【精】消毒剂效力及有效期验证方案

Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 1 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 Tablet of Content 1 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 2 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 目录 1. 目的和范围 ................................................................................................ 错误～未定义书签。 2. .................................................................................................................. 错误～未定义书签。 3. .................................................................................................................. 错误～未定义书签。 4. 定义与缩写 ................................................................................................ 错误～未定义书签。5. 参考文件 .................................................................................................................................. 3 6. 概述 ......................................................................................................................................... 3 7. 确认前准备 .............................................................................................................................. 5 8. 消毒剂消毒效力试验 ................................................................................................................ 6 9. 消毒剂有效期确认试验 .......................................................................................................... 13 10. 验证偏差和变更 ....................................................................................... 错误～未定义书签。 11. 附录列表 .............................................................................................................................. 14 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 3 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 消毒剂的选用原则: 目的:确认各洁净级别的操作间及设备外表面按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒、防止污染的目的，并在消毒剂有效期内能确保其消毒效力能符合要求。 范围:本验证方案适用于本公司洁净区的墙面、天花板、门窗、机器设备、仪器、操作台、地漏、推车、桌椅等表面以及操作人员双手(手套)的消毒等。 1. 参考文件 1.1. 药品生产验证指南2003版 1.2. 微生物检测验证技术(中国医药科技出版社) 2. 概述 2.1. 本公司的洁净区分为A级、C级和D级，拟定用于洁净区表面消毒的有七种消毒剂:75%乙醇、0.1% 新洁尔灭溶液、0.3%新洁尔灭溶液、0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰、40mg/L的二氧化氯、60mg/L 的二氧化氯。本次验证方案将选用以上7种消毒剂分别进行验证试验。 作用对象一样的消毒剂每月轮换使用，避免表面微生物产生耐药菌株。在利用消毒剂进 行表面擦拭消毒过程中消毒剂的作用时间应不少于10分钟，利用消毒剂进行浸泡消毒 的不少于5分钟。 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 4 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 消毒剂的种类、消毒对象、消毒方法和有效期 序名称 消毒对象 消毒方法 有效期 号 采用擦拭或喷密闭保存C级:7天1 75%乙醇 用于设备表面、器具和手消毒。 洒方式 D级:30天 40mg/L二氧化密闭保存C级:7天2 用于地面、墙面和器具的消毒 采用擦拭方式 氯溶液 D级:30天 60mg/L二氧化用于工作服、清洁布和拖布的消密闭保存C级:7天3 采用浸泡方式 氯溶液 毒 D级:30天 0.1%新洁尔灭用于地面、墙面、器具、工作服、采用擦拭或浸密闭保存C级:7天4 溶液 清洁布、拖布和洁净鞋的消毒 泡方式 D级:30天 0.3%的新洁尔密闭保存C级:7天5 用于水池和地漏的消毒 用于液封 灭溶液 D级:30天 0.5%醋酸洗必密闭保存C级:7天6 用于水池和地漏的消毒 用于液封 泰溶液 D级:30天 0.1%醋酸洗必用于工作服、清洁布、拖布和洁密闭保存C级:7天7 采用浸泡方式 泰溶液 净鞋的消毒 D级:30天 2.2. 为了确认消毒剂的消毒效力，通过实验室考察部分和现场考察部分分别进行验证。其中，用定量悬浮试验法和表面实验法进行实验室考察试验部分。 洁净区设施表面材质基本都是不锈钢和玻璃两种，故表面试验法选用不锈钢载片和玻璃裁片模拟洁净区设施表面进行验证试验。 两种试验方法作用的消毒剂见表。 序号 试验方法 消毒剂 1 75%乙醇 表面实验法 2 40mg/L二氧化氯溶液 3 0.1%新洁尔灭溶液 4 0.3%的新洁尔灭溶液 0.1%新洁尔灭溶液 5 定量悬浮试验法 6 60mg/L二氧化氯溶液 7 0.1%醋酸洗必泰溶液 8 0.5%醋酸洗必泰溶液 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 5 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 现场考察试验部分选择固体车间(D级)的制粒一、小容量注射剂车间(C级)的配液间、灌封间层 流罩(A级)设备表面消毒前和消毒后分别进行取样，测定其微生物数量。 3. 确认前准备 3.1. 验证用试剂与材料 3.1.1. 菌种 序号 名称 序列号 1 [CMCC(B)26003] 金黄色葡萄球菌 2 大肠埃希菌 [CMCC(B)44102] 3 枯草杆菌芽孢 [CMCC(B)63501] 白色念珠菌 [CMCC(F) 98001] 3.1.2. 培养基 序号 名称 备注 1 营养琼脂培养基 2 营养肉汤培养基 培养基经121?，20min灭菌备用 3 改良马丁琼脂培养基 4 改良马丁培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟 5 (编号:BZW12085) 2规格::,55mm，取样面积为25m 玫瑰红钠琼脂培养接触碟 6 (编号:BZW15129) Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 6 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 3.1.3. 消毒液拟定选用的中和剂 序号 消毒剂名称 中和剂 备注 1 75%乙醇 中和剂经2 0.1%新洁尔灭溶液 121?，20min灭3 0.3%的新洁尔灭溶液 1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯80 菌备用。 4 0.5%醋酸洗必泰溶液 5 0.1%醋酸洗必泰 6 60mg/L二氧化氯溶液 0.5%硫代硫酸钠 7 40mg/L二氧化氯溶液 3.1.4. 稀释液 0.9%无菌氯化钠溶液(NS) 3.1.5. 器具及设备 序号 名称 1 无菌移液管 2 锥形瓶 3 无菌试管 4 漩涡混合器 5 恒温水浴锅 6 恒温恒湿培养箱 7 恒温恒湿培养箱 3.2. 验证用试剂与材料记录见附录1。 4. 消毒剂消毒效力试验 4.1. 中和剂鉴定试验 4.1.1. 试验目的 通过该试验，确认所用的中和剂对对应的消毒剂有良好的中和作用，对试验用菌剂及其恢复期培养 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 7 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 示范有害或不良影响。 4.1.2. 菌液的制备及计数 4.1.2.1. 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌工作菌液的制备 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30,35? 88培养18,24小时。取上述培养物用0.9,无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释成1×10~5×10CFU/ml 88的工作菌液(如肉汤培养物的浓度已为1×10~5×10CFU/ml，可不再用0.9,无菌氯化钠溶液稀释)。 88计数时，将1×10~5×10CFU/ml的工作菌液10倍系列稀释成含50,100CFU/ml菌液，并同时采用 营养琼脂培养基30,35?培养2天计数。计算该稀释级的平均菌落数，将计数结果换算成每毫升浓 菌液的菌落数。 4.1.2.2. 白色念珠菌工作菌液的制备 接种白色念珠菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，23,28?培养24,48小时。取上述培养物用 880.9,无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释成1×10~5×10CFU/ml的工作菌液(如肉汤培养物的浓度已 8888为1×10~5×10CFU/ml，可不再用0.9,无菌氯化钠溶液稀释)。计数时，将1×10~5×10CFU/ml的 工作菌液10倍系列稀释成含50,100CFU/ml菌液，并同时采用改良马丁琼脂培养基23,28?培养 3天计数。计算该稀释级的平均菌落数，将计数结果换算成每毫升浓菌液的菌落数。 4.1.3. 鉴定试验操作 4.1.3.1. 配制75%乙醇、0.1%新洁尔灭溶液、0.3%新洁尔灭溶液、0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰、40mg/L 的二氧化氯、60mg/L的二氧化氯，具体操作执行《清洁剂和消毒剂管理》。将配置好的消毒剂置20? ?1?恒温水浴锅中备用。 4.1.3.2. 分组操作 试验分组及稀释操作方法简表 组号 混合液A 混匀作用 混合液B 混匀作用 取混合液B或混合液 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 8 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 10min 10min B的稀释级溶液0.5ml取0.5ml工作菌液取混合液A 0.5ml 平板计数(2皿/组) 加入下列溶液中 加入下列溶液 -11 消毒剂4.5ml 稀释液4.5ml 混合液B、10 -12 消毒剂4.5ml 中和剂4.5ml 混合液B、10 -2-33 中和剂4.5ml 稀释液4.5ml 10、10 中和产物4.5ml(消 -2-34 毒液与中和剂比例稀释液4.5ml 10、0 为1:1) -2-35 稀释液4.5ml 稀释液4.5ml 10、10 6 稀释液和中和剂各1.0ml注入无菌平皿中，各制备2皿。 具体操作 , 第1组 目的:观察消毒液对试验菌有无杀灭或抑制能力。 操作: 取消毒剂4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min后，取混合液0.5ml+稀释液4.5ml，混匀作用10min，取0.5ml注皿，平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30,35?培养3天计数;白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置23,28?培养5天计数计数。 , 第2组 目的:观察残留消毒剂被中和后受到消毒剂作用后的试验菌是否恢复生长。 操作: 取消毒剂4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min后，取混合液0.5ml +中和剂4.5ml，混匀作用10min， -1-1用稀释液稀释成10。分别取未稀释溶液(混合液0.5mll+中和剂4.5ml的混合液)及10 0.5ml注皿，各平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置于30,35?培养3天计数;白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置于23,28?培养5天计数。 , 第3组 目的:观察中和剂是否有抑菌性 操作: 取中和剂4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min，取混合液0.5ml l+稀释液4.5ml，混匀作用10min Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 9 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 -2-3后，用稀释液进行10倍系列稀释成10、10。取相应稀释级0.5ml注皿，各稀释级平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30,35?培养3天计数;白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置30,35?培养3天计数计数。 , 第4组 目的:观察中和产物，或未被完全中和残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。 操作: 取消毒剂和中和剂1:1的混合液4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min，取混合液0.5ml l+稀释液 -2-34.5ml，混匀作用10min后，用稀释液进行10倍系列稀释成10、10。取相应稀释级0.5ml注皿，各稀释级平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30,35?培养3天计数;白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置30,35?培养3天计。 , 第5组 目的:作菌落数对照用 操作: 取稀释液4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min，取混合液0.5ml l+稀释液4.5ml，混匀作用10min -2-3后，用稀释液进行10倍系列稀释成10、10。取相应稀释级0.5ml注皿，各稀释级平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30,35?培养3天计数;白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置30,35?培养3天计数。 , 第6组 目的:作为阴性对照用 操作:分别取稀释液和中和剂各1.0ml注入无菌平皿中，各制备2皿。 4.1.3.3. 结果判断 试验结果应符合下列全部条件，判断所选中和剂合格。 , 第1组无菌生长，或仅有少数试验菌菌落生长。 , 第2组菌落数比第1组菌落数多，但比第3、4、5组菌落数少，且符合下表要求 第1组平板平均菌落数 第2组平板平均菌落数 0 〉5 x 〉(x+5) Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 10 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 y 〉(y+0.5y) , 第3、4、5组有相似菌落数生长，其每组间菌落数误差率不超过15%。计算公式 如下: (3组间菌落平均数-各组菌落平均数)的绝对值之和 误差率,————————————————————————×100, 3×3组间菌落平均数 , 第6组无菌生长。否则，说明试剂有污染，应重新进行试验。 4.1.4. 中和剂鉴定试验记录见附录2。 定量悬浮试验 4.2. 试验目的 4.2.1. 由于0.3%的新洁尔灭溶液、0.1%新洁尔灭溶液、60mg/L二氧化氯溶液、0.1%醋酸洗必泰溶液、0.5% 醋酸洗必泰溶液是通过浸泡或液封消毒，通过定量悬浮试验，确定其消毒效力是否符合要求。 4.2.2. 试验操作 4.2.2.1. 配制0.3%的新洁尔灭溶液、0.1%新洁尔灭溶液、60mg/L二氧化氯溶液、0.1%醋酸洗 必泰溶液、0.5%醋酸洗必泰溶液，操作执行《清洁剂和消毒剂管理》。将配置好的消 毒剂置20??1?恒温水浴锅中备用。 4.2.2.2. 由于0.3%的新洁尔灭溶液、0.1%新洁尔灭溶液中低效消毒剂，且不能杀灭芽孢，故定 量悬浮试验用菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌。 0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰溶液、60mg/L二氧化氯溶液为高效消毒剂，能杀 灭芽孢，故定量悬浮试验用菌枯金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢 杆菌。 884.2.2.3. 将菌液制备成1×10~5×10CFU/ml的工作菌液，菌液的制备及计数同8.1.2。 4.2.2.4. 将试管按需要分组排列在试管架上，试验组分3组(4min、5min、6min各一组)，并 -1-2由左向右逐管标明消毒剂、中和剂、10、10。对照组分1组，并由左向右逐管标明 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 11 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 、。-1-2-3-4稀释液、中和剂、10、1010、10。 。-1-2-3-44.2.2.5. 向个试管加入4.5ml相应的试剂，标明10、10、10、10加入4.5ml的稀释液。 4.2.2.6. 吸取工作菌液0.5ml加入标明消毒剂的试管中，对照组加入标明稀释液的试管中，迅速 混匀，并开始计时。 4.2.2.7. 待菌液与消毒剂相互作用至8min、10min、12min，吸取菌液和消毒剂混合液0.5ml，加入标明中和 剂的试管中，迅速混匀。 -1-24.2.2.8. 中和作用10min后，吸取0.5ml加入标明10的试管中，混匀后吸取0.5ml加入标明10试管中(对 -4照组以此类推，对照组直至10)。 -1-2-3-44.2.2.9. 试验组分别取中和剂管、10、10管溶液1ml按平皿法测定存活菌数;对照组取10、101ml按 平皿法测定存活菌数。每管平行制备2皿。 4.2.2.10. 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置于30,35?培养3天计数; 白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置于23,28?培养5天计数计数。 4.2.3. 结果计算 计算试验组和对照组的活菌浓度 (CFU/ml)，并换算为对数值(N)，并按下式计算杀灭对数值: 杀灭对数值 (KL),对照组平均活菌浓度的对数值(NO),试验组活菌浓度对数值(NX) 4.2.4. 可接受 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 杀灭对数值 (KL)应不低于3~5个对数单位。 4.2.5. 定量悬浮试验记录见附录3 4.3. 表面试验法 4.3.1. 试验目的 由于75%乙醇、40mg/L二氧化氯溶液、0.1%新洁尔灭溶液是通过擦拭消毒，故选用不锈钢载片和 玻璃裁片进行表面试验法，确定其消毒效力是否符合要求。 4.3.2. 菌种选择 由于75%乙醇、0.1%新洁尔灭溶液中低效消毒剂，且不能杀灭芽孢，故定量悬浮试验用菌为金黄色 葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌。 40mg/L二氧化氯溶液为高效消毒剂，能杀灭芽孢，故定量悬浮试验用菌枯金黄色葡萄球菌、大肠埃 希菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌。 4.3.3. 工作菌液制备 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 12 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 工作菌液的制备方法、浓度及验证同步计数操作同8.1.2。 4.3.4. 试验操作 4.3.4.1. (1) 染菌不锈钢载片制备 将经灭菌的载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌含菌量为 881×10~5×10CFU的菌液0.1ml，并均匀涂布于整个载体表面。滴染菌液后，载片置超净工作台晾干 后备用。每种菌平行制备两个染菌不锈钢载片。 (2)染菌玻璃载片制备 因培养皿的材质为玻璃，故用培养皿代替玻璃载片进行染菌试验。进行菌液滴染前，用记号笔在培 养皿菌液滴染面的背面画出染菌面积(50mm×50mm)，标注清晰。菌液滴染操作同染菌不锈钢载片 制备。 4.3.4.2. , 试验组: 将消毒剂擦拭在制备好的染菌载片上，消毒剂作用时间分别为8min、10min、12min，不锈钢载片和 玻璃载片每个作用时间分别制备2个。作用结束后，用接触碟取样(接触碟规格:,55mm，取样面 2积为25m)。取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟(编 号:BZW12085);取样白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基接触碟(编号:BZW15129)。 接触碟取样方法:打开接触碟盖，使无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确 保全部琼脂表面与取样面表面均匀接触10秒左右，在盖上跌盖。 , 对照组 对照组的活菌浓度计数见8.3.3。. , 阴性对照: 用接触碟在已灭菌的载片上(未染菌片的载)按压取样，操作同上。每种载片及每种接触碟平行制 备两份。 4.3.4.3. 培养 将取样金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌的接触碟倒置于30,35?培养3天计数;取 样白色念珠菌的接触碟倒置于23,28?培养5天计数计数。 4.3.4.4. 结果计算 计算试验组和对照组的活菌浓度 (CFU/ml)，并换算为对数值(N)，并按下式计算杀灭对数值: Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 13 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 杀灭对数值 (KL),对照组平均活菌浓度的对数值(NO),试验组活菌浓度对数值(NX) 4.3.4.5. 可接受标准 杀灭对数值 (KL)应不低于3~5个对数单位。 4.3.5. 表面试验法记录见附录5 4.4. 现场考察试验 4.4.1. 消毒前对洁净区进行表面微生物取样。 取样地点:固体车间(D级)的制粒间一墙壁和设备表面、小容量注射剂车间(C级)的配液间墙壁 和设备表面、灌封间层流罩(A级)下设备表面。取样操作及检验执行《表面微生物检验》。 4.4.2. 生产操作结束后操作人员按照《生产区清洁》对洁净区进行清洁消毒。 4.4.3. 清洁消毒完毕15分钟后，现场QA对清洁消毒后的洁净区进行表面微生物取样。 取样地点:固体车间(D级)的制粒间一墙壁和设备表面、小容量注射剂车间(C级)的配液间墙壁 和设备表面、灌封间层流罩(A级)下设备表面。取样操作及检验执行《表面微生物检验》。 4.4.4. 至少进行3次试验。 4.4.5. 可接受标准 消毒后: 2 A级:,1CFU/25cm 2 C级:,25CFU/25cm 2 D级:,50CFU/25cm 4.4.6. 现场考察试验记录见附录5 5. 消毒剂有效期确认试验 5.1. 试验目的 通过该试验，确定消毒剂在有效期内是稳定的，并且消毒效力不会变化，符合要求。 5.2. 试验操作 5.2.1. 配制75%乙醇、0.1%新洁尔灭溶液、0.3%新洁尔灭溶液、0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰、60mg/L 的二氧化氯。操作与储存执行《清洁剂和消毒剂管理》。 40mg/L的二氧化氯为配制临配新用，不做有效期考察。 5.2.2. 在消毒剂储存的第0天、第6天、第7天、第8天、第28天、第30天、第32天取样试验。 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 14 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 , 0.1%新洁尔灭溶液、0.3%新洁尔灭溶液、0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰、60mg/L二氧化 氯试验操作同8.2定量悬浮试验。 , 75%乙醇试验操作同8.3表面试验。 5.2.3. 结果计算 计算试验组和对照组的活菌浓度 (CFU/ml)，并换算为对数值(N)，并按下式计算杀灭对数值: 杀灭对数值 (KL),对照组平均活菌浓度的对数值(NO),试验组活菌浓度对数值(NX) 5.2.4. 可接受标准 在消毒液有效期末，杀灭对数值 (KL)应不低于3~5个对数单位。 5.3. 消毒剂有效期确认试验记录见附录6 6. 附录列表 序号 文件名称 1 附录1:验证用试剂与材料 2 附录2:中和剂鉴定试验记录 3 附录3:定量悬浮试验记录 4 附录4:表面试验记录 5 附录5:现场考察试验记录 6 附录6:消毒剂有效期确认试验记录 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 15 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 TEST METHOD VALIDATION PROTOCOL 分析方法验证方案 方案编号(版本号:):Protocol No. (Version:) : (V: )TMP-07-077 分析方法名称TEST METHOD: QUALIFICATION OF DISINFECTANT EFFECTIVENESS AND STABILITY 消毒剂效力及有效期确认方案 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 16 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 PROTOCOL APPROVAL PAGE 方案批准页 PROTOCOL PREPARATION 方案准备 WYETH PHARMACEUTICAL CO., LTD. SIGNATURE 签名 DATE 日期 惠氏制药有限公司 QC Microbial Analyst QC Microbial Analyst PROTOCOL REVIEW 方案复核 QC Senior Analyst QC Manager QAValidation Officer PROTOCOL APPROVAL 方案批准 Senior QO Manager Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 17 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 PROTOCOL REVISION HISTORY PAGE 方案修订历史记录页 REVISION NUMBER REVISION CONTENT VERSION版本号 修订次数 修订 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 0 1 Original原稿 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 18 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 1. 目的PURPOSE .................................................................................................................................... 19 2. 范围SCOPE .......................................................................................................................................... 19 3. 引言INTRODUCTION ....................................................................................................................... 19 4. 参考资料REFENRENCE ................................................................................................................... 19 5. 验证方法TEST METHOD ................................................................................................................. 19 5.1. 所用仪器和物料 .................................................................................................................................. 19 5.2. 测试工作菌种 ...................................................................................................................................... 205.3. 实验程序 ............................................................................................................................................... 20 6. 接受标准 ............................................................................................................................................... 22 6.1. 消毒效力接受标准: ......................................................................................................................... 22 6.2. 中和效力控制及其接受标准: ........................................................................................................ 22 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 19 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 目的PURPOSE 验证惠氏苏州工厂目前使用的几种消毒剂Process LpHse: 酸性、Process Vesphene? se:碱性、 Ethanol 酒精溶液、快活溶液，在不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面等不同材质上 的消毒效力，同时验证消毒剂的使用有效期。 范围SCOPE 本验证需要验证的消毒剂有:Process LpHse: (酸性)、Process Vesphene? se:(碱性)、 Ethanol 酒精溶液、快活溶液FORWARD disinfectant四种。 表1:各消毒剂使用时涉及的材质 消毒剂 类型 适用对象 所涉及的材质 Process LpHse: 酚类消毒剂(广生产设备/器具/车间不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、 酸性 谱、中效) 地面、墙壁、天花板 塑料门帘、墙面 Process 酚类消毒剂(广车间设备/器具/操作不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、Vesphene? se:谱、中效) 间地漏 塑料门帘、墙面 碱性 Ethanol 酒精溶醇类消毒剂(中生产设备/器具/微生不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、 液 效) 物实验室 塑料门帘、墙面 车间地面、墙壁、天季铵盐类消毒不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、快活溶液 花板/非控制区域、车剂(低效) 塑料门帘、墙面 间公用区 引言INTRODUCTION 45本验证的原理是，在某种材质表面接种0.1ml (10-10CFU)的菌种，室温下自然风干后，将消 毒剂直接喷在材质表面，等消毒剂作用一段时间后，检验没有被杀灭的细菌数;根据细菌被杀 灭的数量，来判断消毒剂的杀菌效果。实际消毒操作时，消毒剂喷到要消毒物体表面后，再通 过人为的涂擦等操作使消毒剂与物体表面充分接触，同时，此操作也会机械去除掉一部分微生 物。在该验证中，消毒剂是喷到材质表面，这种方法要比实际消毒时的效果差，因此验证的结 果更能体现实际的消毒效果。 参考资料REFENRENCE Disinfectant Effectiveness Study(812-Analytical Report-0807-1.0) SOPTS-35(V5) 验证方法TEST METHOD 1.1. 所用仪器和物料 , 所用培养皿、移液管、容器均在121度下灭菌30分钟后使用 , 无菌一次性培养皿，移液管。 , 生物安全柜(BHC-1300?A/B生物安全柜)工作窗口吸入风速为?0.5m/s 3 , 灭菌锅 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 20 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 , 培养箱(25度和32度各一个) 1.2. 测试工作菌种 , 大肠埃希菌( CMCC(B)44102)菌种斜面 , 金黄色葡萄球菌 (CMCC(B)26003)菌种斜面 , 白色念珠菌( CMCC98001)菌种斜面 , 环境菌种科氏葡萄球菌斜面(六、九、十月环境检测沉降菌平板上连续检出科氏葡 萄球菌，特选此菌为环境菌种) 需验证的消毒剂应质量合格并在有效期即将结束时开始验证试验，实验所用的仪器设备均在校正合格期限内。 1.3. 实验程序 : 消毒剂的配置 消毒剂按照相关的程序进行稀释，配置好的消毒剂溶液储存在实际操作时使用的喷 壶中，在有效期内(7天)每天模拟日常使用方法使用，第8天开始验证试验。消 毒剂配置方法及消毒反应时间见表2. : 材质的准备 所需的材质均是在实际操作中消毒剂所消毒的表面材质，准备的材质需为无菌材 质，在实验过程中，每个实验组需3块同种材质同时进行。 表2.消毒剂配置方法及消毒反应时间 消毒剂 稀释比例 反应时间 菌种 大肠埃希菌 Process LpHse: 酸金黄色葡萄球菌 1:256(v/v) 3,5,10minutes 性 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 大肠埃希菌 Process Vesphene金黄色葡萄球菌 1:128(v/v) 3,5,10minutes ? se:碱性 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 Ethanol 酒精溶液 75% 2,3,5minutes 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 大肠埃希菌 快活溶液 1:10(v/v) 3,5,10minutes 金黄色葡萄球菌 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 21 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 22 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 菌悬液的制备: 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及环境菌种科氏葡萄球菌的营养琼脂 斜面培养物，接种至营养琼脂斜面上，在35 ~ 37?培养20 ~ 22小时。再接种上 述菌种的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，在35 ~ 37?培养18 ~ 24小时，上述 营养肉汤培养物用0.9%无菌生理盐水溶液逐级10倍稀释，制成每0.1 ml含菌落 45数10-10CFU的菌悬液。 实验操作: 45准备3块待测表面材质于生物安全柜内，分别吸取0.1 ml(10-10CFU)接种于3 块待测表面材质上，让其在生物安全柜中自然风干后待测，将配置好的的消毒装入 喷壶中，均匀地喷洒在材质的表面后立即开始计时，按表2等计时结束后，迅速把 该材质放入100ml的D/E 中和液中，充分振荡1min后经0.45微米的滤膜过滤， 用100ml/次的D/E 中和液冲洗3次，取滤膜放在D/E中和琼脂平板上培养。培养 条件:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及 环境菌种科氏葡萄球菌在 30-35?，至少3天，重复以上实验操作3次，完成验证实验。 阴性控制实验: 100ml的D/E 中和液经0.45-micron的滤膜后，取滤膜放在D/E中和琼脂平板上 培养，培养条件:细菌30-35?，至少3天， 阳性控制实验: 准备3块无菌的待测表面材质于生物安全柜内，分别吸取0.1 ml(10-100CFU)阳性 菌接种于3块待测表面材质上，让其在生物安全柜中自然风干后，将每种带菌的材 质放入100ml无菌的缓冲溶液中，充分振荡1min，经0.45微米的滤膜过滤，用 100ml/次的D/E 中和液冲洗3次，取滤膜放置于D/E中和琼脂平板上培养。培养 条件:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及环境菌种科氏葡萄球菌在 30-35?，至少3天。 接受标准 1.4. 消毒效力接受标准: 计算Log Reduction，评价该种消毒剂对该菌种的杀灭效果， Log Reduction=Log(Average#of Organisms in Control Plates)-Log(Average# of Organisms in Test Plates) 接受标准:Log Reduction?3 1.5. 中和效力控制及其接受标准: 吸5ml已配制好的消毒剂，经0.45微米的滤膜过滤后，用100ml/次中和液冲洗3 次，加入1ml菌悬液(10-100cfu)置滤膜上，用100ml/次中和液冲洗1次，取滤 膜放在D/E中和琼脂平板上培养，计数。每种菌重复做3份样品。分别取上述菌 悬液1ml(10-100cfu)置100*10mm的无菌平皿，浇入约20ml(?45?)TSA 培养，计数。每种菌重复做3份样品。 培养条件:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和环境菌种科氏葡萄球菌 30-35?，至少3天。 根据结果计算回收率: Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Doc. No./编号:2008244712045 Protocol Page/页码: 23 / 23 消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案 CFU Sample MeanPercent Recovery== ，100%CFU Positive Control 接受标准:Percent Recovery?70%