基吡啶(CPB)等表面活性剂对体系 荧光强度的影响.结果表明,在表面活性剂用量相同的条件 下,1%的十二烷基硫酸钠(SDS)增敏作用最强,其最佳用量范 围为2.00,4.00ml,本文选用2.00ml. 2.5温度的影响 按实验方法配制溶液并加热,然后测定荧光强度,发现随 本文选用在室温下测定. 温度上升,体系荧光强度下降. 2.6时间的影响 在室温条件下,按实验方法测定不同时间的荧光强度,发 现体系的荧光强度在开始阶段随时间的增加而增加,在 10min左右体系荧光强度达最大值且趋于稳定,其后至少在 12h内基本稳定不变.因此,确定实验的最佳反应时间为 10min. 2.7试剂加入顺序的影响 按实验方法考察了试剂的加入顺序,结果发现:铝+槲皮 素+缓冲液+表面活性剂荧光信号最强,因而确定其为实验 的最佳加入顺序. 2.8络合比的测定 用摩尔比法和等摩尔连续变化法测定络合物组成比为槲 皮素:铝=1:1. 2.9工作曲线 在选定的最佳实验条件下,测得0.068,6.76ml范围 内槲皮素浓度与其荧光强度呈良好的线性关系.其线性回归 方程为Y=5.8658X+5.3925,相关系数r=0.9936.通过测定 试剂空白溶液11次,以其测定结果的3倍标准偏差计算(C= 3S./K,S.为空白溶液的标准偏差,K为工作曲线斜率)得方法 的检出限为0.036g/ml. 2.10共存组分的影响 在测定条件下,加入6.010ml槲皮素,测定的相对误 差不超过4-5%时,共存离子的允许存在量(以mg计):抗坏血 酸(51),淀粉(73),蔗糖(59),葡萄糖(106),K,Na(118), Ag(7),Ca(0.1),Mn”,Pb(2),Sr2(1),Bi”(4),Mg2 (0.3),Ge(?)(1),rri(?)(0.02),C(0.02),Ba”(2.5), Fe(10). 3样品测定 3.1样品处理 依据药典法处理样品,取四种厂家生产的银杏叶片制 剂各十片,除去包衣,精密称定,研细,取约相当于总黄酮醇苷 19.2mg的粉末,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入95%乙 醇20ml,密塞,称定重量,超声处理20min,放冷,再称定重 摇匀,过滤,精密量取续滤液 量,用95%乙醇补足减失的重量, 10ml,置100ml锥形瓶中,加乙醇10ml,25%盐酸溶液5ml, 摇匀,置水浴中加热回流30min,迅速冷却至室温,转移至 100ml容量瓶中,用95%乙醇稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤 液,即得. 3.2样品测定 精密量取四种处理好的银杏叶片溶液1.O0ml各5份,分 别置于10ml比色管中,按实验方法测定其荧光强度,由线性 再由其折算出银杏叶片 回归方程进行计算得槲皮素的含量, 中总黄酮醇苷的含量.即:总黄酮醇苷=槲皮素含量×2.51. 表1样品测定结果 1号:银杏叶片(珠州东乐制药有限公司产品批号20060724);2号:银杏叶片(山东仙河 药业有限公司产品批号o61001);3号:银杏叶分散片(湖南方盛制药有限公司产品批号 070104);4号螺杏叶片(东莞广发制药有限公司产品批号200611叭) [参考文献] [1]万胜男.分光光度法测定银杏叶片溶出度的研究[J].中华中医 药学刊,2007,25(5):1051—1052. [2]吕慧怡,范青,邓卅.不同pH介质中银杏叶总黄酮醇苷溶出度的 考察[J].中国药事,2005,19(12):750—752. [3]孙丽丽,周沫.HPLC法测定银杏叶片中总黄酮醇苷和萜类内酯的 含量[J].华西药学杂志,2007,22(2):201—203. [4]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[M].北京:化学工 业出版社,2005.597—598. (收稿日期:2007—11—14)