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2010版药典lowry法测定蛋白含量的方法.doc

2010版药典lowry法测定蛋白含量的方法

钱妞妞牛
2017-10-11 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《2010版药典lowry法测定蛋白含量的方法doc》,可适用于农林牧渔领域

版药典lowry法测定蛋白含量的方法第二法Lowry法摘自版药典本法用于微量蛋白质的含量测定。蛋白质在碱性溶液中可形成铜蛋白复合物此复合物加入酚试剂后产生蓝色化合物该蓝色化合物在波长nm处的吸光度与蛋白质的含量成正比根据供试品的吸光度计算供试品的蛋白质含量。试剂()酚试剂称取钨酸钠(NaWOHO)g、钼酸钠(NaMnOHO)g,置ml蒸馏瓶中加入ml水、磷酸ml、盐酸ml上连回流管(使用木塞或锡纸包裹的橡皮塞)微沸回流小时。取下回流管加入硫酸锂g、水ml、溴液几滴煮沸约分钟驱除过量的溴。冷却加水至ml过滤为酚试剂储备液。酚试剂储备液用氢氧化钠滴定液(molL)测定酸浓度然后加水稀释至相当于molL沿酸浓度。()碱性铜溶液量取molL酒石酸钾溶液与molL硫酸铜溶液各ml碳酸钠溶液与氢氧化钠溶液各ml摇匀即得。本液临用配制。()氢氧化钠滴定液(molL)的配制及标定去氢氧化钠适量加水搅拌使溶解成饱和溶液冷却后置聚乙烯塑料瓶中静置数日澄清后量取澄清的氢氧化钠饱和溶液ml加新煮沸后的冷却水使成ml摇匀。取在干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约g精密称定加新煮沸过的冷水ml振摇使其尽量溶解加酚酞指示剂滴用本液滴定在接近终点时应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解滴定至溶液显粉红色。每ml氢氧化钠滴定液相当于mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量算出本液的浓度。标准蛋白溶液的制备用水将蛋白标准品定量稀释至每ml含mg作为储备液。精密量取储备液ml置ml量瓶中用水稀释至刻度摇匀即为每ml含µg的标准蛋白质溶液。测定法精密量取一定体积供试品(含蛋白质µg左右)置试管内加水至ml加碱性铜溶液ml摇匀室温放置分钟快速加入酚试剂ml摇匀室温放置分钟显色后照紫外可见分光光度法(附录A)在波长nm处测定吸光度(呈色后如果发现浑浊经每分钟转离心分钟后取上清液测定)。精密量取标准蛋白溶液ml、ml、ml、ml、ml分别置于试管中自“加水至ml”起同法操作。准确量取水ml自“加碱性铜溶液ml”起同法操作作为空白对照。以标准品的蛋白质浓度对其相应吸光度做直线回归求得直线回归方程即得供试品的蛋白质含量。

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