【doc】胎儿颞下颌关节髁状突软骨的凝集素亲和组化研究

【doc】胎儿颞下颌关节髁状突软骨的凝集素亲和组化研究 胎儿颞下颌关节髁状突软骨的凝集素亲和 组化研究 Z/c牟 第ll卷第4期 l995年l1月 口腔医学纵横杂志 JournalofComprehensiveStomatology VOl_11NO.4 NOV.1995 胎儿颞下颌关节髁状突软骨的凝集素亲和组化研究 林艳丰石南群邹宁生, , ,一, /\"- 以提要作者应用凝集素亲和组化法(九种凝集素)对43例13周至38周的髁状突软q~CMC)进行 /研究,目的是观察胎儿CMC各部位的特异性糖基及其随胎龄增长的变化.结果显示:ConA, WGA,RCA,PSA,BsL对该组织有反应.ConA,WGA的反应见于整个胎儿期.RCA,PSA在18周 出现反应.BSL在22周出现反应,后三者反应均较弱.随着胎龄增长,ConA,PNA,BSL等在CMC 不同部位的凝集素结合指数具有显着性或高度显着性差异.29周后CMC最表面出现一连续的 RCA阳性细胞带,其反应性质与血管内皮相似. 关键词髁状突凝集素胎儿 , —一 ———一 凝集素常被用于探讨细胞分化和特异细 胞类型等方面的研究L1].但标记凝集素在软 骨组织的应用是近年在组化领域发展起来的 一 种新技术L2].作者使用凝集素对髁状突 软骨(cartilageofmandibularcondyle, CMC)进行了研究. 材料和方法 水囊引产外观无畸形的胎儿43例,按Moor_5 的方法确定胎龄其中:A组(13,18周)10例,B组 (19,25周)13例,C组(26~38周)20例.9种生物 素化凝集素,生物素一卵白素过氧化物酶复合物 (ABC试剂)均为美国Vector公司产品.有关凝集素 的名称,稀释度及主要特异结合糖基见表1. 游离颞下颌关节,10中性福尔马林固定,5% ,l0EDTA脱钙常规石蜡包埋,切片厚约5, 7m.凝集素亲和组化染色按张华忠法].省略胰蛋 白酶消化及小鼠肝粉孵育.阴性对照组用PBS代替 各种凝集素,其余步骤相同.阳性结果采用结合指数 表达],后者包括深度指数和阳性细胞百分率指数. 深度指数确定;1为细胞内阳性物质呈匀细浅 淡的棕色颗粒;2为阳性物质呈较深粗细不一的棕 色颗粒}3为阳性物质呈深棕色的块状物质,但阳性 物质占细胞浆的3/4以下;4为阳性物质表现似指 数3,但分布超过胞浆的3/4.每张切片观察CMC各 带的左,中,右三个区域,取平均值为该片的深度指 数. 阳性细胞百分率指数的研究:在400倍视野下, 阳性细胞在5%以下为指数1}5,25为指数2; 25,75为指数3;75%以上为指数4.每张切片 同样观察三个区域,取平均值为该片的阳性细胞百 分率指数. 结合指数:每张切片的深度指数和阳性细胞百 分率指数的乘积.结果用秩和检验法进行统计 结果 光镜下髁状突软骨可以分为相对独立的四带, 由浅到深分别为纤维带(I带),增殖带(1带),软骨 母细胞带(I带)及肥大钙化带(?带).已有研究显 示随着胎龄的增长,胎儿CMC之I带在29周左右 开始分化出相对独立的新I带(关节表面带)及新1 带(致密纤维带)]. ConA对CMC各带细胞的阳性反应均局限于 有时呈团块状.偏于细 胞浆.I带细胞呈均匀淡染, 胞一极;1带近于I带的过渡部位的细胞呈颗粒状 或团块状着色,围绕于胞核周缘;I带细胞的反应呈 深褐色粗块状,或在匀细淡染的基础上有大小不一 的深褐色颗粒;?带反应与I带相似.ConA对各带 基质反应均阴性.WGA对各带细胞反应为:I带细 胞阳性率不高,多呈胞浆的均匀淡染;1带近I带处 细胞亦为均匀淡染,基质弱阳性}I带细胞尚可见粗 块状着色,常观察到局部基质及软骨陷窝呈阳性反 作者单位;福州(350004)福建省人民医院耳鼻喉科(林艳 丰);福建医学院人体解剖教研室(石南群,邹宁生) 第ll卷第4期林艳丰等:胎儿颓下颌关节髁状突软骨的凝集素亲和组化研究 应.IV带与I带反应相似RCA染色较特殊,主要表 现为在I带表浅部逐渐出现的RCA阳性细胞带.在 A组,RCA仅对I带表浅部个别细胞呈阳性反应, 反应物多呈细颗粒状,阳性细胞尚未连续成列,对? 带的软骨陷窝呈弱阳性反应,其余部分阴性.在B 组,I带的表浅部有一不连续的RCA阳性细胞带, 它在某些局部可达3例细胞,I带的其余部位及I 带的部分细胞呈弱阳性,?带中亦见部分细胞胞浆 呈均匀淡染或团块状,但它们的阳性度均不如表浅 部的RCA阳性带高.在c组,连续的RCA阳性带 更明确,同时I带小血管内皮与表浅部阳性带呈同 样的阳性反应.BSA,PSL,PNA对CMC有选择性 反应.PSA,BSL对I,I,IV带均有反应,它们对I, IV带的反应分别在18周及22周后出现.PNA对I 带反应弱,与?,?,IV带无反应.UEA,SJA,SBA仅 对1带有反应且较弱,且在22周出现,对其余各带 无反应. 表1九种凝集素的浓度及其结合糖基 *该种凝集素之主要特异性结合糖基的前后顺序各文献记载不一. 表2CMC的凝集素结合指数(;士s) A组 n=10 B组 n=13 C组 n=:20 I带中,PNA,BSL,PSA在B组,c组与A组有 显着性差异(P<0.01,P<0.05);WGA,UEA,RcA 在c组与A组相比有显着性差异,(P<o.05,P~-.2 0.01);各组ConA的结合指数无显着差异(P< 0.05).I带中,ConA在B组c组与A组之间结合 指数有显着性差异,(P<0.05及P<0.01).I带中 BSL在B,c两组间的结台指数具有高度显着性差 异(P<O.01).?带中BSL在B组与c组之间结合 指数具有显着性差异(P<O.05). 讨论 CMC是颞下颌关节的重要组成部分,已 有研究显示CMC胎儿期各带呈现动态的组 织学分化].本文是在既往对CMC组织学特 征研究的基础之上应用凝集素亲和组化方法 对CMC组织学特征的进一步研究.凝集素 口腔医学纵横杂志 是有机体中除酶和抗体之外,具有识别功能 的第三类蛋白质.一种细胞或组织的分化或 成熟可借助于不同特异性凝集标记来识别. 本文CMC凝集素亲和组化反应结果更进一 步证实了CMC的分化发育过程.随着胎龄 的增长,在I带逐渐出现UEA,SJA,SBA等 凝集素受体,以及PNA,WGA,UEA,BSL等 在不同的胎龄对I带细胞结合指数的显着性 差异说明了CMC的生物学特征发生了量变 与质变.尤其是在I带表浅部逐渐出现的 RCA阳性细胞带,该带在C组标本中更明 确,其染色范围与既往的I带表浅部分化出 来的新I带吻合. Zimmermann_2用凝集素研究小鼠肢芽 软骨发生过程中凝集素结合显示:ConA, WGA及PVA对早期间充质细胞的标记较 晚期强,显示了软骨发生过程中这三种受体 减少.RCA优先与胚基结合,而对间充质仅 有微弱的反应,对软骨反应弱.本研究中,I 带细胞是较幼稚的间充质细胞,其凝集素反 应结果显示了胎儿期I带细胞凝集素受体少 的特点,对ConA,WGA,PSA仅有弱反应, 其余6种均无反应.I带接近?带区域的细 胞带呈ConA阳性反应,表明该类细胞的代 谢水平较其它ConA阳性的I带细胞发生了 变化.发育过程中,B,C组I带ConA结合指 数具有显着差异(P<0.05).所以,发育过程 中I带细胞的凝集素结合反应亦有明显变 化. 参考文献 1蔡文琴,王伯i云主编.实用免疫细胞化学.第1版.北 京:科学技术出版社,1989:130 2ZimmermannBandThiesM.Aherlationsoflection—— bindingduringchondrogenesisofmouselimbbuds.His— tochemistry1984,81:353 3SchunkeM,SchumacherU,TillmannB.Lectin—binding innormalandfibrillatedarticularcartilageofhuman patellae.VirchowsArch(A)1985,407:221 4SchunkeM.TillmannBandBrunkM.Lectin—binding innormalandosteoarthroticarticularcartilagefrom STR/1Nmousekneejoint.VirchowsArch(B)1988, 54{327 5MoorKL.Thefetalperiod,Inthedevelopinghuman clinicallyorientedembryology.W.B.Saunderscompa— ny.Philadelphia,1982:95 6张华忠,施达仁,傅秀珍,等.凝集素在人体正常组织定 位.中华医学杂志1985.65:144 7陈贞玉,潘彦珞,杜宗尧.胃癌组织中特异糖蛋白含量与 分布的研究.中华医学杂志1989;69:362 8林艳丰,石南群,邹宁生.胎儿颞下颌关节髁状突骨上组 织的组织学特征.福建医学院1995,29:226 [收稿:1994一O7—19] 铸造金属全冠过敏1例 廖小平 患者男性,28岁.l6残冠经牙髓治疗后三周,于 1994年1o月行铸造金属全冠修复.5天后自觉双侧 手指及附近手背皮肤剧烈瘙痒,其它部位无任何不 适.经它院近二个月的治疗无效. 检查:口内l6金属全冠完好,口腔粘膜及牙龈未 见明显异常,叩(一),松(一);双侧手指及附近手背 皮肤呈糠秕样鳞悄,伴轻度渗出,红肿;其它部位未 见明显异常. 诊断及处理:患者系金属全冠过敏可疑.去除j 铸造全冠,服用抗组胺药,局部外用抗生素软膏,一 周后痊愈.改用氧化锌丁香油糊剂粘固全冠,一周后 复出上述症状,经处理后痊愈. 讨论:我中心通常用磷酸锌粘固粉粘固全冠,改 用氧化锌丁香油糊剂出现同样症状,故患者症状是 由铸造合金致敏引起的反应.我中心所用铸造合金 系美国产Ni--Cr合金,对此合金过敏者报道甚少. 患者无局部症状而直接在双手出现症状,提示口腔 内的致敏可不出现局部症状而直接于全身其它部位 出现症状,应引起临床医师的注意. let稿:1995一O4一lO3 作者单位:江西(330046)~7美牙科医疗保健中心.