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人乙肝酶联免疫分析ELISA试剂盒.doc

人乙肝酶联免疫分析ELISA试剂盒

爱你都是为了疼你
2019-06-23 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《人乙肝酶联免疫分析ELISA试剂盒doc》,可适用于医药卫生领域

人乙肝酶联免疫分析ELISA试剂盒试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围:Tpgmlpgml使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中乙肝(HBV)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人乙肝(HBV)水平。用纯化的人乙肝(HBV)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入乙肝(HBV),再与HRP标记的乙肝(HBV)抗体结合,形成抗体抗原酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乙肝(HBV)呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人乙肝(HBV)浓度。试剂盒组成倍浓缩洗涤液ml×瓶终止液ml×瓶酶标试剂ml×瓶标准品(pgml)ml×瓶酶标包被板孔×条标准品稀释液ml×瓶样品稀释液ml×瓶说明书份显色剂A液ml×瓶封板膜张显色剂B液ml×瓶密封袋个标本要求标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于℃保存,但应避免反复冻融不能检测含NaN的样品,因NaN抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。pgml号标准品μl的原倍标准品加入μl标准品稀释液pgml号标准品μl的号标准品加入μl标准品稀释液pgml号标准品μl的号标准品加入μl标准品稀释液pgml号标准品μl的号标准品加入μl标准品稀释液pgml号标准品μl的号标准品加入μl标准品稀释液加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样μl,待测样品孔中先加样品稀释液μl,然后再加待测样品μl(样品最终稀释度为倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。温育:用封板膜封板后置℃温育分钟。配液:将倍浓缩洗涤液用蒸馏水倍稀释后备用洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置秒后弃去,如此重复次,拍干。加酶:每孔加入酶标试剂μl,空白孔除外。温育:操作同。洗涤:操作同。显色:每孔先加入显色剂Aμl,再加入显色剂Bμl,轻轻震荡混匀,℃避光显色分钟终止:每孔加终止液μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定:以空白空调零,nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度再乘以稀释倍数或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀倍数,即为样品的实际浓度。注意事项试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物请避光保存。严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期试剂盒保存:℃。有效期:个月

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