【word】 绵羊棘球蚴病间接血凝试验

【word】 绵羊棘球蚴病间接血凝试验 绵羊棘球蚴病间接血凝试验 中国畜牧兽医文摘2011年27卷第6期基础研究 绵羊棘球蚴病间接血凝试验 艾山江?塔斯坦何晓杰王一明巴音查汗 (1.伊犁职业技术学院,伊宁835000; 2.新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐830052) [摘要]本试验采取健康年青的公绵羊血液制备致敏红细胞,确定了最佳的抗原稀释度为1:4,建立了检测绵羊棘球蚴病 的间接血凝试验,并通过对新疆伊宁市周边地区7O头自然感染绵羊的血清进行了检出率的测定,检出率为100%,rq时进行了特 异性试验和诊断液的保质期的测定,试验证明,间接血凝试验特异性较高,诊断液的保质期较长,可以用于绵羊棘球蚴病的流 行病学调查研究,对有效防治绵羊棘球蚴病奠定基础 [关键词]绵羊棘球蚴病间接血凝集试验检测 棘球蚴病(Echin0coccosis)又称包虫病(Hidatidosis), 是南棘球绦虫的幼虫引起的一种严重危害人,畜健康的人 兽共患寄生虫病,呈世界性分布,主要流行于高原和气 候寒冷的牧区与半牧区”l.棘球绦虫在动物分类学上属于 绦虫纲(Cestoda),圆叶目(Cyclophyllidea),带绦虫 科(Taeniidae),棘球绦虫属(EchinococcusGenus),现 有4个种被公认为独立种,即细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg),多房棘球绦虫(Echinococcusmuhilocularis, Em),少节棘球绦虫(Echinococcusoligarthrus)和伏氏棘球绦虫 fEchinococcusvogeli).这4个种在成虫和幼虫期形态各不相 同】,并可引起不同类型的棘球蚴病.我国主要有2种,即 细粒棘球绦虫(Echinococcusgranulosus,Eg),多房棘球绦虫 (E.multilocularis)It”]o棘球蚴病不但阻碍着畜牧业的生产和发 展,而且也严重影响着人民的身体健康.在我国有2O多个 省,有关于细粒棘球蚴的报道.其中,以新疆为最严重, 绵羊的感染率在50%以上,有的地区甚至高达100%[41,已成 为影响我国西部地区农牧民身体健康和制约牧区经济发展的 一 个重要原因之一,在我国西部开发的战略决策中,应高度 重视包虫病.迄今为止,还没有防治棘球蚴病的有效药物和 最佳疫苗,因此各个地方及时调查发现患畜,疫区,尽早采 取综合性防治 措施 《全国民用建筑工程设计技术措施》规划•建筑•景观全国民用建筑工程设计技术措施》规划•建筑•景观软件质量保证措施下载工地伤害及预防措施下载关于贯彻落实的具体措施 就显得尤为重要.间接血凝试验(IHA)具 有敏感性高,特异性强,凝集清晰和易于判断等优点,适于 临床诊断和流行病学调查I5],此法已用于诊断多种寄生虫病. 本研究建立了检测棘球蚴病的间接血凝试验,为制定绵羊棘 球蚴病综合性防控措施奠定基础. 1材料和方法 1.1抗原的制备 用消毒注射器抽取羊包囊液,四层纱布过滤,滤液装入 透析袋中,用pH7.2,0.15MPBS置冰箱内透析48—72h,每隔 12h换液1次.透析完后于4?冰箱内保存备用. 1.2红细胞处理 1.2.1红细胞的洗涤,固定及鞣化选择健康年青的公绵 羊,南颈静脉采血,与等量阿氏液混合后放置4?冰箱内稳 定3,7d,以3000r/min离心沉积红细胞.用10倍量pH7.2的 0.15MPBS离心洗涤3次,制成5%红细胞悬液.量取100ml~l1 人2.5%戊二醛2Oml,边加边搅.并继续搅拌1h,进行醛化固 定,然后离心常沉淀.再以PBS洗涤8次,并将积压血细胞配 成5%悬液,加入鞣酸2.5mg,充分混合后置37水浴锅内鞣 化15min,离心去上清液,用PBS离洗3次,配成5%醛化鞣化 红细胞悬液,置4?冰箱内保存备用. 1.2.2诊断液的制备取2.5%醛化鞣化红细胞悬液与等量 的包囊液抗原混合后按照1:2,1:4,1:16,1:32进行稀 释,置37?水浴锅内致敏30min,每5min振摇1次.然后按前 述方法离心洗涤3次.积压的致敏红细胞用PBS配成1%红细胞 悬液,按每100ml力?入NaNO.1g混匀后即为1%致敏血细胞诊 断液.置4?冰箱内存放备用. 1.3待检觑清的制备 1.3.1阳性血清制备屠宰后检查感染有棘球蚴病的绵羊, 抽取心血分离血清待检. 1.3.2阴性血清屠宰后检查未发现有棘球蚴病的绵羊,抽 取心血分离血清待检. 1.4试验步骤 本试验反应在96孔(12X8)”V”型孔板上进行,设每 排阳性血清按1:4进行4倍倍比稀释至1:16384,每排最后1 孔为空白对照. 1.4.1血清试验先用接l2号钝头的滴管在反应板每孔内滴 入诊断液3滴,然后分别吸取被检血清各l滴于各自排的第1-fL 内,混匀后依次(横向)进行4倍倍比稀释.空白对照孔不加 任何血清,每孑L内再加入1滴诊断液,用手平拍反应板混合. 置37温箱中静放2—3h观察结果. 1…42结果判定 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 及结果判定 “+++”红细胞在孔底呈均匀的膜样凝集,中心无血 细胞沉点或只有针尖大小的沉积点; “++”红细胞在孔底呈均匀的膜样凝集,中心红细胞 集中的沉点较大; “+”红细胞在孔底部分呈膜样凝集,中心红细胞集中 的沉点较大; “ ?”红细胞沉集于孑L底中心,周围有少量颗粒沉着 物,分界不清晰; “ 一 “红细胞沉集于孑L底中心,周围分界清晰. 判定时,从判定标准的角度:”+++,++”为强阳 性;”+”为阳性;”?”为可疑;”一”为阴性.从血清 滴度的角度:1:64以上为阳性,1:32以下为阴性. 2结果 2.1抗原最佳稀释度的确定 将棘球蚴包囊液按1:2,1:4,1:8,1:16,1:32进 行2倍倍比稀释,分别制成l%致敏红细胞,阳性血清按1:4, 1:16,l:64,l:256,l:1624,1:4096,1:16384进行 4倍倍比稀释,分别进行抗原效价的测定,并作空白对照.结 果详见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1. ? 45? 基础研究中国畜牧兽医文摘2011年27卷第6期 1:2 l:4 1:8 ++ 由表1得知,确定抗原最佳稀释度为l:4EI,-j”检出率较高, 经重复试验也较稳定. 2.2间接血凝试验检出率的测定 我们将采集的阳性绵羊血清70头份和阴性绵羊血清21头 份进行试验,获得结果如下,见表2: 表2间接血凝试验对绵羊包棘球蚴病的检出率 试验证明:自然感染棘球蚴病的绵羊血清7O头份,70份 呈阳性反应,检出率为100%,屠宰观察未发现棘球蚴的绵羊 血清21份,呈阳性反应1份,阳性率为4.8%,敏感性较高. 2.3特异性试验 为了确定本诊断液的实用价值,本试验进行了特异性试 验.结果见表3: 表3特异性试验 从表3可知:50份绵羊棘球蚴病血清,血清以1:4稀释时 阳性检出率为98%;l头绵羊细颈囊尾蚴经检测呈阴性反应, 表明本试验特异性较好. ? 46? 2.4诊断液保质期测定 制备好的l%致敏红细胞悬液,4?冰箱保存6O天重复测 定,基本上保存抗原活力,结果见表4. 中国畜牧兽医文摘2011827卷第6期基础研究 长鬃山羊体检情况介绍 孙学军’张春宝宋琳刘晓明. (1.山东省威海市环翠区畜牧局,威海264200; 2.山东省威海市环翠区动物卫生监督所,威海264200; 3.山东省威海市刘公岛国家森林公园管理处,威海264200) 台湾长鬃【ll羊是我俞湾省唯的野生牛科动物,雌 雄头上均仔角,巾,不脱落,属牛科,俗名有ffI羊,野I【l 羊,台湾羚子,二,湾毡庇等.长鬃?I羊分布:施 “全面禁猎”,并依据”野生动物保育法”将台湾长鬃JlJ羊 列为珍贵稀有的保育类动物,闰际自然保育联盟(IUCN)也 在2002年将之列为稀有动物(vulnerable)等级二,湾嗡埋f 乍牛科物种,外观和同属的H本长鬃1iI羊与苏门答腊长鬃lJI 羊不同,没有长的鬃毛.主要分布枉2000m以上原始林中, 4”C冰 箱内 + 3讨论 新疆地区存在地理气候多样性和适合细粒棘球绦虫寄生 的多种中间宿主,如羊,牛,骆驼,猪,鹿,马,啮齿类野 鼠和人等m,因此新疆地区棘球蚴病的感染率较高,已经严重 影响了新疆畜牧业的发展.本研究采取健康年青的公绵羊血 液制备致敏红细胞,确定了最佳的抗原稀释度,建立了检测 绵羊棘球蚴病的间接血凝试验,并通过对新疆伊宁市周边地 区70头自然感染棘球蚴绵羊的血清进行了检出率的测定,表 明检测率较高;同时与绵羊细颈囊尾蚴血清进行了特异性试 验,表明本方法具有较强的特异性;诊断液于4?内保存60天 仍然具有抗原活力.试验证明,间接血凝试验特异性较高, 诊断液的保质期较长,适于绵羊棘球蚴病的生前诊断和流行 病学调查,但在不同地区采取包囊液,每次制造诊断液时, 需小量致敏血细胞,测定其活力,以确定适宜用量. 参考文献 [1】马秀敏.新疆细粒棘球绦虫基因多态性及实验诊断学研究[DI.新疆 医科大学医学博士学位论文,2007 【2】黄微,刘弟书,丁玉春,等.棘球蚴病的诊断与预防措施[J].兽 医临诊.2011,(264):75,76 [3]蒋次鹏.我国包虫病流行近况】地方病通报,2002,17(3):77,79 【4】达赖.棘球蚴病的防控[J].畜牧与饲料科学,2010,31(1l— l2):192—193 [5】SbihiY,RmiquiA,R0driguez—CabezasMN,eta1.Comparative sensitivityofsixseml0gicaItestsanddiagnosticvalueofELISAusing purifiedantigeninhydatidosis,JClinLabAnal,2001,15(1): 1418 【6】陈德明,雷汉康,金梅等.间接血细胞凝集法诊断家畜棘球蚴病 试验[J1.中国兽医杂志,1982(8):1416. 【7]朵红.棘球蚴病免疫学研究进展【J].中国畜牧兽医,2011,38 (5):244,246 ?47? 加四?? 0000????