[集锦]凝胶电泳缓冲液的配制

[集锦]凝胶电泳缓冲液的配制[集锦]凝胶电泳缓冲液的配制 2(测序凝胶加样缓冲液 98%去离子甲酰胺 10mol/L EDTA(pH8.0) 0.025%二甲苯青FF 0.025%溴酚蓝甲酰胺:许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG混合床树脂8共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70?。 3(常用的电泳缓冲液缓冲液使用液浓贮存液(每升) Tris-乙酸(TAE) 1×...

[集锦]凝胶电泳缓冲液的配制 2(测序凝胶加样缓冲液 98%去离子甲酰胺 10mol/L EDTA(pH8.0) 0.025%二甲苯青FF 0.025%溴酚蓝甲酰胺:许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG混合床树脂8共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70?。 3(常用的电泳缓冲液缓冲液使用液浓贮存液(每升) Tris-乙酸(TAE) 1×:0.04mol/L Tris-乙酸 50×:242g Tris碱 0.001mol/L EDTA 57.1ml冰乙酸 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-磷酸(TPE) 1×:0.09mol/L Tris-磷酸 10×:10g Tris碱 0.002mol/L EDTA 15.5ml85%磷酸(1.679g/ml) 40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) aTris-硼酸(TBE) 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 5×:54g Tris碱 0.001mol/L EDTA 27.5硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) b碱性缓冲液 1×:50mmol/L NaOH 1×:5ml 10mol/L NaOH 1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) cTris-甘氨酸 1×:25mmol/L Tris 5×:15.1g Tris 250mmol/L 甘氨酸 94g 苷氨酸(电泳级)(pH8.3) 0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级) 说明: ?TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。以片都以1×TBE作为使用液(即1:5稀释浓贮液)进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1:10稀释的贮存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。 ?碱性电泳缓冲液应现用现配。 ?Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。 4(2×SDS凝胶加样缓冲液 100mmol/L Tris?HCl(6.8) 200mmol/L二硫苏糖醇(DTT) 4%SDS(电泳级) 0.2%溴酚蓝 20%甘油不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。 5(凝胶加样缓冲液缓冲液类型 6×缓冲液贮存温度 0.25%溴酚蓝 ? 4? 0.25%二甲苯青FF 40%(W/V)蔗糖水溶液 0.25溴酚蓝 0.25%二甲苯青FF ? 室温 15%聚蔗糖(Ficoll400) 0.25%溴酚蓝 0.25%二甲苯青FF ? 4? 30%甘油水溶液 0.25%溴酚蓝 ? 4? 40%(W/V)蔗糖水溶液碱性加样缓冲液: 300mmol/L NaOH 6mmol/L EDTA 18%聚蔗糖(Ficoll400) 0.15%溴甲酚绿 ? 4? 0.25%二甲苯青FF 使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三:增大样品密度;以确保DNA均匀进入样品孔内;使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%,1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。

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