铜_新铜试剂_谷胱甘肽_乙醇体系显色反应研究

铜_新铜试剂_谷胱甘肽_乙醇体系显色反应研究 第 2 0 卷 , 第 3 期光 谱 学 与 光 谱 分 析120 ,13, 4122414 V o lN o p p2 0 0 0 年 6 月 , 2000J une Sp ec t ro scop y an d Sp ec t ra l A n a ly sis 3() 铜 ? 2新铜试剂2谷胱甘肽2乙醇体系显色反应研究 1 王丽颖郭黎平刘国良张卓勇刘思东 东北师范大学化学学院, 130024 长春1 白求恩医科大学基础医学院, 130021 长春 () 摘 要 本文研究了铜 2新铜试剂2谷胱甘肽2乙醇体系的显色反应, 探讨了反应条件。试验中发现乙醇可 ? 以使吸光度增加 1318% , 提高了显色反应的灵敏度。 该方法用于测定大豆提取液中谷胱甘肽的含量, 取得了 满意结果。 主题词 新铜试剂, 谷胱甘肽, 光度法 准确称取 01010 0 以水溶解至 100 得到 100 g GSH mL - 1 Λg?mL 标准溶液。称取 01062 5 g 的 C uSO ?5H O , 以 204 2 引言 , 30 水溶解, 再称取 13518 新铜试剂用 8 无水乙 mL m g mL () 醇溶解, 二者充分混合后以水定容至 250 , 作为显色剂。还原型谷胱甘肽 是一种天然三肽, 其分子含有活 mL GSH 性巯基。据文献报道, 谷胱甘肽具有抗病毒作用, 解毒作用, 抗 113 测试仪器 肿瘤作用, 保护肝脏, 在细胞的多种基本代谢功能中起着抗氧 吸光度测定用2紫外2可见分光光度计756 U V V IS CR T 1 () () 化剂作用。测定 的常用方法有酶学法、量热法、分光光 上海第三 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 仪器厂, 22 型酸度计 上海雷磁仪器厂。GSH pH S2 , 4 114 实验方法度法、色谱法、毛细管电泳法、荧光光度法等。 于 25 容量瓶中, 加入适量的谷胱甘肽标准溶液, 3 mL ( ) 本文系统地研究了铜 ? 2新铜试剂2谷胱甘肽2乙醇体 显色剂, 7 无水乙醇, 摇匀, 以水定容。 用 1 比色 mL mL cm 系的显色反应, 发现乙醇有增敏作用。试验结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明: 可见光 皿, 稳定 15 后, 用试剂空白作参比, 于 456 处测定试 m in nm - 1 度法的线性动态范围为 2, 24 Λg?mL , 摩尔吸光系数为 Ε液的吸光度。 4 - 1 - 1= 1121×10??。将此方法用于大豆提取液中 L m o lcm 谷胱甘肽的测定, 结果的相对标准偏差不超过 019% 。 2 结果与讨论 1 实验部分 211 显色条件 11 试剂 121111 吸收光谱( ) () 铜 2新铜试剂是二价铜离子与新铜试剂反应生成的 ? 还原型谷胱甘肽 , , 纯, 新铜试剂 GSH G ibcoBRL H PL C 2+ 2+ () () () 螯合物[], 与[], , 上海试剂三厂, 其他试剂均为分析纯, 实 C u neo cup ro ine2 GSH C u neo cup ro ine2 N eo cup ro ineA R 验用水为二次蒸馏水。 的显色反应如下: 112 溶液配制 2+ () 2+ 2 ]—?- GSH C u neo cup ro ine2 G+ + +() 反应后定量生成的[]是一种橙色的配合 () C u neo cup ro ine2 ]+ 2- - + 2 SSGC u neo cup ro ine2 H 5 物, 在 458 处有最大吸收。我们在 350, 600 范围内 nm nm 11 TabEf f ec ts of buf f er so lut ion an d pH on the absorban ce 对空白、标准和样品溶液进行光谱扫描, 结果见图 1。 从图中 of g luta th ion e 可以看出, 样品和标准的最大吸收波长均在 456 处。试验 nm 中以 456 作为测量波长。pH pH 缓冲溶液吸光度缓冲溶液吸光度nm 5122 1593 118 1529 080 2HA c 6112 01597 28190 01522 N aA cN a2B 4O 7H 3BO 3 21112 6142 01563 缓冲溶液及 的影响 9106 01513 pH 9180 01480 用不同的缓冲溶液控制体系的 值, 对 456 处吸光 pH nm 7135 01691 不加缓冲溶 度进行测量, 结果列于表 1 中。 1999212222 收, 2000202225 接受; 3 吉林省卫生厅科研基金资助项目 郭黎平, 女, 1956 年生, 博士, 东北师范大学化学学院副教授 () 乙醇、溴化十六烷基三甲氨 和曲通 2100 C TM A B X () 2100对显色体系吸光度的影响如图 2 所示。从图 2T r ito n X 可以看出, 乙醇对体系吸光度的影响比 和 2C TM A B T r ito n X 100 大, 使吸光度增加 1318% 。 当乙醇体积百分数为 30% 左 右时, 吸光度可达最大值。 实验中选用乙醇体积百分数为 28% 。 11 F igA bsorp t ion spec tra 1 ;standa rd so lu t io n o f g lu ta th io ne 2 ; 3 sam p le so lu t io nb lank so lu t io n 从表 1 可见, 体系中不加任何缓冲剂, 而仅以乙醇2水体 系做基体时, 体系吸光度可达最大; 而加入缓冲剂后, 体系的 吸光度值减小。这可能是因为新铜试剂是弱极性含氮有机物, 在极性溶剂和非极性介质中都微溶甚至不溶。当向反应体系12F ig Ef f ec t of a lcoho l, CTM A B an d Tr iton X- 100 中加入水溶性盐类时, 体系极性增加, 不利于新铜试剂的溶 on the absorban ce of g luta th ion e 解。由反应式 1 a lco ho l 2 C TM A B 3 T r ito n X 2100 + +() + 2[]C u neo cup ro ine () C u neo cup ro ine2 21114 铜 与新铜试剂的比例 ?2+ 我们考察了 与新铜试剂的摩尔比与吸光度之间的 C u, 当 体 系 中 新 铜 试 剂 的 浓 度 减 小 时, 必 将 导 致 [ 可知C u2+ 关系, 以找出 与铜试剂的最佳物质量之比。 五种摩尔比 C u + () ]的解离度增大, 吸光度减小。因此, 在随后的 neo cup ro ine2 不同的显色剂分别与 反应, 在 456 处测定吸光度结 GSH nm 实验中不加缓冲溶液。 果见表 2。 21113 溶剂的选择 ) (12 ? TabEf f ec t of the m o lar ra t io of Cu an d n eocupro in e on the absorban ce of g luta th ion e ) ( ?210 1?215 1?310 1?315 1?410 1?? C u neo cup ro ine 01608 01620 01620 01618 01617 A 456 2+ 表 2 说明, 开始时, 随着新铜试剂与 的摩尔比的增 120 后, 吸光度开始逐渐下降。 时间超过 C u m in 2+ 大, 体系的吸光度先增大, 当 与新铜试剂的摩尔比达到C u 1?215时, 吸光度基本稳定。这可能是因为当体系中新铜试剂 2+ +() 与 的摩尔比仅仅达到或刚刚超过[]C uC u neo cup ro ine2 + () 的配位数 2 时, 体系中[]存在着相当程度 C u neo cup ro ine2 + () 的解离。随着新铜试剂加入量的增大, ]C u neo cup ro ine2 2+ 的解离度减小。 实验中选择 与新铜试剂的摩尔比为C u 1?215, 即以 01062 5 的 ?5和 011358 的新铜 g C uSO 4 H 2O g 试剂组成显色剂。 21115 显色剂的用量对体系吸光度的影响 显色剂用量与体 系吸光度之间的关系见图 3。 从图 3 中 可以看出, 随着显色剂用量的增加, 体系在 456 处的吸光 13 nm F igEf f ec t of the am oun t the co lor in g reagen t 度也随之增加, 当显色剂用量达到 215 以后, 体系的吸光on the absorban ce of g luta th ion e mL 21117 标准曲线 度基本保持不变。这表明体系中的 GSH 已完全发生了反应,+ () 配制浓度分别为 210、410、610、1010、1210、1610、2010、[ ]的浓度也达到了最大值, 实验中选择显 C u neo cup ro ine2 - 1 2410、2810 ?的 标准溶液, 按实验方法显色 15 ΛgmL GSH ()色剂用量为 3 相对于 50 的 。mL Λg GSH 后, 相对试剂空白测定它们在 456 处的吸光度。m in nm GSH 21116 体系稳定性- 1 含量在 210, 2410 ?范围内与吸光度呈现良好线性 ΛgmL 体系的吸光度与时间的关系如图 4 所示。实验结果表明,关系。 回归方程为 A = 01010 4 + 01038 5c; 相关系数 r = 显色体系在 15, 120 范围内, 吸光度值基本稳定, 当放置m in 414 光谱学与光谱分析第 20 卷 4 - 1 - 1 。 01999 8。摩尔吸光系数 Ε= 1121 × 10L r m o lr cm 度的混合溶液, 进行回收实验, 然后按实验方法测定。结果见 表 4。 从表 4 中的回收率试验结果来看, 该方法对 的回收 GSH 率令人满意。 13 TabThe ana ly t ica l re sults of g luta th ion e in ()= 6soybean ex trac ts n - 16 ] - 1) (样品号 本法测定结果? R SD % 荧光法测定结果? ƒƒ ΛgmL ΛgmL 10120 188 130 010I 13173 0180 14100 ? , 27187 0161 28150 14 F igThe re la t ion sh ip of co lor in g t im e an d absorban ce ()14 = 4TabThe coef f icen ts of recovery n of g luta th ion e - 1- 1 - 1 原样浓度ƒ?加入浓度ƒ?测得值ƒ?回收率ƒ% 平均回收ƒ%率 ΛgmL ΛgmL ΛgmL 212 样品分析 13173 2100 15170 9815 21211 大豆提取液中谷胱甘肽的测定 取不同的大豆提取液 13173 4100 17172 99162 样品适量, 按实验条件显色, 在 456 99142 13173 6100 19171 99167 处以试剂为空白读取吸光度值, 每个样品做六次平行测 nm 定, 结果列于表 3 中。 13173 10100 23172 99190 21212 加入回收试验 分别取适量标准溶液和样品溶液 5 , 配成四种不同浓mL 参考文献 ( ) 1 张昌颖主编. 生物化学第二版, 北京: 中国医药科技出版社, 1996 ( ) 2 I Sa to h , S A rak aw a, A O k am o to. D etecta r. S ens. A ctu a tors, B. 1991, 135 4: 245 ( ) , , . 1997, 695 2: 4273 G San to r iV D om en ico t t iA B e llo cch io e t a lJ . C h rom a tog a r, B: B iom ed. S ci. A p p l. , ( ) , . 1997, 26 5: 4494 M F lo rean iM P e t ro neF ree R ad ica l R es. , ( ) , , . () 1989, 3: 1435 B A m irB T N ab ilA G Yo u sseffM ik roch im. 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