SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)
简介：
本试剂为配制SDS-PAGE分离胶缓冲液，可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷。产品中已加入10%SDS，使用时不用另外加入。
组成：
编号
名称
PW0097
PW0097
Storage
SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)
100ml
500ml
4℃
使用说明书
1份
自备
材料
关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料
：
1、 凝胶模具
2、 Acr-Bis(30%,29:1)
3、 10%APS(过硫酸铵)
4、 TEMED
5、 蒸馏水
操作步骤(仅供参考)：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。
(一)灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。(注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。)
2、将不同体积的Acr-Bis(30%,29:1)、分离胶缓冲液和蒸馏水在小烧杯或试管中混合。
3、加入APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端
1.5 cm或距梳齿约0.5cm即可)，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层水层，
使凝胶表面保持平整。
6、 静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。
(二)灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、小心倾倒出覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的Acr-Bis(30%,29:1)、浓缩胶缓冲液和蒸馏水在一个小烧杯或试管中混
合。
3、加入APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6、静置，等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。
注意事项：
1、 过硫酸铵配制成10%溶液后应当-20℃保存。应尽量减少室温存放时间以防失效。有效避免失效的方法是分成小份，-20℃保存，用2~3次，剩余的弃用，亦可4℃保存几天。
2、 TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节TEMED的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
3、 配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于37℃放置，加速凝固。
4、 Acr-Bis(30%,29:1)有轻微神经毒性，请小心操作。
5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 3个月有效。
相关：
编号
名称
PI0015
蛋白酶抑制剂混合液(100×PIC)
PS0013
RIPA裂解液(强)
PT0013
考马斯亮蓝快速染色液
PW0053
Western抗体洗脱液(碱性)
PW0084
丽春红S染色储存液(10×Ponceau S)
附表：
附表1.不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围
SDS-PAGE分离胶浓度
最佳分离范围
6%胶
50-150kD
8%胶
30-90kD
10%胶
20-80kD
12%胶
12-60kD
15%胶
10-40kD
附表2.配制SDS-PAGE分离胶
分离胶浓度
凝胶体积
配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml)
蒸馏水
Acr-Bis(30%,29:1)
分离胶缓冲液(4×)
10%APS
TEMED
6%
5ml
2.75
1.0
1.25
0.05
0.004
10ml
5.5
2.0
2.5
0.1
0.008
15ml
8.25
3.0
3.75
0.15
0.012
20ml
11
4.0
5
0.2
0.016
8%
5ml
2.42
1.33
1.25
0.05
0.003
10ml
4.8
2.7
2.5
0.1
0.006
15ml
7.25
4.0
3.75
0.15
0.009
20ml
9.7
5.3
5
0.2
0.012
10%
5ml
2.08
1.67
1.25
0.05
0.002
10ml
4.17
3.33
2.5
0.1
0.004
15ml
6.25
5.0
3.75
0.15
0.006
20ml
8.3
6.7
5
0.2
0.008
12%
5ml
1.75
2.0
1.25
0.05
0.002
10ml
3.5
4.0
2.5
0.1
0.004
15ml
5.25
6.0
3.75
0.15
0.006
20ml
7.0
8.0
5
0.2
0.008
15%
5ml
1.25
2.5
1.25
0.05
0.002
10ml
2.5
5.0
2.5
0.1
0.004
15ml
3.75
7.5
3.75
0.15
0.006
20ml
5.0
10.0
5
0.2
0.008
附表3.配制5%SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)
凝胶体积
配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml)
蒸馏水
Acr-Bis(30%,29:1)
浓缩胶缓冲液(4×)
10%APS
TEMED
2ml
1.14
0.34
0.5
0.02
0.004
4ml
2.28
0.68
1
0.04
0.008
6ml
3.42
1.02
1.5
0.06
0.012
8ml
4.56
1.36
2.0
0.08
0.016
浙公网安备 33021202002483