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REPLI Mini 试剂盒说明书.doc

REPLI Mini 试剂盒说明书

那桑如此美
2019-01-17 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《REPLI Mini 试剂盒说明书doc》,可适用于医药卫生领域

REPLIgMiniKits 试剂盒说明书纯化基因组DNA的扩增●本协议优化了大于ng的纯化基因组DNA模板的全基因组扩增。DNA模板应该在TE内悬浮如果DNA是高质量可以运用起始材料的更少量(ng)。●血液的直接扩增见页。●为了获得最好的结果大于kb的DNA模板的某些片段长度应该大于kb。●REPLIgMiniDNA聚合酶应该在冰上解冻。其他所有的化合物成分可以在室温解冻(℃)。●BufferD和BufferN储存时间不应该超过个月。●如果DNA模板应用量是ul遵从蓝色的文本标有蓝色三角形▲。●如果DNA模板应用量为ul按照红色文本红色实心圆●。开始前小贴士●添加无核酸酶水ul于BufferDLB中并涡旋 混匀和短暂离心。注:重新配置的BufferDLB可以在℃储存个月BufferDLB的PH不稳定要避免该试剂与二氧化碳反应。●所有的缓冲溶液和试剂在使用前都应该涡旋目的是试剂充分混合。●水浴锅摄氏度。步骤:准备足够的BufferD(变形溶液)BufferN(中和反应溶液)以满足全基因组扩增反应的总数量(见表)。注:表中给出的BufferD和BufferN的总体积最多适用于▲或●个反应。BufferD和BufferN储存时间不应该超过个月。表BufferD和BufferN的准备组分BufferDBufferN重建的BufferDLBul终止溶液ul无核酸酶水ulul总体积ulul   放ul▲和ul●的DNA模板到微型离心管内。注:DNA模板的总量应该大于ng加入ul▲和ul●的BufferD到DNA涡旋混匀并短暂离心。室温放置样品min。再加入ul▲和ul●的BufferN到样品中涡旋混匀和短暂离心。在冰上解冻MiniDNA聚合酶。在室温解冻其他所有的化学物质涡旋并短暂离心。注:REPLIgMini反应溶液在解冻后可能会形成沉淀物该沉淀物涡旋s后会消失。按照表格在冰上准备主要混合反应物混匀并短暂离心。注:按照表格中的顺序添加各组分。在添加DNA聚合酶之前对已经添加的水和MiniReactionBuffer混合物进行短暂的涡旋和离心。添加DNA聚合酶应该在冰上进行同时添加要迅速。表全基因组混合反应的准备组分ulDNA模板的反应▲ulDNA模板的反应●无核酸酶水ul反应溶液ululDNA聚合酶ulul总体积ulul   添加ul▲和ul●的混合物到第步ul▲和ul●的变性DNA中。在℃恒温放置h。注:放置h时DNA的产量最大。提前预热水浴到℃。如果运用带有加热盖的循环加热器盖的温度应该被设定在℃。℃加热min目的是使DNA聚合酶失去活性。为了进行PCR反应分析稀释扩增DNA比例为:同时每个PCR反应运用稀释的DNA体积为ul。注:稀释时ul的扩增产物加入ul的水或TE光密度测定并不能准确地定量双链DNA见附录A页准确定量REPLIg扩增DNA量的方法。扩增DNA在℃用于短期储存℃用于长期储存。注:运用REPLIg试剂盒的扩增的DNA具有较低的冻融循环周期。低密度核苷酸的长期储存可能会引起DNA的酸解所有我们推荐核苷酸至少在ngul的浓度进行储存。

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