植物叶绿素测定方法的再探讨

植物叶绿素测定方法的再探讨 ; 并且不同植物叶片经同一与前人研究结果一致测定, 大致可分为分光光度计法和活体叶绿素仪 提取液提取, 其叶绿素提取液在长光波段吸收光法 2 大类。 其中, 应用最广泛的是分光光度计法。 说明不同提取液因所用提取叶绿素的溶剂不同, 又有多种测定方 谱也相似, 亦有 = 663 , Κm ax nm 法。用得较多的是 1941 年提出的丙酮 浸提不同植物叶片, 所得叶绿素溶液光学性质基M ack inney 法; 由 年解释和推导的 法以及本相同。 这 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明用 2 种提取液提取不同植物叶片1949 A m on A m on 叶绿素, 可以用 法计算公式来计算叶绿素 80 年代初提出的丙酮乙醇混合液提取法。不同研A m on 含量。究者所用混合液比例不同, 所得结论也不一致。不 同提取液提取不同植物叶绿素, 能否都用 A m on 2. 2 提取介质对叶绿素测定的影响 公式计算。 为了探讨混合液提取法测定大田作物 叶绿素含量的可能性和科学性, 本试验在前人研 以水稻、玉米和棉花功能叶为材料, 用 2 种提 究的基础上, 就不同的提取液对 3 种植物叶绿素 取介质在常温、暗中浸泡提取 6 h 后, 定时测定叶 绿素的吸光度。用同一提取液提取叶绿素, 3 种植含量的影响进行了比较, 并研究了温度、光照条件 物功能叶叶绿素水平有差异, 水稻单位鲜重叶中对叶绿素含量测定的影响。 ( ) 叶绿素水平较高, 而棉花叶绿素水平较低 表 1, 1 材料与方法 这与各植物叶片自身叶绿素合成、降解代谢有关。 以水稻、棉花、玉米的上部功能叶为材料, 取 对同一植物叶片来说, 不同提取介质提取的叶绿 分析纯丙酮和无水乙醇按 2?1 配成混合提取液,, 都表现为丙酮2乙醇混合液提取的 素量存在差异 95% 乙醇提取液, 分别装在棕色玻璃瓶中, 室温或 叶绿素水平高于 95% 乙醇所提叶绿素, 其差异程 度因不同植物而异, 2 种提取液提取水稻叶片,冰箱中存放。对称取叶片 0. 2 左右, 分别剪成宽 g 度小于 1 的细丝、混匀, 放入盛有 10 提取 叶 绿 素 含 量 基 本 相 同, 但 棉 花 叶 片 上 相 差 较 大mm mL ()表 1。 液的具塞试管中, 在不同温度条件下直接浸提, 直 至肉眼观察叶片完全发白, 定容至 20 待用。mL 2. 3 沸水提取对叶绿素水平的影响 2 结果与讨论 用 2 种提取液在常温和沸水条件下提取水稻 和玉米叶片叶绿素, 结果表明, 在不同温度条件下 2. 1 3 种叶片叶绿素提取液的吸收光谱 ()提取叶绿素, 其含量存在差异 表 2。沸水浴会降 用 95% 乙醇和丙酮2乙醇混合提取液分别对 低植物叶片叶绿素水平, 这与高温破坏叶绿素有 水稻、玉米、棉花 3 种植物叶片叶绿素进行提取, 关, 尤其是用 95% 乙醇在常温和沸水浴中浸提水 在 紫外2可见光谱仪上自动扫描叶12 P E L am bda 稻叶片叶绿素, 其含量相差较大, 而所提玉米叶片 Ξ 国家自然科学基金资助项目。 收稿日期: 1999- 03- 18 ( ) 素含量差异很小 表 2, 这可能与玉米起源 2乙醇 2?1 混合液提取的叶绿素在暗中很稳定, , 其叶绿素耐高温或其体内有叶绿素保护其含量在 24 内基本不变, 故表 3 中只列出 1 行 带 h 黑暗中的叶绿素数值。 3 种植物的叶绿素含量随 有关。 用丙酮2乙醇 2?1 混合液在沸水浴和 () 着光下时间延长明显下降, 尤其是在光下 6, 24下所提叶片叶绿素水平基本相似 表 2。 ()之间, 叶绿素水平下降速度很快 表 3。 3 种植 h 光对叶绿素水平的影响 物中, 水稻叶片叶绿素含量在光下下降相对较慢, ( 这可能与水稻品种耐光抑制有关。 叶绿素 的下 将不同植物的叶绿素提取液 丙酮2乙醇 2? a ) () 降速度明显大于叶绿素 表 3, 说明在叶绿素提 合液提取分别臵于暗处、光下 6 、24 后 b hh 提取液中叶绿素含量, 结果如表 3 所示, 丙酮取液中, 叶绿素 比叶绿素 稳定。 b a 表 1 不同提取介质对 3 种叶片叶绿素水平的影响 - 1叶绿素含量ƒ〃 m ggFW村 料 提取方法 ()叶绿素 + 叶绿素 a 叶绿素 b ab水 稻 95% 乙醇 2. 616?0. 081 ?0. 023 ?0. 103 0. 9813. 597 丙酮2乙醇 2. 635?0. 047 0. 989?0. 016 3. 623?0. 031 1. 298?0. 041 0. 447?0. 021 1. 746?0. 042 棉 花 95% 乙醇 丙酮2乙醇 1. 597?0. 173 0. 517?0. 048 2. 113?0. 170 2. 380?0. 005 0. 760?0. 003 3. 147?0. 004 95% 乙醇 玉 米 丙酮2乙醇 2. 543?0. 045 0. 772?0. 024 3. 314?0. 068 表 2 温度对叶绿素水平的影响 - 1叶绿素含量〃ƒ m ggFW村 料 提取介质 温度ƒ? ( )叶绿素 + 叶绿素 a 叶绿素 b ab 水 稻 95% 乙醇 常 温 2. 616?0. 081 ?0. 023 ?0. 103 0. 9813. 597 沸水浴 2. 461?0. 049 0. 863?0. 015 3. 324?0. 064 常 温 2. 635?0. 047 0. 989?0. 016 3. 623?0. 031 ?1 混合液 2 2. 607?0. 096 0. 953?0. 057 3. 561?0. 143 沸水浴 2. 380?0. 005 0. 769?0. 003 3. 149?0. 004 玉 米 95% 乙醇 常 温 2. 354?0. 024 0. 328?0. 013 3. 081?0. 033 沸水浴 2. 543?0. 045 0. 772?0. 024 3. 314?0. 068 常 温 2?1 混合液 沸水浴 2. 535?0. 045 0. 748?0. 031 3. 283?0. 036 - 1 单位: 〃 表 3 光对叶绿素水平的影响 m ggFW 水 稻 棉 花 玉 米 处 理 叶绿素 a 叶绿素 b 叶绿素 a 叶绿素 b 叶绿素 a 叶绿素 b 黑 暗 2. 785?0. 105 ?0. 021 ?0. 089 ?0. 025 ?0. 012 ?0. 008 0. 9551. 5780. 4632. 5740. 750 2. 762?0. 067 0. 953?0. 032 1. 530?0. 076 0. 454?0. 037 2. 561?0. 035 0. 735?0. 014 光下 6 h 2. 553?0. 058 0. 896?0. 024 1. 081?0. 153 0. 423?0. 028 2. 182?0. 028 0. 712?0. 021 光下 24 h 棉花叶片, 对于水稻叶片来说, 2 种提取液, 所得 结论 叶绿素水平基本相同。 沸水浴中可快速提取叶绿 ( 素, 但也会破坏叶绿素, 若能结合提取介质的选 用 不 同 提 取 介 质 丙 酮、丙 酮2乙 醇 混 合 液、 ) 乙醇浸提不同植物材料, 采用分光光度法测 择, 也可减少对叶绿素含量的影响, 例如采用丙酮 取液叶绿素含量, 其吸收光谱在长光波段基2乙醇混合液并加热, 这可快速提取大批量植物样 ()品 如水稻、玉米叶片。光会使提取液叶绿素水平 同, 因此可用 A m on 法公式计算叶绿素含量。 ( 下降, 所以在浸提过程中要尽量避免光照。 前人及本试验结果, 选用丙酮和无水乙醇 2 混合提取液浸提叶绿素效果较好, 尤其是对